專利名稱：：鮮五味子提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及到來源于植物原料的提取物及其制備方法和應用，屬醫藥、食品、保健品領域，具體涉及鮮五味子提取物的制備方法。
背景技術：
：五味子，屬木蘭科植物，落葉木質藤本，其果實可入藥。其味酸甘而性溫，偏于收斂固澀、止汗、止咳、止遺，又補益肺腎之氣、生津止渴、寧心安神。現代藥理研究證實，本品有以下幾個方面的作用可增強中樞神經系統興奮與抑制過程的平衡，改善人的智力活動，提高工作效率。可用于治療神經衰弱，健忘癥及延緩衰老；調節血壓，對循環衰竭者升壓作用頗為顯著。可用于防治低血壓癥；具有強心作用，可使心肌收縮有力，舒張完全而顯著。可用于治療心肌收縮無力引起的心慌氣短、困倦乏力；有明顯的止咳、祛痰作用。可用于治療呼吸系統疾病；促進膽汁分泌，調節胃液分泌。可用于治療消化液分泌失常引起的各種病變；雙向調節糖的代謝。可用于治療糖代謝紊亂引起的病變；改善視力、聽力，擴大視野。可用于防治目疾及聽力異常；明顯降低血清谷丙轉氨酶的活性，有保肝的作用。可用于防治肝病。綜上所述，五味子確系保健之佳品，療疾之良藥。特別適合中老年人和長期從事腦力勞動、夜間工作、生活不規律以及體弱多病、視聽力衰退者長期使用。為了開發這一資源，申請為86106050的發明專利申請公開說明書中介紹的一種五味子滋補飲料，它是采用鮮果裝袋直接榨取汁，加蔗糖配成含果汁43%、糖50%，水7%的高糖汁，氮氣保護下貯存，其特點是工藝簡單，便于原料就地加工。但該產品沒充分利用鮮五味子果仁；申請號為99112892的發明專利申請說明書中介紹一種五味子果汁飲料的制備方法，采用天然五味子果汁經過科學方法將原輔料一調配一殺菌一灌裝一質檢一成品。其特點具有色澤呈淡寶石紅，清澈透明，光澤，入口后酸甜適中，清涼爽口，生律止渴，不用添加香精和色素，含有l5種氨基酸及多種礦質元素，蛋白素、維生素等營養物質，是一種營養價值較高的保健飲料。但該產品只適合于食品飲料的生產，沒充分利用鮮五味果子仁。本發明旨在對鮮五味子的綜合利用，其特點是以鮮五味子為原料，采用分離、提取、分散技術制成鮮五味子果肉提取物及果仁提取物，適用不同的人群。國內相關產品都是以五味子的干燥成熟果實為原料，本發明專利與以上相關專利相比，有效成分保留更多，藥效更明顯，成本更低。故發明本專利具有廣泛的市場前景。
發明內容本發明的目的在于研制出適應工業化生產的鮮五味子提取物和制備方法。為實施本發明的目的所采取的技術方案是采用木蘭科植物五味子的鮮成熟果實，加水220倍量，于50。C95。C條件下，攪拌1小時10小時，通過10目~80目布袋離心，或鮮果中加入適量水用搓籽機分離得果汁和果仁。果汁經管式離心得離心液，將其濃縮至相對密度為1.01.2(5(TC湖iJ)的流浸膏，向流浸膏中加入乙醇，使其濃度為50%~80%，沉淀4小時以上，取上清液濃縮至無醇味，得浸膏或干燥成干膏，得鮮五味子果肉提取物；取離心渣用水漂洗1~5次，收集五味子果仁，烘干至水分小于15%，果仁粉碎成粗粉，加815倍量溶劑回流提取1~3次，提取液回收完溶劑后加入適量輔料用膠體磨分散均勻，經真空干燥或噴霧干燥得到總木脂素含量為1.0%~15.0%的鮮五味子果仁提取物。采用的原料為木蘭科植物五味子的鮮成熟果實，該植物分布在東北吉林、遼寧、黑龍江等地，產量多。為了方便應用，鮮五味子果肉提取物可將浸膏進一步干燥得含水量小于5%的干品。而且也方便添加各種輔料，制備各種劑型作藥品、食品、保健品或飲料用。本發明所提供的制備方法得到的提取物可添加各種輔料，作藥品、食品或保健品用。本發明的有益效果是1、該發明所述的分離、提取技術操作簡單、生產成本低，適于工業化批量生產。2、該發明的鮮五味子果仁提取物與五味子干果做的提取物相比，具有五味子特有的香氣，無酸味，顏色與五味子果仁接近。3、該發明所得提取物，可用于制備保肝，降谷丙轉氨酶，久嗽虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠，延緩衰老的藥物，飲料，食品，保健品。下面通過具體實施例的藥效試驗來證實五味子提取物的應用具體實施方案取五味子的鮮成熟果實100Kg，加水4倍量，于8(TC條件下，攪拌3小時，通過40目布袋離心，分離得果汁和果仁。果汁經管式離心得離心液，將其濃縮至相對密度為1.15(50。C測)的流浸膏，向流浸膏中加入乙醇，使其濃度為60%，沉淀12小時，取上清液濃縮至無醇味，干燥，得鮮五味子果肉提取物；取果仁用水漂洗3次，收集五味子果仁，烘干至水分小于9%，果仁粉碎成粗粉，分別加7倍量、5倍量85%的乙醇回流提取2次，時間為2.0小時、1.5小時，提取液回收完溶劑后加入12KgP—環糊精用膠體磨分散均勻，經真空干燥得鮮五味子果仁提取物(總木脂素含量為8.7%)。用上述所得的鮮五味子果肉提取物及果仁提取物試驗如下一、鮮五味子果肉提取物對睡眠時間的影響實驗方法取昆明種小鼠54只，雄性，體重18g—22g隨機分為3組。①空白對照組與給藥組等體積的生理鹽水，n=18;②艾司唑侖片組(1.3mg/kg體重)，n=18;③五味子果肉提取物組(5.0g/kg體重)，n=18。實驗步驟與觀察指標式各組動物按上述劑量口服灌胃60min后，腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉(62.50mg/kg)，觀察各組實驗動物，以翻正反射消失為入睡時間，從翻正反射消失至恢復翻正反射時間為睡眠持續時間，記錄每只小鼠的睡眠時間。表l五味子提取物對小鼠睡眠時間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從表l中可以看出，五味子果肉提取物能延長戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時間，與對照組相比，平均延長10min;艾司唑侖片能延長戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時間，與對照組相比，平均延長12min。與對照組相比，五味子果肉提取物、艾司唑侖片對戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時間影響，經t檢驗有統計學意義，說明五味子肉提取物和艾司唑侖片均對戊巴比妥鈉小鼠有延長睡眠時間的作用。二、鮮五味子果肉提取物延緩衰老作用的實驗實驗方法:ICR小白鼠，雌雄各半，體重(20士2)g，將小鼠隨機分為4組，每組10只。分別為空白組、模型組、維生素E^C組、五味子果肉提取物組。空白組皮下注射生理鹽水0.lral/10g，造模第lld起灌胃蒸餾水O.lml/10g;模型組皮下注射D—半乳糖0.lmlZ10g，造模第lld起灌胃蒸餾水0.lml/10g;維生素E—C組皮下注射D—半乳糖0.lml/10g,造模第lld起灌胃維生素E"C顆粒O.lral/10g;五味子果肉提取物組皮下注射D—半乳糖0.lml/10g，造模第lld起灌胃五味子果肉提取物每天O.lml/10g。實驗周期42d;跳臺實驗將小鼠分別放人反射箱內，適應3min，然后通電，小鼠受到電擊時，其正常反應是跳上跳臺以躲避電擊，絕大多數小鼠會再次跳下跳臺，受到電擊又跳回去，訓練持續5min，隔24h進行測試。測試時將小鼠置于跳臺上，小鼠每次從跳臺上跳下或雙足同時接觸電銅柵為1次錯誤，記錄它第1次錯誤的時間(潛伏期)和5min內的錯誤次數；血清超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)各組小鼠末次給藥跳臺測試后，將小鼠通過摘眼球取血的方法，取血清待測，隨后頸椎脫臼處死小鼠，迅速取出肝臟，用冰冷的生理鹽水漂洗，濾紙吸干，精稱0.4g，加生理鹽水3.6ml，勻漿管中制成10%肝勻漿,3000r/rain離心10min，在-20。C冷凍待測。SOD采用黃嘌呤氧化酶法測定，MDA采用硫代巴比妥酸比色分析法測定。跳臺實驗結果見表2。表2各組小鼠跳臺實驗結果比較(FlO,x士s)iij潛伏期(s)錯誤次數<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>模型組57.00±9.01###4.70±1.34#s*維生素E-C組60.70±11.343.50土1.84'五味子肉提取物組77.20±7.38'2.60±1.35*"表2表明，五味子果肉提取物具有一定的增強記憶力的作用。對衰老模型小鼠自由基的影響見表3。表3各組小鼠血清和肝組織中SOD、MDA測定結果(FlO,x±s)組別血清組SOD肝組織SOD血清MDA肝組織MDA空白組模型組維生素E-C組139.07±11.8889.05±34.21s"117.24±19.81*807.72±279.86562.89±133.36**701.60±186.046.91±1.1311.90±3.88##8.82±1.92*4.76±0.897.63±1.94flflS5.86土1.28'五味子肉提取物組131.52±16-41'*797.72±241.04"7.09±0.74"5.36±0.81**表3表明五味子果肉提取物各給藥組小鼠血清和肝組織中的SOD活性均有所提高，而MDA含量均降低，說明五味子果肉提取物具有延緩衰老的作用。本實驗結果證明鮮五味子果肉提取物可以改善衰老小鼠的記憶能力，提高血清和肝組織中的SOD活性和MDA含量，具有一定的延緩衰老的作用。三、鮮五味子果肉提取物對呼吸系統的影響對小鼠氣管酚紅排泌的影響取體重1822g小鼠40只，雌雄兼用，隨機分為鮮五味子果肉提取物組、遠志陽性對照組和生理鹽水空白對照組。實驗前一天小鼠饑餓過夜，禁食不禁水。分別ig給藥，藥后45min，每只小鼠ip5X酚紅生理鹽水溶液0.5ml，注射酚紅后15min，處死小鼠，分離氣管。插入注射器，捆綁固定。用5%碳酸氫鈉洗滌三次(注射器來回吸三回為一次)，每次0.5ml。洗液用722分光光度計測量透光率，記錄結果，查標準曲線圖換算成酚紅含量，結果見表4。表4鮮五味子果肉提取物對小鼠氣管酚紅排泌量的影響(x士s)組別動物數(n)劑量(g/kg)酚紅含量(mg/L)鮮五味子果肉提取物10203.59±0.98*遠志10202.95±0.33'生理鹽水10—_2.25±0,36水表示與生理鹽水組比較p〈a05結果可見鮮五味子果肉提取物組的酚紅排泌量均高于生理鹽水組，差異有顯著意義。提示鮮五味子果肉提取物有明顯增加小鼠氣管酚紅排泌量的作用。對小鼠濃氨水致咳的止咳作用取小鼠48只，1822g，雌雄兼用，隨機分為鮮五味子果肉提取物組、磷酸可待因陽性對照組和生理鹽水空白對照組。分別ig給藥，藥后lh，濃氨水(25%28X)噴霧20s，噴霧終止后，立即取出小鼠，記錄2min內小鼠的咳嗽次數和潛伏期，結果見表5。表5鮮五味子果肉提取物對小鼠濃氨水引咳的止咳作用(x土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果可見鮮五味子果肉提取物組的咳嗽潛伏期均長于生理鹽水組，差異有顯著意義；鮮五味子果肉提取物組的咳嗽次數均少于生理鹽水組，差異有顯著意義。提示鮮五味子果肉提取物有明顯延長小鼠濃氨水引咳潛伏期并明顯減少小鼠咳嗽次數的作用。實驗結果表明鮮五味子果肉提取物對小鼠氣管酚紅排泌有明顯促進作用；對小鼠濃氨水引咳有明顯延長引咳潛伏期并明顯減少小鼠咳嗽次數的作用。綜上結果提示鮮五味子果肉提取物具有化痰和鎮咳作用。四、鮮五味子果仁提取物對體外四氯化碳損傷肝細胞的保護作用采用L一02肝細胞系四氯化碳損傷模型，觀察了鮮五味子果仁取物對肝細胞的保護作用，四氯化碳損傷肝細胞后，導致細胞膜破裂，促進肝細胞內酶的釋放，而使培養液中谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活性、丙二醛含量明顯升高。由表6可以看出損傷組的谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活性、丙二醛水平較正常組明顯升高，而經過鮮五味子果仁提取物預先處理過的細胞，其谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶活性、丙二醛水平顯著低于損傷組。其結果見表6。表6鮮五味子果仁提取物對四氯化碳肝細胞損傷谷丙轉氨酶活性、谷草轉氨酶活性、丙二醛水平的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*表示與損傷組比較？〈0.01本發明經過實驗驗證，具有明顯的優越性，藥理效果好，質量穩定。權利要求1、鮮五味子提取物，其特征在于采用木蘭科植物五味子的鮮成熟果實，加水2～20倍量，于50℃～95℃條件下，攪拌1小時～10小時，通過10目～80目布袋離心，或鮮果中加入適量水用搓籽機分離，得果汁和果仁。果汁經管式離心得離心液，將其濃縮至相對密度為1.0～1.2(50℃測)的流浸膏，向流浸膏中加入乙醇，使其濃度為50％～80％，沉淀4小時以上，取上清液濃縮至無醇味，得浸膏或進一步干燥成干膏，得鮮五味子果肉提取物；取果仁用水漂洗1～5次，收集五味子果仁，烘干至水分小于15％，果仁粉碎成粗粉，加8～15倍量溶劑回流提取1～3次，提取液回收完溶劑后加入適量輔料用膠體磨分散均勻，經真空干燥或噴霧干燥得到總木脂素含量為1.0％～15.0％的鮮五味子果仁提取物。2、權利要求1的鮮五味子提取物的制備方法，其特征在于采用的輔料選自P—環糊精、淀粉、乳糖、硅衍生物、纖維素及其衍生物、碳酸鈣、碳酸氫鈣、糊精、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。3、權利要求1的鮮五味子提取物的制備方法，其特征在于所述的溶劑為含水或不含水甲醇、乙醇、丙酮或其類似物之一種或幾種任意比例的混合物。4、權利要求1的鮮五味子提取物的制備方法，其特征在于所述的果仁提取物水份含量小于5.0%，灰分含量小于5.0%。5、權利要求1的鮮五味子提取物的應用，將所述的鮮五味子果肉提取物用于制備久嗽虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠，延緩衰老的藥物，飲料，食品，保健品。6、權利要求1的鮮五味子提取物的應用，將所述的鮮五味子果仁提取物用于制備用于肝炎、保肝、降谷丙轉氨酶的藥物，食品，保健品。7、權利要求1的鮮五味子提取物，加上藥用輔料或載體，制備成口服制劑。8、權利要求1的鮮五味子提取物，其特征在于所述的總木脂素為五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙等。全文摘要本發明涉及到來源于木蘭科植物鮮五味子成熟果實的提取物及其制備方法和應用，屬醫藥、食品、保健品領域，具體涉及鮮五味子提取物的制備方法，特別是可用于制備保肝，降谷丙轉氨酶，久嗽虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗盜汗，津傷口渴，心悸失眠，延緩衰老的藥物，飲料，食品，保健品。文檔編號A61K36/57GK101167803SQ20071005628公開日2008年4月30日申請日期2007年11月6日優先權日2007年11月6日發明者揚劉,莉劉,劉智謀申請人:吉林省宏久生物科技股份有限公司