專利名稱：普拉迪霉素類抗生素的生產的制作方法
技術領域：
本發明涉及生產普拉迪霉素(Pradimicin)類抗生素的發酵方法，以及所述抗生素的生產微生物。
由馬杜拉放線菌(Actinomadura)產生的普拉迪霉素家族已報導了各種不同的成員，其中美國專利4，973，673所公開的普拉迪霉素FA-1(Ia)和FA-2(Ib)含有D-絲氨酸部分。已有人報導了一種與普拉迪霉素密切相關的化合物即苯納諾霉素(benanomicin)A(Ⅱ)(J.Antibiot.，41∶807-811，1988)，它與普拉迪霉素的不同之處在于缺少普拉迪霉素的糖氨基。1991年6月19日公開的歐洲專利申請432，527公開了化合物4′-脫氨基-4′-直立羥基普拉迪霉素FA-2(Ⅲ，以下簡寫為BMY-28960)，該化合物是用化學方法從普拉迪霉素FA-2制得的。EP432，527還一般性地公開了脫木糖基BMY-28960，它可由脫木糖基普拉迪霉素FA-2制得。
Ⅰa∶R1＝CH2OH;R2＝NHCH3Ⅰb∶R1＝CH2OH;R2＝NH2Ⅱ∶R1＝CH3;R2＝OHⅢ∶R1＝CH2OH;R2＝OH
制備BMY-28960及其脫木糖基衍生物的化學方法既困難又費力，產物的產率也低。因此，迫切需要適于大量生產這些抗生素的替代方法。經過仔細尋找能夠產生BMY-28960和脫木糖基BMY-28960的微生物，結果發現，屬于馬杜拉放線菌屬的一個新的微生物菌株是這樣一種抗生素生產菌。
本發明提供一種制備下式抗生素的方法，
其中R為氫或β-D-木糖基該方法包括在有氧條件下，在含有可吸收碳源、氮源和D-絲氨酸源的含水培養基中，培養能夠產生所述抗生素的馬杜拉放線菌菌株;從培養液中回收所述抗生素。生產菌優選馬杜拉放線菌AB1236，即ATCC55208。在一個優選實施方案中，發酵培養基中還含有D-環絲氨酸。
本發明的另一方面提供微生物馬杜拉放線菌AB1236的生物純培養物，該培養物具有ATCC55208的鑒定特征，并且在含有可吸收碳源、氮源和D-絲氨酸源的含水培養基中培養時，能夠產生BMY-28960和脫木糖基BMY-28960。


圖1是BMY-28960的紅外光譜(KBr)。
圖2是BMY-28960的1H核磁共振譜(DMSO-d6，400MHz)。
圖3是BMY-28960的13C核磁共振譜(DMSO-d6，100MHz)。
圖4是脫木糖基BMY-28960的紅外光譜(KBr)。
圖5是脫木糖基BMY-28960的1H核磁共振譜(DMSO-d6，400MHz)。
本發明提供一種適于大量生產BMY-28960和脫木糖基BMY-28960的發酵方法。該方法使用了一種屬于馬杜拉放線菌屬的新微生物。
Ⅰ、BMY-28960生產微生物的篩選從分離自土壤樣品的放線菌中各取一環，以片狀接種到三個瓊脂平板上，然后于37℃下培養1至2周。這三個瓊脂平板是葡萄糖-酵母-大豆胨(Soytone)瓊脂(葡萄糖1%、酵母提取物0.05%、大豆胨(Difco Laboratories)0.05%、CaCl2·2H2O 0.01%、瓊脂1.5%);甘油-酵母-大豆胨瓊脂(甘油1%、酵母提取物0.05%、大豆胨0.05%、CaCl2·2H2O 0.01%、瓊胨1.5%);淀粉-酵母-大豆胨瓊脂(可溶性淀粉1%、酵母提取物0.05%、大豆胨0.05%、CaCl2·2H2O 0.01%、瓊脂1.5%)。取每塊瓊脂平板中產生深粉色至深紅色可擴散色素的菌株，接種到裝有100ml生產培養基的500ml錐形瓶中，并于32℃下旋轉振蕩(200rpm)培養。生產培養基的組成為甘油2%、Esusan mito(味之素株式會社)1.5%、CoCl2·6H2O 0.0001%、KH2PO40.1125%、K2HPO40.0025%、D-絲氨酸0.2%。培養10天后，用白假絲酶母A9540作受試菌，對上清液進行瓊脂井試驗，從而監測培養液中BMY-28960的產生。將顯示出抗假絲酵母活性的培養液離心，用DMSO稀釋10倍，過濾(GelmanSciencesJapan，Ltd.，Ekicrodisc13CR，孔徑0.45μm)。對濾液進行HPLC和TLC分析。HPLC分析用乙腈0.02M磷酸鹽緩沖液，PH7.0(15∶85)在ExcelPakSTL-C185R(橫河電機株式會社)上進行，流速為1ml/分，在254nm處檢測;TLC分析在硅膠薄層板(硅膠60F2540.25mm;Merck公司制造)上進行。所用的展開劑體系為正丁醇∶乙酸∶水(2∶1∶1，BW-14)和乙酸甲酯正丙醇28%氨水(45∶105∶60，S-114)。BMY-28960用上述溶劑體系時的HPLC保留時間為11.5分鐘，用BW-14和S-114時的Rf值分別為0.50和0.24。
對各種放線菌進行篩選發現，屬于馬杜拉放線菌屬的AB1236株以適于大量生產的水平產生所希望的化合物。以下將描述AB1236株的分類特征。
Ⅱ、BMY-28960生產菌馬杜拉放線菌AB1236是從1990年10月24日在日本東京都新竹區采集的土壤樣品中分離出的新菌株。按照《關于國際上承認用于專利程序的微生物保藏的布達佩斯條約》，AB1236株的培養物已保藏于美國典型培養物保藏中心，本申請被授予專利后，對公眾獲取該保藏微生物的所有限制都將永遠取消。該保藏培養物已指定登記號為ATCC55208。
A.AB1236株的形態和培養特征用于該菌株分類研究的培養基和方法為文獻中所述的培養基和方法(Shirling和Gottlieb，“鑒定鏈霉菌的方法”，Int.J.Syst.Bact.，16∶313-340，1966;Waksman，Actinomycetes第二卷，“屬和種的分類、鑒定和描述”第328-334頁，TheWilliamsandWilkins公司出版，Baltimore，1961;Arai，CultureMediaforActinomycetes，日本放線菌學會出版，1975)。將該菌株于37℃下培養2至4周。根據《色名手冊》(JapanColorEnterpriseCo.，Ltd，1987)把培養物的顏色與色片做比較，從而確定顏色。
在20和41℃之間的溫度下，AB1236株在有機培養基上比在無機培養基上的生長情況要好，并形成分枝營養菌絲體。在酵母淀粉瓊脂和酵母-淀粉-麥芽瓊脂(YSM，可溶性淀粉1%、酵母提取物0.1%、麥芽汁0.1%、CaCl2·2H2O 0.05%、瓊脂1.5%)上，成熟氣生菌絲體的顏色都是白至灰白色。在光學顯微鏡和掃描電子顯微鏡下，短孢梗的頂端每條單鏈上有2至8個孢子。這些孢子的形狀為近球形(大小為0.8-1.0×1.0-1.2μm)，表面光滑。這些孢子不運動。營養菌絲體和可擴散色素在有機瓊脂培養基上的顏色為柔粉色至深紅色。加入0.1N HCl使顏色由柔橙色變為濃黃橙色。AB1236株在各種瓊脂培養基上的培養特性概括于表1。
B.AB1236株的生理特征AB1236株的生理特征和碳源利用情況分別示于表2和表3。
表2AB1236株的生理特征試驗結果淀粉水解(ISP4號培養基)+硝酸鹽還原(Difco,硝酸鹽培養液)-10%脫脂乳(Difco,10%脫脂乳)凝固+胨化-纖維素分解(蔗糖硝酸鹽溶液,用一張紙條-作唯一的碳源)明膠液化不生長黑素形成(ISP7號培養基)-生長溫度范圍(℃)20-41最適溫度(℃)(酵母淀粉瓊脂)30.5-35.5生長PH范圍6-8最適PH(胰酶解酪蛋白大豆肉湯,BBL)7-陰性+陽性表3AB1236株的碳源利用碳源利用D-葡萄糖+L-阿拉伯糖+D-木糖+肌醇+甘露醇+D-果糖+L-鼠李糖+蔗糖+棉子糖++陽性(ISP9號培養基，37℃，3周)用抗生素圓片(Tridisk，Eiken Chemical CO.，Ltd.)測試AB 1236株的抗生素敏感性。把圓片置于已接種AB 1236株(4%種菌)的酵母-葡萄糖-麥芽瓊脂(酵母提取物0.1%、葡萄糖1%、麥芽汁0.1%、CaCl2·2H2O 0.05%、瓊脂1.5%)表面上，然后把培養皿于37℃下培養4天。AB1236株對50μg磷霉素和300單位多粘菌素B有抗性，對下列抗生素敏感20單位氨芐青霉素、1μg棒酸、2μg羧噻吩青霉素、10μg頭孢氨芐、30μg四環素、10μg氯霉素、0.5μg紅霉素、2μg交沙霉素、2μg林可霉素、5μg卡那霉素、5μg慶大霉素、5μg妥布霉素、2μg萘啶酸、2μg norfloxacin、50單位多粘菌素E。
C.AB1236細胞的化學分析用Becker和Lechevalier所述的方法分析全細胞組成(“用全細胞水解液紙色譜法快速鑒別諾卡氏菌和鏈霉菌”，Appl.Microb.，12∶421-423，1964;“好氣放線菌各種形態屬菌株的細胞壁制備物的化學組成”，Appl.Microb.，13∶236-243，1965)。AB1236株含有內消旋二氨基庚二酸、馬杜拉糖(madurose)、核糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖。因此，AB1236株的細胞壁屬于ⅢB型。用Minnikin等人的方法(“利用全菌體甲醇解產物的薄層色譜分析鑒別分枝桿菌、諾卡氏菌和相關分類群”，J.Gen.Microb.，88∶200-204，1975)未檢測出霉菌酸。用Lechevalier等人的方法(“具有重要臨床意義的好氣放線菌的鑒定”，J.Lab.Clin.Med.，71∶934-944，1968;“好氣放線菌的化學分類學磷脂組成”，Biochem.Syst.Ecol.，5∶249-260，1977)進行磷脂分析表明，AB1236株的細胞壁為P1型，含有二磷脂酰肌醇甘露糖苷、磷脂酰肌醇和二磷脂酰甘油。用Collins等人的方法(“關于用反相薄層色譜法分離細菌甲基萘醌類天然混合物的報告”，J.Appl.Bacteriol.，48∶277-282，1980)分析甲基萘醌組成的結果為47%MK-9(H8)、35%MK-9(H6)、10%MK-9(H4)和8%MK-9(H10)。用Suzuki等人的方法(“某些棒狀細菌中細胞脂肪酸組成的分類意義”，Int.J.Syst.Bacteriol.，33∶188-200，1983)測得的全細胞脂肪酸的組成為49%14-甲基十五烷酸(異16∶0)、13%14-甲基十六烷酸(反異-17∶0)、8%10-甲基十七烷酸(10Me-17∶0)，以及少量其他脂肪酸。
AB1236株的形態、培養和化學分類特性與馬杜拉放線菌屬相一致，也與由Kroppenstedt等人提出的該屬的定義相一致(“馬杜拉放線菌屬和小四孢菌屬的分類修訂”，System.Appl.Microbiol.，13∶148-160，1990)。因此，AB1236株被鑒定為馬杜拉放線菌屬的一個種。
Ⅲ.抗生素的生產可以在常用于生產普通發酵產物的條件下，由AB1236株生產BMY-28960和脫木糖基BMY-28960。將生產菌培養在營養培養基中，培養基中除含有放線菌的已知營養源即可吸收的碳源和氮源加上或有或無的無機鹽和其他已知生長因子外，還含有可吸收的D-絲氨酸源。對大量生產抗生素來說優選采用深層通氣條件，但對有限量生產來說也可采用表面培養和瓶內培養。
作為可吸收的D-絲氨酸源，既可以使用D-絲氨酸，也可以使用DL-絲氨酸。可吸收碳源的例子有甘油;糖類，如核糖、葡萄糖、蔗糖、纖維二糖;淀粉;其他碳水化合物，如葡聚糖。可吸收氮源的例子有氯化銨、硫酸銨、尿素、硝酸銨、硝酸鈉，以及有機氮源，如胨、肉膏、酵母提取物、玉米浸液、大豆粉、棉子粉等。如有必要還可加入無機鹽如氯化鈷和磷酸鉀。另外，在生產培養基中加入蘇氨酸可提高抗生素的產量。蘇氨酸可以是D-蘇氨酸、L-蘇氨酸或其混合物。加入D-環絲氨酸可進一步提高抗生素的產量。一種優選的液體培養基是實施例2或實施例3所述的培養基。另一種更為常規的液體培養基的組成為葡萄糖和/或甘油(1-4%)、Pharmamedia(1-3%)、KH2PO4(0.1-0.2%)、D-絲氨酸(0.1-0.2%)。可以使用烷醇、硅酮等作為消沫劑。
抗生素的生產可以在適于使生產菌的生長令人滿意的任何溫度下進行。通常，經過5-14天的搖瓶培養后能使抗生素的產量最佳，但在某些情況下可能需要更長的時間。搖瓶的通氣通過攪動來實現，例如在旋轉搖床上振蕩。如果要進行罐式發酵，最好由菌體的斜面培養或冷凍干燥培養物制成液體培養物，然后將其接種在營養液體培養基中使其產生營養接種物。以這種方式得到有活性的接種物后，將其無菌轉移到發酵罐培養基中。發酵罐的攪動通過攪拌來實現，通氣可通過向攪動著的混合物中注入空氣或氧氣來實現。抗生素的生產過程可以用色譜技術或分光技術來監測，也可用常規的生物測定法來監測。優選的發酵條件為在PH5-8和20-37℃下通氣培養5-14天，優選在PH6-7和28-35℃下通氣培養5-12天。
雖然本發明用具體的微生物菌株描述了抗生素的生產，但人們公知，放線菌的分類特性可以發生自然變異或人工變異。因此應當理解，本發明的方法不限于已提到的特定微生物，而是包括了用各種人工方法(如紫外光或X光照射)或化學誘變劑(如N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍)由該特定菌株衍生的變異株和突變株。可以用本公開中前面所述的方法對所產生的突變株和變異株進行篩選，看其是否產生抗生素。
Ⅳ.抗生素的分離和純化可以用分離親水性酸性物質的常規方法，從培養液中分離BMY-28960和脫木糖基BMY-28960。上述方法的例子包括有機溶劑萃取、離子交換樹脂、分配色譜、酸性沉淀。這些技術既可單獨使用也可組合使用。一種示例性的分離純化方法如下。發酵完成后，將培養液調至pH2.0，離心或過濾。使所得到的上清液或濾液吸附到多孔高聚物樹脂如DiaionHP-20(三菱化成株式會社)上，用水互溶性有機溶劑如甲醇或丙酮洗脫。將所得的流出液濃縮并冰凍干燥，得到粗制抗生素復合物。為進一步純化，可將該粗品加到反相硅膠柱如YMC-ODSA60(YamamuraChemicalLab.)上，用乙腈0.02M磷酸鹽緩沖液(PH7.0)洗脫。合并含BMY-28960的部分并脫鹽，得到純的BMY-28960。用類似的分離純化方法可得到脫木糖基BMY-28960，但最好不酸化發酵液。
Ⅴ.抗生素的物理化學性質用本發明的方法制得的BMY-28960具有下列物理化學性質，這些性質與用EP432，527所公開的半合成法制得的BMY-28960相同。
(1)外觀無定形深紅橙色粉末(2)熔點＞220℃(逐漸分解)(3)FAB-MS(正)m/Z 844(M+H)+(4)分子式C39H41NO20(5)紫外吸收光譜λmaxnm(∈)0.02NNaOHMeOH(1∶1)211(34，700)，320(15，100)，498(14，100)(6)紅外光譜如圖1所示(7)在溶劑中的溶解度易溶二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺和堿性水微溶乙醇、甲醇和丙酮不溶乙酸乙酯、苯、氯仿、酸性水等(8)薄層色譜(硅膠板)Rf＝0.24(乙酸甲酯∶正丙醇∶28%氨水＝45∶105∶60)
(9)HPLC分析柱Cosmosil 5C18-AR，5μm，4.6mm內徑×150mm洗脫劑CH3CN0.02M磷酸鹽緩沖液，pH7.0(15∶85)流速1.0ml/分紫外檢測器254nm保留時間11.5分內標普拉迪霉素A(保留時間＝9.7分)(10)1H NMR譜如圖2所示(11)13C NMR譜如圖3所示脫木糖基BMY-28960具有下列物理化學性質(1)外觀深紅橙色粉末(2)熔點＞180℃(3)HR-FAB-MS(正)m/z 712.1871(M+H)+(4)分子式C34H33NO16(5)紫外吸收光譜λmaxnm(∈)H2O-MeOH-DMSO(4.5∶4.5∶1)∶470(10，100)，0.02NHCl-MeOH-DMSO(4.5∶4.5∶1)∶461(10，600)0.02NNaOH-MeOH(1∶1)∶213(31，500)，242(30，100)，320(13，600)，498(12，600)(6)紅外光譜(KBr)νmaxcm-1如圖4所示(7)在溶劑中的溶解度易溶二甲亞砜、二甲基甲酰胺和堿性水微溶乙醇、甲醇、丙酮和乙腈不溶酸性水、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿和其他普通有機溶劑
(8)1H NMR譜如圖5所示。
Ⅵ.抗生素的生物活性用常規瓊脂稀釋法，在含有1/15M磷酸鹽緩沖液(PH7.0)的酵母形態瓊脂上，測定由本發明發酵方法制得的BMY-28960和脫木糖基BMY-28960的體外抗真菌活性。結果示于表4和表5。
用雄性ICR小鼠(體重20-24g)評價BMY-28960對抗白假絲酵母A9540全身性感染的體內效力。每個劑量用五只小鼠。取懸浮在鹽水中的病原體，以半致死劑量給小鼠靜脈感染10次，并在感染后立即靜脈給予一次BMY-28960。由第21天記錄的存活率計算半保護劑量(PD50)。結果概括于表6。
表6在小鼠體內對抗白假絲酵母A9540全身性感染的體內效力化合物 PD50(mg/kg,靜脈)BMY-289606.7普拉迪霉素A10兩性霉素B0.31Fluconazole>50ICR小鼠對BMY-28960的耐受力很強，在靜脈給予BMY-28960高達600mg/kg后，既沒有觀察到致死作用，也沒有觀察到明顯副反應。
提供下列實施例以更充分地說明本發明，但不應誤認為這些實施例是要以某種方式限制本發明的范圍。
實施例1.種子培養取生產菌即馬杜拉放線菌AB1236(ATCC 55208)的原培養物，在YSM瓊脂斜面上劃線，并于37℃下培養2周。取一環菌株接種在一個裝有100ml培養基的500ml錐形瓶中，培養基的組成為葡萄糖0.5%、可溶性淀粉2%、酵母提取物0.2%、NZ-case 0.3%、魚粉提取物D30x(Banyu Eiyou K.K.)0.5%、CaCO30.3%(高壓滅菌前將培養基的pH調至7.0)。將該培養物置于旋轉搖床上于32℃下培養5天，作為種子培養物使用。
實施例2瓶發酵將實施例1所述的種子培養物分成5ml為一份，每份分別轉移至裝有100ml生產培養基的500ml錐形瓶中，培養基的組成為甘油2%、Esusan mi-to(大豆粉，味之素株式會社)1.5%、K2HPO40.0025%、KH2PO40.1125%、CoCl2·6H2O 0.0005%、D-絲氨酸0.125%，以及D-環絲氨酸(Wako Pure Chemical Industries Ltd.)10μg/mg。將該培養物置于轉速為200rpm的旋轉搖床上，于28℃下培養12天，此時BMY-28960的產量達到530μg/ml。
實施例3瓶發酵(加入蘇氨酸的影響)將實施例1所述的種子培養物分成5ml為一份，每份分別轉移至裝有100ml生產培養基的500ml錐形瓶中，培養基的組成為甘油2%、Pharmamedia(Traders Protein)1.5%、KH2PO40.1%、L-或D-蘇氨酸0.2%、CoCl2·6H2O 0.0005%、D-絲氨酸0.2%、D-環絲氨酸10μg/ml。將該培養物置于轉速為200rpm的旋轉搖床上，于28℃下培養11天。為觀察蘇氨酸對BMY-28960產量的影響，還在不加蘇氨酸的情況下進行了發酵。結果概括如下氨基酸BMY-28960產量L-蘇氨酸1008μg/mlD-蘇氨酸954-780
實施例4BMY-28960的分離純化用6NHCl將實施例2的發酵液(2.0升)酸化至pH2.0，離心。將上清液(1.7升)加到DiaionHP-20柱(300ml)上，該柱先用水(1.5升)洗，再用1.6升甲醇洗脫。將流出液濃縮，然后冰凍干燥，得到2.1g粗制固體物。將此固體物溶于1升水中，用1NNaOH將溶液的PH調至6.3。將該溶液加到DiaionHP-20柱上，該柱先用0.002NHCl∶丙酮(1∶1)混合物洗，再用1升0.002NNaOH丙酮(1∶1)混合物洗脫。將流出液濃縮得到一種固體物(690mg)。取一部分(400mg)固體溶于乙腈0.02M磷酸鹽緩沖液，PH7.0(12.5∶87.5，30ml)中，并加到已用同一溶劑體系平衡過的YMC凝膠ODSA60柱(500ml，YamamuraChemicalLab.)上進行色譜分離。用同樣的溶劑進行洗脫。將含BMY-28960的部分濃縮，用DiaionHP-20脫鹽，冰凍干燥，得到BMY-28960(82mg)。
實施例5脫木糖基BMY-28960的分離純化將通過AB1236株在D-絲氨酸存在下發酵而制得的培養液(25升)離心。使上清液(27升)通過3.8升Diaion HP-20。將該樹脂依次用80%丙酮水溶液(8升)和丙酮-0.01N HCl(60∶40)混合物(12升)洗，再用丙酮-0.01N NaOH(60∶40)混合物(12升)洗脫，得到16.04g粗品。將該復合物(2g)溶于200ml CH3CN-0.02M磷酸鹽緩沖液，PH7.0(13∶87)混合物中，并加到已用同一溶劑體系平衡過的YMC凝膠ODS-A60柱(10升，Yamamura Chemical Lab.)上。用溶解樣品所用的溶劑體系進行洗脫，流出液用HPLC監測(柱Cosmosil5C18AR，5μm，4.6mm內徑×150mm，Nacalai Tesque Inc.;流動相CH3CN-1/15M磷酸鹽緩沖液，PH3.5(27∶73);流速1.0ml/分;檢測254nm處的紫外吸收;保留時間脫木糖基BMY-28960 8.3分，BMY-28960 7.6分)。將較快洗脫出的含脫木糖基BMY-28960的紅色部分(3.7升)濃縮，并加到Diaion HP-20柱(30ml)上進行色譜分離，用丙酮-0.1N NaOH(60∶40)混合物(50ml)作洗脫劑。將紅色流出液濃縮并冰凍干燥，得到29mg固體物。用0.1N HCl將樣品水溶液(30ml)調至pH2.5，沉降出純的脫木糖基BMY-28960(19mg)。對由YMC凝膠色譜中較慢洗脫出的部分(24升)進行類似的后處理，得到700mg純的BMY-28960。
權利要求
1.一種制備下式抗生素的方法，
其中R為氫或β-D-木糖基該方法包括在有氧條件下，在含有可吸收碳源、氮源和D-絲氨酸源的含水培養基中，培養能夠產生所述抗生素的馬杜拉放線菌菌株；從培養液中回收所述抗生素。
2.根據權利要求1的方法，其中所述馬杜拉放線菌菌株是命名為AB 1236的菌株，它保藏在美國典型培養物保藏中心，登記號為ATCC 55208。
3.根據權利要求1的方法，其中所述培養基還含有D-環絲氨酸。
4.根據權利要求2的方法，其中所述培養基還含有D-環絲氨酸。
5.根據權利要求3的方法，其中所述培養基還含有蘇氨酸。
6.根據權利要求4的方法，其中所述培養基還含有蘇氨酸。
7.一種微生物馬杜拉放線菌AB 1236的生物純培養物，它具有ATCC 55208的鑒定特征，并且在含有可吸收碳源、氮源和D-絲氨酸源的含水培養基中培養時，能夠產生權利要求1所述的抗生素。
全文摘要
本發明涉及生產BMY-28960和脫木糖基BMY-28960的發酵方法，并涉及屬于馬杜拉放線菌屬并被命名為AB1236株的新的BMY-28960生產菌(ATCC55208)。
文檔編號A61P31/04GK1069286SQ9210591
公開日1993年2月24日 申請日期1992年7月20日 優先權日1991年7月31日
發明者古米保, 羽鳥正己, 角正甫, 池田千治, 齋藤恭一郎, 小原清吉 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司