專利名稱：尼泊爾酸模提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種尼泊爾酸模提取物，還涉及一種該尼泊爾酸模提取物的 提取方法，以及其在制備降血糖藥物方面的應用；尤其涉及一種尼泊爾酸模 提取物在制備a-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用。
背景技術：
尼泊爾酸模(7 wwex恥戶/m^Spreng.)為蓼科酸模屬植物，分布于河南、 陜西、甘肅、青海、湖北、四川、云南和西藏等省。全草入藥，有清熱解毒、 涼血止血之效，是一種常見的民間草藥。現代研究表明，尼泊爾酸模根含活 性蛋白-凝集素，能使3%兔紅血球發生凝集反應。此外，有文獻報道尼泊爾 酸模根甲醇提取物具有瀉下和鎮靜作用。但未見對尼泊爾酸模化學成分和其 他藥理作用的研究報道。
糖尿病是一種以高血糖為特征，代謝紊亂為表現，與胰島素分泌密切相 關的全身性疾病，作為最普通的內分泌疾病之一，糖尿病是一種由于遺傳和 環境因素相互作用而引起的臨床綜合癥，臨床上表現為三多(多食、多飲、 多尿)、 一少(體重下降)、高血糖癥狀。根據世界衛生組織的報道，1995 年全球已確診的糖尿病患者約1.35億，而近期IDF 2006年報道全球糖尿病患 者己達2， 46億，預測到2025年糖尿病患者將達到3.88億。2003年中國已 經成為糖尿病第二大國，僅次于印度。2004年，我國糖尿病患者已達4000萬， 專家估計，至2010年我國發病人數將達到6000萬，已成為威脅人類的第3 位"健康殺手"，因此，預防和治療糖尿病已成為我國乃至全球性的保健問 題。多年來糖尿病的治療主要以控制空腹血糖為目標，治療藥物長期以來主 要集中于磺脲類與雙胍類藥物。近年來研究發現，糖尿病病發過程中往往先 出現餐后高血糖，而后發展成糖尿病，即前者是后者的先期征兆。對于糖尿 病患者，特別是II型病人，餐后高血糖對機體的危害遠遠超過空腹高血糖，
3餐后高血糖不僅極易誘發各種并發癥，還會極大地提高糖尿病的死亡率，所 以降低餐后血糖是預防糖尿病，減少并發癥和降低死亡率的重要措施之一， 也就是說控制餐后血糖是控制高血糖、防治糖尿病的重要舉措。現有治療的 糖尿病藥物中，磺脲類藥物是通過刺激胰島素的分泌而降低血糖；雙胍類藥 物則是通過增加外周組織對葡萄糖的利用而降低血糖，兩者對降低II型糖尿 病病人空腹血糖均有較好療效，但對降低餐后血糖的作用卻非常有限。
cc-葡萄糖苷酶抑制劑是七十年代后期研究開發出的一類新型口服降血糖 藥物，其作用機理在于通過競爭性抑制a-葡萄糖苷酶的活性，阻滯雙糖水
解成單糖，延緩糖的吸收，使血糖平穩并緩慢地維持在一定水平。有效的控 制了餐后血糖的升高，并可預防糖尿病的發生，減少了并發癥和降低了死亡
率。a-葡萄糖苷酶抑制劑不僅對糖尿病有確切的療效，而且對于肥胖癥、慢性 乙肝、艾滋病及腫瘤都有一定的治療作用。
目前用于臨床的此類藥物有阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇。天然產 物中的a -葡萄糖苷酶抑制劑是近年來研究的熱點，研究發現主要的a -葡萄糖 苷酶抑制劑結構類型為黃酮類、生物堿類和皂苷類，此外還有茶多酚類。黃 酮類化合物主要是通過多羥基結構發揮抑制作用，并且羥基組的糖化作用會 減弱化合物對a -葡萄糖苷酶的抑制作用。生物堿類也是多羥基生物堿具有抑 制作用。 一些中草藥的提取物也具有很好的抑制a-葡萄糖苷酶的作用，如綠
茶提取物和大黃、山茱萸、赤芍、五倍子水煮醇沉提取物，以及廣西血竭全 粉和分步提取物、五味子和虎杖的水提取物等。現有的此類藥物成本較高， 生產廠家很少，同時伴隨有腸道副作用。

發明內容
本發明的目的在于提供一種尼泊爾酸模提取物。 本發明的目的還在于提供一種該尼泊爾酸模提取物的提取方法。 進一步地，本發明的目的在于提供一種尼泊爾酸模及其提取物在降血糖 方面的應用。
更進一步地，本發明的目的還在于提供一種尼泊爾酸模提取物在制備降
4血糖藥物方面的應用，尤其是制備a-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用。
為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了一種尼泊爾酸模提取物， 包括尼泊爾酸模根及尼泊爾酸模根菜的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物或甲 醇提取物。
尼泊爾酸模提取物由以下方法制備而獲得，取干燥的尼泊爾酸模根或尼
泊爾酸模地上部分，并將其粉碎，石油醚浸泡10—15h后，連續回流提取2 —4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸模根或尼泊爾酸模地上部分的石油醚提 取物；揮干石油醚溶劑后，按用乙酸乙酯浸泡10—15h后，連續回流提取2 一4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸模根或尼泊爾酸模地上部分的乙酸乙酯 提取物；揮干乙酸乙酯溶劑后，用甲醇浸泡10—15h后，連續回流提取2—4 次，每次0.5—1.5h，提取，得尼泊爾酸模根或尼泊爾酸模地上部分的甲醇提 取物。
本發明的技術方案還在于采用了一種尼泊爾酸模提取物的制備方法，包 括以下步驟取干燥的尼泊爾酸模根或尼泊爾酸模地上部分，并將其粉碎， 石油醚浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸 模根或尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物；揮干石油醚溶劑后，按用乙酸 乙酯浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸模 根或尼泊爾酸模地上部分的乙酸乙酯提取物；揮干乙酸乙酯溶劑(后，用甲 醇浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，提取得尼泊爾酸 模根或尼泊爾酸模地上部分的甲醇提取物。
進一步，本發明的技術方案采用了一種尼泊爾酸模在降血糖方面的應用。 同時，本發明的技術方案還采用了一種尼泊爾酸模提取物在降血糖方面 的應用。
更進一步地講，本發明的技術方案采用了一種尼泊爾酸模提取物在制備 降血糖藥物方面的應用，尤其是制備a-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用。 本發明的尼泊爾酸模提取物來至于尼泊爾酸模根的石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物和尼泊爾酸模地上部分的石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物。本發 明所采用的尼泊爾酸模提取物來源于蓼科酸模屬植物，分布廣泛，資源豐富， 具有價格低廉，方便易得的優點。經體外實驗以阿卡波糖為陽性對照，觀察
尼泊爾酸模根的石油醚提取物(RNRP)、乙酸乙酯提取物(RNRE)和甲醇提 取物(RNRM)和尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物(RNAP)、乙酸乙酯提取 物(RNAE)和甲醇提取物(RNAM)等六種提取物對ct-葡萄糖苷酶的抑制作用， 實驗結果表明尼泊爾酸模各提取物對ot-葡萄糖苷酶均有明顯的抑制作用，而 且在一定濃度下呈量效關系，其中在相同濃度(1.5 mg/ml)時，各提取物的 抑制率均達到100%，大于陽性對照藥(68.43%);而各提取物的半數抑制濃 度IC5o值均小于100嗎/mL，遠小于陽性對照藥(1081.27 pg/mL)。


圖1為抑制劑濃度對cc-葡萄糖苷酶抑制效果的影響曲線圖； 圖2為尼泊爾酸模地上部分乙酸乙酯提取物抑制劑的Lineweave-Burk雙倒
數曲線；
圖3為尼泊爾酸模地上部分甲醇提取物抑制劑的Lineweave-Burk雙倒數曲線。
具體實施例方式
實施例1
本實施例的尼泊爾酸模提取物，由以下方法制備而得取干燥的尼泊爾
酸模根，并將其粉碎，用石油醚浸泡12h后，在索氏提取器中連續回流提取3 次，每次lh，得尼泊爾酸模根的石油醚提取物(RNRP);揮干石油醚溶劑后， 按用乙酸乙酯浸泡12h后，在索氏提取器中連續回流提取3次，每次lh，得 尼泊爾酸模根的乙酸乙酯提取物(RNRE);揮干乙酸乙酯溶劑后，用甲醇浸 泡12h后，在索氏提取器中連續回流提取3次，每次lh，提取得尼泊爾酸模 根甲醇提取物(RNRM)。 實施例2本實施例的尼泊爾酸模提取物，由以下方法制備而得取干燥的尼泊爾 酸模地上部分，經粉碎，用石油醚浸泡12h后，于索氏提取器中連續回流提 取3次，每次lh，得尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物(RNAP);揮干溶
劑后，用乙酸乙酯浸泡12h后，在索氏提取器中連續回流提取3次，每次lh， 得尼泊爾酸模地上部分乙酸乙酯提取物(RNAE);揮干溶劑后，用甲醇浸泡 12h后，在索氏提取器中連續回流提取3次，每次lh，得尼泊爾酸模地上部 分甲醇提取物(RNAM)。
尼泊爾酸模不同溶劑提取物的得率見表1。
實施例3
本實施例為尼泊爾酸模提取物的抑制《-糖苷酶活性試驗
方法微孔板法
原理oe-D-葡萄糖苷酶催化水解4-硝基苯-c(-D-吡喃葡萄糖苷(PNP-G)， 產生硝基苯酚(PNP，黃色物質，在400 m左右有最大吸收)，ct-糖苷酶抑制 劑可抑制ct-葡萄糖苷酶與底物結合從而降低PNP的釋放量。以一定時間內反 應體系中PNP的含量變化來計算提取物的酶抑制活性。
儀器Multiskan MK3酶標儀(Thermo Electron) ; LRH-150恒溫培養箱
(上海一恒科技有限公司)；DELTA 320型PH計(Mettler-Toledo);電子天平
(Mettler-Toledo);旋轉蒸發儀(Heidolph)。
試劑:ct-葡萄糖苷酶(Sigma公司，EC 3.2.1.20， from baker's yeast，批號 105K1313),對-硝基苯基-a-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG， Sigma公司，批號 026K1516),磷酸鹽緩沖液(PH 6.8)，阿卡波糖(拜糖平，Sigma公司，批 號16869)，其他試劑均為分析純。 檢測方法
112L磷酸鉀緩沖液(pH6.8)，加入20iiL (濃度為0.2U/mL ) ot-葡萄糖 苷酶，8 iiL樣品溶液，37。C恒溫15min，加入20 (iL 2.5 mmol/L PNPG， 37°C 恒溫反應15 min。再加入80 )iL(濃度為0.2 mol/L)的終止劑Na2C03溶液，于405nm波長下測OD值。實驗共設4個組，每組三孔，分別為a.陰性對照組；b. 空白組；c.樣品測定組；d.樣品對照組。按下面方法計算抑制率，并用Origin軟 件求出相應ICso值。
抑制率計算/% = 1_(0/>樣品組—0/)樣品對照組)><100%
(^D陰性對照組一OZ)空白組)
分別利用上述測定方法測定了尼泊爾酸模各提取物和陽性對照阿卡波糖
的ic50。
實驗結果如表l所示。
表l 尼泊爾酸模的ct-葡萄糖苷酶抑制活性 Table 1 The ct-glucosidase inhibitory activity of i 訓ex "印a/em7X Spreng.
提取物提取率初篩終濃度抑制率ic50抑制類型
(%)(mg/mL)(1%)(|xg/mL)
RNRP0.771.5102.2136.01NT
RNRE2.181.597.503.83NT
RNRM28.381.5100.8422.50NT
RNAP2.451.5102.6456.59NT
RNAE1.431.5101.152.13非競爭型
RNAM9.411.5100.462.13混合型
Acarboss一1.568.431081.27NT
注NT表示未測定。
(1)從表l可以看出，尼泊爾酸模根和尼泊爾酸模地上部分的各提取物 的ICso值均遠小于陽性對照藥阿卡波糖；顯示尼泊爾酸模的各提取物均有很 好的a-葡萄糖苷酶抑制作用。其中，尼泊爾酸模的乙酸乙酯提取物的ICso值 最小，顯示其抑制效果最好，其次為甲醇提取物，石油醚提取物的ICso值最 大；不同藥用部位比較，尼泊爾酸模地上部分的乙酸乙酯提取物抑制活性 (IC5Q=2.13嗎/mL)和甲醇提取物抑制活性(1<:5()=2.13 pg/mL)較尼泊爾酸模根 的同溶劑提取物抑制活性(1(:5。=23.83 pg/mL和22.50嗎/mL)高，其石油醚提取 物抑制活性(1<:5()=56.59嗎/mL)較尼泊爾酸模根(ICf36.01嗎/mL)的弱。(2) 圖1顯示，尼泊爾酸模不同部位不同溶劑的提取物對《-葡萄糖苷酶的
抑制活性均呈劑量依賴性，其中地上部分石油醚提取物在終濃度小于0.2 mg/mL時達到最大抑制率100M，此后再增加提取物濃度抑制率不再變化，其 他提取物在終濃度小于O.l mg/mL時，其抑制率就達到了最大值100%，此后， 再增加提取物濃度抑制率也不再變化。說明小劑量的尼泊爾酸模各提取物均 能很好的抑制cc-葡萄糖苷酶活性。
(3) 不同濃度的尼泊爾酸模地上部分乙酸乙酯提取物和甲醇提取物分別 加入不同濃度的底物(分別為1Ommol/L， 5 mmol/L， 2.5 mmol/L， 1.25mmol/L 和0.625 mmol/L)，按照上述方法測定不同底物濃度下的反應速度。按 Lineweave-Burk作圖以1/[S]為橫坐標1/V為縱坐標，分別繪制不同提取物的 抑制作用動力學曲線，確定抑制類型。由圖2可知尼泊爾酸模地上部分的乙 酸乙酯提取物的抑制類型為非競爭性抑制類型，反應速度^^隨著抑制劑濃 度的增大而變小，米氏常數Km保持不變。抑制劑濃度越大，Ki值越小，抑制 愈強。而圖3顯示的尼泊爾酸模地上部分的甲醇提取物部分則屬于混合型抑
制類型，反應速度^ax隨著抑制劑濃度的增大而變小，米氏常數Km也隨抑制
劑濃度的增大而降低。
實驗結果表明，尼泊爾酸模各提取物對cc-葡萄糖苷酶均有很強的抑制作
用，其中，以尼泊爾酸模地上部分乙酸乙酯提取物和甲醇提取物效果更明顯。
說明尼泊爾酸模是很好的a-葡萄糖苷酶抑制劑，可以用于制備降血糖藥物。 實施例4
尼泊爾酸模降糖片的制備，其制備方法
稱取尼泊爾酸模地上部分乙酸乙酯提取物250重量份，加入淀粉200重 量份、乳糖50重量份，聚維酮15重量份后加入適量70%的乙醇作潤濕劑混勻制成軟材，以14目篩制粒，于6(TC溫度下干燥后過12目篩整粒，加入硬 脂酸鎂5重量份，交聯聚維酮8重量份，壓片，制成1000片。
最后所應說明的是以上實施例僅用以說明，而非限制本發明的技術方
案，盡管參照上述實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員
應當理解依然可以對本發明進行修改或者等同替換，而不脫離本發明的精
神和范圍的任何修改或局部替換，其均應涵蓋在本發明的權利要求范圍當中。
權利要求
1、一種尼泊爾酸模提取物，其特征在于包括尼泊爾酸模根及尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物或甲醇提取物。
2、 根據權利要求1所述的尼泊爾酸模提取物，其特征在于由以下方法 提取獲得，取干燥的尼泊爾酸模根或尼泊爾酸模地上部分，并將其粉碎，石油醚浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸模 根或尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物；揮干石油醚溶劑后，按用乙酸乙 酯浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸模根 或尼泊爾酸模地上部分的乙酸乙酯提取物；揮干乙酸乙酯溶劑后，用甲醇浸 泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，提取，得尼泊爾酸模 根或尼泊爾酸模地上部分的甲醇提取物。
3、 一種如權利要求1所述尼泊爾酸模提取物的制備方法，其特征在于 包括以下步驟取干燥的尼泊爾酸模根或尼泊爾酸模地上部分，并將其粉碎， 石油醚浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸 模根或尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物；揮干石油醚溶劑后，按用乙酸 乙酯浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，得尼泊爾酸模 根或尼泊爾酸模地上部分的乙酸乙酯提取物；揮干乙酸乙酯溶劑后，用甲醇 浸泡10—15h后，連續回流提取2—4次，每次0.5—1.5h，提取得尼泊爾酸模 根或尼泊爾酸模地上部分的甲醇提取物。
4、 一種尼泊爾酸模在降血糖方面的應用。
5、 一種尼泊爾酸模提取物在降血糖方面的應用。
6、 一種尼泊爾酸模提取物在制備降血糖藥物方面的應用。
7、 一種尼泊爾酸模提取物制備cc-葡萄糖苷酶抑制劑類藥物方面的應用。
全文摘要
本發明公開了一種尼泊爾酸模提取物及其提取方法和應用，該提取物包括尼泊爾酸模根及尼泊爾酸模地上部分的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物或甲醇提取物。實驗結果表明尼泊爾酸模各提取物對α-葡萄糖苷酶均有明顯的抑制作用，而且在一定濃度下呈量效關系，其中在相同濃度(1.5mg/ml)時，各提取物的抑制率均達到100％，大于陽性對照藥(68.43％)；而各提取物的半數抑制濃度IC₅₀值均小于100μg/mL，遠小于陽性對照藥(1081.27μg/mL)。
文檔編號A61K36/70GK101461845SQ20091006405
公開日2009年6月24日 申請日期2009年1月12日 優先權日2009年1月12日
發明者劉瑜新, 宋艷麗, 康文藝 申請人:河南大學