專利名稱：獼猴桃提取物及其提取方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種獼猴桃提取物，此外，還涉及一種該獼猴桃提取物的提取方法，以及其在制備降血糖藥物方面的應用；尤其涉及一種獼猴桃提取部位在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物在降血糖方面的應用。
背景技術：
稱猴桃為稱猴桃科植物稱猴桃(Actinidia chinensis Planch)的果實，又名藤梨、獼猴梨、羊桃等，生于山地林間或灌叢中，常纏繞在他物上。分布于中南及陜西、江蘇、安徽、浙江、江西、福建、四川、貴州、云南等地，味酸、甘，性寒。歸胃。肝、腎經。具有解熱、止渴，健胃，通淋之功能。主治煩熱、消渴，肺熱干咳，消化不良，濕熱黃疸，石淋，痔瘡。查閱文獻發現，獼猴桃果中富含揮發性成分、多種維生素、有機酸、黃酮、獼猴桃堿、多糖及多種人體必需的氨基酸和微量元素等多種化學成分，藥理研究表明，其具有降血脂、抗脂質過氧 化、拮抗細胞毒性、抗突變、保肝、防癌、提高免疫力等方面的藥理活性，具備了食用兼藥用的功能，但關于獼猴桃在α -葡萄糖苷酶抑制劑方面的研究未見報道，需要進一步深入研究，開發其在糖尿病治療藥物方面的實際應用。糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發的糖、蛋白質、脂肪、水和電解質等一系列代謝紊亂綜合征，包括以胰島素絕對缺乏為主的I型糖尿病及以胰島素相對缺乏和胰島素抵抗為主的II型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊類型的糖尿病。臨床上以高血糖為主要特點，典型病例可出現多尿、多飲、多食、消瘦等表現，即“三多一少”癥狀，糖尿病(血糖)一旦控制不好會引發并發癥，導致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。目前，糖尿病在世界范圍內已成為繼心腦血管疾病、腫瘤之后嚴重危害人類健康的第三大慢性病。糖尿病是世界公認的頑癥之一，人們得了糖尿病后很難治愈，通常需要長期服藥；病癥的持續期可以長達幾十年。糖尿病的主要危害不是糖尿病本身，而是在糖尿病發展過程中出現的各種慢性并發癥。糖尿病引起的大血管病變可以導致動脈硬化、舒縮功能障礙及加重血管損傷后內皮炎性反應和血管平滑肌增殖等，造成動脈粥樣硬化和冠心病等糖尿病心血管疾病；而糖尿病微血管病變則會引起高血壓、糖尿病腎病和糖尿病視網膜病變。雖然現代醫學技術已能有效地控制大多數患者的血糖，但仍無法有效地預防和治療糖尿病引發的慢性并發癥。由于糖尿病并發癥的高發性和嚴重性，糖尿病已經成為世界第五大致死性疾病。隨著我國近年來經濟和社會發展水平迅速提高，引起了人們生活方式和飲食結構的變化，我國糖尿病患病率也呈明顯上升趨勢。我國糖尿病患病率已從1980年的O. 67%上升到2004年的5. 5%，增加了 9倍，在2012年世界衛生統計中首次把關于高血糖患者的數據納入了其中，盡管全球平均患病率約為10%，但在一些太平洋島嶼國家，高達三分之一的人口患有該病癥。不及時治療，糖尿病會導致心血管疾病、失明和腎功能衰竭。目前，我國的糖尿病患者數量僅次于印度，是世界上糖尿病第二大國。更令人擔憂的是，據世界衛組織預測，到203年時，我國的糖尿病患者人數有可能翻一倍，因此，預防和治療糖尿病已成為我國乃至全球性的保健問題。近年來研究發現，糖尿病病發過程中往往先出現餐后高血糖，而后發展成糖尿病，即前者是后者的先期征兆。對于糖尿病患者，特別是II型病人，餐后高血糖對機體的危害遠遠超過空腹高血糖,餐后高血糖不僅極易誘發各種并發癥,還會極大地提高糖尿病的死亡率，所以降低餐后血糖是預防糖尿病，減少并發癥和降低死亡率的重要措施之一，也就是說控制餐后血糖是控制高血糖、防治糖尿病的重要舉措。在糖尿病病人中，約90%以上的糖尿病病人屬II型糖尿病，目前主要通過口服降糖藥，控制空腹血糖來達到治療目的，治療藥物長期以來主要集中于促胰島素分泌劑如磺脲類(格列本脲、格列吡嗪)，主要用于降低正常人或者胰島素功能尚未完全喪失的糖尿病患者的血糖；增強外周葡萄糖利用的藥物如雙胍類藥物(苯乙雙胍、二甲雙胍)，對無論有無胰島功能的糖尿病患者均有降糖作用，這兩類藥在降低空腹血糖的同時也會帶來較大的副作用，而且對降低餐后血糖的作用不明顯。 α -葡萄糖苷酶抑制劑是一類以延緩腸道碳水化合物吸收而達到治療糖尿病的口服降糖藥物。目前逐漸取代磺脲類和雙胍類降糖藥，被廣泛應用于臨床，此類藥物有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。其作用機制為競爭性抑制位于小腸的各種α-葡萄糖苷酶，使淀粉類分解為葡萄糖的速度減慢，從而減緩腸道內葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。α -葡萄糖苷酶抑制劑能有效的控制餐后血糖的升高，預防糖尿病的發生，減少并發癥的出現，降低死亡率，此外，不刺激β細胞分泌胰島素，但可降低餐后胰島素水平，說明可增加胰島素的敏感性。

發明內容
本發明的目的在于提供一種獼猴桃提取物。本發明的目的還在于提供一種該獼猴桃提取物的提取方法。進一步地，本發明的目的在于提供一種獼猴桃提取物在降血糖方面的應用。更進一步地，本發明的目的還在于提供一種獼猴桃提取部位在制備降血糖藥物方面的應用，尤其是制備α-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用。為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了一種獼猴桃提取物，由以下方法提取獲得取新鮮的帶皮獼猴桃，將其切碎，用甲醇加熱回流提取兩次，依次為I. 5 — 2. 5h、
0.5-1. 5h ;將兩次提取液合并、過濾，濃縮得獼猴桃甲醇總提取物；獼猴桃甲醇總提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓抽濾，濃縮分別得到獼猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。所述的提取物為獼猴桃的石油醚提取物、乙酸乙酯提取的或正丁醇提取物中的一種或其任意組合。本發明的技術方案還在于采用了一種獼猴桃提取物的提取方法，包括以下步驟的方法取新鮮的帶皮獼猴桃，將其切碎，用甲醇加熱溫度為60— 80°C回流提取兩次，依次為
1.5-2. 5h、0. 5-1. 5h ;將兩次提取液合并、過濾，濃縮得獼猴桃甲醇總提取物；獼猴桃甲醇總提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓抽濾，濃縮分別得到獼猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。
另外，本發明的技術方案還采用了一種獼猴桃提取物在降血糖方面的應用；尤其是在制備降血糖藥物方面的應用。同時，本發明的技術方案還采用了一種獼猴桃提取物在制備α -葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用及獼猴桃提取物制備的α-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物在糖尿病體內降血糖方面的應用。本發明的獼猴桃提取部位來自于獼猴桃的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取部位。本發明所采用的獼猴桃提取部位來源于獼猴桃科獼猴桃屬植物獼猴桃的果實，生于山地林間或灌叢中，常纏繞在他物上。分布于中南及陜西、江蘇、安徽、浙江、江西、福建、四川、貴州、云南等地。經體外α-葡萄糖苷酶抑制活性實驗篩選，阿卡波糖(Acarbose)為陽性對照藥，觀察獼猴桃石油醚提取部位(ACPE)、乙酸乙酯提取部位(ACEA)和正丁醇提取部位(ACBU)三種提取部位對α-葡萄糖苷酶的抑制作用，實驗結果表明獼猴桃各提取部位對α-葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，而且在一定質量濃度范圍內呈劑量依賴性，當抑制率達到一定程度后，在增加其質量濃度，抑制活性不在增加。其中在相同初篩質量 濃度(1500yg/mL)時，各提取部位的抑制率均大于96%，接近100%，均大于陽性對照藥(57. 26%);從各提取部位的半數抑制濃度IC5tl值分析ACPE對α -葡萄糖苷酶的抑制活性最高(IC50=57. 8 μ g/mL)，其次為 ACEA (IC50=84. 7 μ g/mL)和 ACBU (IC50=124. 7 μ g/mL)，其活性均遠高于陽性對照(IC5tl=I 103. 01 μ g/mL)。經體內實驗以阿卡波糖(Acarbose)為陽性對照，觀察獼猴桃石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三種提取部位對四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠的治療作用，實驗結果表明，獼猴桃ACPE、ACEA和ACBU對四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠均有一定的治療作用，可以通過促進肝糖原的合成，降低肝糖元的分解等途徑，降低糖尿病的空腹血糖以及餐后血糖水平；降低血清中TCH和TG的含量，改善糖尿病并發癥，如高血脂，糾正糖尿病小鼠的脂質代謝紊亂；通過降低血清中MDA的含量，升高SOD水平，增強糖尿病小鼠機體的抗氧化功能，保護機體免受自由基的進一步傷害，進而達到治療糖尿病的作用。


圖I為本發明的不同提取部位質量濃度對α-葡萄糖苷酶抑制活性影響的曲線圖。
具體實施例方式實施例I本實施例的獼猴桃提取物由以下方法提取獲得，取新鮮的帶皮獼猴桃，將其切碎，用甲醇加熱70°C回流提取兩次，依次為2h、lh，兩次提取液合并、過濾，濃縮得獼猴桃甲醇總提取物，總提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓抽濾，濃縮得到獼猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。不同溶劑獼猴桃提取部位的得率見表I。實施例2本實施例為獼猴桃提取物的體外α -糖苷酶抑制活性試驗方法96微孔板法
原理a -D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-a -D-吡喃葡萄糖苷(PNP-G)，產生硝基苯酹(ΡΝΡ,黃色物質,在405nm處有最大吸收)，α -葡萄糖苷酶抑制劑可抑制α -葡萄糖苷酶與底物結合從而降低PNP的釋放量。以一定時間內反應體系中PNP的含量變化來計算提取部位的酶抑制活性。儀器LRH_150恒溫培養箱(上海一恒科技有限公司);DELTA 320型pH計(美國Mettler-Toledo 公司)；Multiskan MK3 酶標儀(美國 Thermo Electron 公司);電子天平(美國Mettler-Toledo公司);旋轉蒸發儀(德國Heidolph公司)。試劑α-葡萄糖苷酶(a-glucosidase，EC3. 2. I. 20)和 4_ 硝基苯-a-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-a-D-glucopyranoside, PNPG,026K1516)均購自美國 Sigma 公司；阿卡波糖(Acarbose, Lot 16869,德國Serva公司);二甲亞砜(DMS0,分析純,天津市德恩化學試劑有限公司)；磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)。檢測方法112 μ L磷酸鉀緩沖液(pH 6. 8)，加入濃度為O. 2U/mL α -葡萄糖苷酶20 μ L，8 μ L樣品溶液，37 V恒溫15min，加入20 μ L2. 5mmol/L PNPG, 37 V恒溫反應15min。再加入80 μ L、濃度為O. 2mol/L的終止劑Na2CO3溶液，于405nm波長下測OD值。實驗共設一下4組樣品組(樣品+緩沖液+酶+底物)、樣品對照組(樣品+緩沖液)、空白組(DMS0+緩沖液+酶+底物)、空白對照組(DMS0+緩沖液)，每組3個平行，于405nm處測OD值，按下面計算公式計算抑制率，并用Origin 6. O軟件求出相應的IC5tl值。
權利要求
1.一種獼猴桃提取物，其特征在于由以下方法提取獲得取新鮮帶皮獼猴桃，將其切碎，用甲醇加熱回流提取兩次，依次為I. 5— 2. 5h、O. 5— I. 5h ;將兩次提取液合并、過濾，濃縮得獼猴桃甲醇總提取物；獼猴桃甲醇總提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓抽濾，濃縮分別得到獼猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。
2.根據權利要求I所述的獼猴桃提取物，其特征在于所述的提取物為獼猴桃的石油醚提取物、乙酸乙酯提取的或正丁醇提取物中的一種或其任意組合。
3.一種獼猴桃提取物的提取方法，其特征在于包括以下步驟的方法取新鮮的帶皮獼猴桃，將其切碎，用甲醇加熱回流提取兩次，依次為I. 5—2. 5h、0. 5—1. 5h ;將兩次提取液合并、過濾，濃縮得獼猴桃甲醇總提取物；獼猴桃甲醇總提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓抽濾，濃縮分別得到獼猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。
4.根據權利要求3所述的獼猴桃提取物的提取方法，其特征在于所述的加熱溫度為60—80。。。
5.一種如權利要求I所述的獼猴桃提取物在降血糖方面的應用。
6.一種如權利要求I所述的獼猴桃提取物在制備降血糖藥物方面的應用。
7.—種如權利要求I所述的獼猴桃提取物在制備α-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用。
8.—種如權利要求I所述的獼猴桃提取物制備的α-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物在糖尿病體內降血糖方面的應用。
全文摘要
本發明涉及一種獼猴桃提取物及其提取方法和應用，該獼猴桃提取物由以下方法提取獲得:取新鮮帶皮獼猴桃，將其切碎，用甲醇加熱回流提取兩次，依次為1.5-2.5h、0.5-1.5h；將兩次提取液合并、過濾，濃縮得獼猴桃甲醇總提取物；獼猴桃甲醇總提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓抽濾，濃縮分別得到獼猴桃石油醚提取部位、乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位。經體內實驗以阿卡波糖(Acarbose)為陽性對照，觀察獼猴桃石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三種提取部位對四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠的治療作用，實驗結果表明，獼猴桃ACPE、ACEA和ACBU對四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠均有一定的治療作用。
文檔編號A61K36/185GK102861114SQ20121038536
公開日2013年1月9日 申請日期2012年10月8日 優先權日2012年10月8日
發明者康文藝, 楊保成, 彭濤, 尹震花 申請人:河南大學