專利名稱：一種用于治療糖尿病的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于治療糖尿病的藥物組合物，特別是一種以中草藥提取物為原料的藥物組合物。
背景技術：
糖尿病是一種常見的慢性內分泌代謝紊亂性疾病，其發病率(主要是II型糖尿病)正在逐年上升，死亡率已居腫瘤和心血管疾病之后的第三位。II型糖尿病的治療多采用口服降糖藥物療法，目前臨床上用于治療II型糖尿病的口服降糖藥物有磺脲類降糖藥物，雙胍類降糖藥物，以及α-糖苷酶抑制劑類藥物，但由于磺脲類和雙胍類藥物的較強副作用(如磺脲類損害胰臟β細胞、低血糖等；雙胍類易發生乳酸中毒等)，其使用受到了一定限制。

發明內容
本發明的目的就在于提供一種具有顯著生理效應的治療糖尿病的藥用組合物。
目前，治療糖尿病的方法在于采用α-糖苷酶抑制劑，α-糖苷酶抑制劑的作用是通過調控存在于人體小腸黏膜微絨毛膜表面的麥芽糖酶和蔗糖酶等水解酶活性，阻滯了糖類化合物分解成葡萄糖等單糖的過程，延緩了碳水化合物的消化吸收，從而可避免飯后血糖迅速上升，抑制飯后高血糖和胰島素過度分泌，減小患者血糖波動幅度，達到對血糖的良好控制。傳統藥物和植物如虎杖、桑葉、仙鶴草的提取物均具有強烈的α-葡萄糖苷酶抑制活性，部分提取物還具有顯著的醛糖還原酶抑制活性。經臨床試驗證實，醛糖還原酶活性增高是導致糖尿病慢性并發癥的主要原因之一，抑制醛糖還原酶的活性，能有效地改善糖尿病患者的多元醇代謝紊亂，從而預防和延遲糖尿病并發癥的發生。經對這些提取物的體內降血糖活性進行研究，發現這些提取物均能不同程度地降低四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血糖，且不同的提取物有著明顯不同的作用方式。
虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb，et Zucc)系蓼科蓼屬植物，又名斑根紫金龍、活血龍、陰陽蓮等。藥用部分為根莖，有活血定痛、清熱利濕、解毒、抑菌等作用。在臨床上主要用于治療多種感染性疾病、燒傷、微循環功能障礙、腫瘤等，沒有發現毒副作用。主要化學成分有大黃素、大黃酚、白藜蘆醇(resveratrol)、白藜蘆醇甙(polydatin，或稱虎杖晶Ⅳ)、槲皮素(quercetin)、原兒茶酸(protocatechuicacid)、糖苷類、氨基酸等，并富含縮合鞣質和多聚糖。虎杖鞣酸可通過調控人體小腸黏膜微絨毛膜表面的糖苷酶活性達到對餐后血糖的良好控制；大黃素可防治STZ(鏈脲菌素)誘導的糖尿病大鼠的早期腎臟損害，其機制可能抑制ET-1(內皮素)等的合成與釋放；虎杖白藜蘆醇通過清除體內自由基、抑制脂質過氧化反應，達到降血脂、抗氧化、降血糖及改善糖尿病并發癥的作用。
桑葉異名鐵扇子，為桑科桑屬Morus alba L.(藥材Folium Mori)的樹葉。主要化學成分有黃酮類、甾類、多糖和氨基酸等。桑葉的藥用首載于《神農本草經》，桑葉性味苦甘、寒，是中醫清熱解毒之要藥。主治熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭疼、目赤暈等癥，臨床應用十分廣泛，常用桑葉入藥，組成復方中藥，療效良好。桑屬植物具有降血糖、降血壓、抗菌和抗病毒等多種生物活性。現代藥理研究證明，桑葉黃酮對降低四氧嘧啶糖尿病小鼠高血糖、提高其糖耐量的顯著作用，可能通過抑制雙糖酶、減緩小腸葡萄糖的吸收，抗氧化、減少糖尿病大鼠氧化損傷，以及保護脾抗氧化酶、改善脾功能等機制實現的。
仙鶴草即龍牙草，薔薇科。多年生草本，被毛。分布于北半球，我國各地皆產。以全草入藥，性微溫、味苦澀，功能止血，主治吐血、便血、尿血、崩漏等癥。全草含有仙鶴草素、鞣質、甾醇、有機酸、酚性成分及仙鶴草內酯等成分。仙鶴草黃酮具有調控體內糖苷酶活性、抑制高糖環境下蛋白質非酶糖基化的作用。
將這三種提取物根據藥理原理，經科學配比和組合，以達到功能互補，其作用效果將會更明顯。
根據上述機理，本發明采用如下技術方案一種用于治療糖尿病的藥物組合物，其特征是該組合物的組成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物48-57％桑葉提取物18-25％仙鶴草提取物 22-33％；其中所述的虎杖提取物是主要活性成份為虎杖鞣酸的虎杖提取物、主要活性成份為虎杖白藜蘆醇的虎杖提取物及主要活性成份為虎杖大黃素的虎杖提取物以20-25∶60-65∶14-16的重量比的混合物；所述的桑葉提取物的主要活性成份為桑葉黃酮；所述的仙鶴草提取物的主要活性成份為仙鶴草黃酮。
上述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備降血糖藥物中應用。
上述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應用。
同現有技術相比，采用本發明的用于治療糖尿病的藥物組合物具有顯著降低小鼠餐后血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用，可應用于預防和治療糖尿病及其并發癥。


圖1是組合物量和抑制劑關系2藥物組合物對小鼠餐后血糖影響的效果圖具體實施方式
本發明采用的虎杖、桑葉、仙鶴草提取物的制備方法如下主要活性成分為虎杖鞣酸的虎杖提取物1虎杖根莖粗粉，95％乙醇冷浸，冷浸液過濾、減壓濃縮得浸膏，加水后用氯仿回流萃取，后水液用乙酸乙酯萃取，濾除萃取過程中乙酸乙酯層產生的沉淀，乙酸乙酯層用NaOH水溶液萃取，NaOH水溶液用稀HCl調節pH至4，加5％明膠水溶液得沉淀，沉淀加50％丙酮溶解，離心得丙酮溶液，減壓蒸餾回收丙酮，水液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層減壓蒸餾回收乙酸乙酯，加適量水溶解，濾去沉淀，濃縮干燥得抑制劑粗品(橙黃色粉末)，將抑制劑粗品配成10mg/ml上HZ802大孔吸附樹脂，用70％乙醇水溶液洗脫。收集活性組分，濃縮，干燥得橙黃色抑制劑粉末。主要活性成分為虎杖鞣酸。
主要活性成分為虎杖白藜蘆醇的虎杖提取物2虎杖根莖粉碎，95％乙醇冷浸48小時，浸出液旋轉蒸干，得浸膏，將浸膏溶于水得懸濁液，后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，將乙酸乙酯相上硅膠柱進行正相層析，流動相為乙酸乙酯石油醚(4∶6)，點板跟蹤活性物質，將有活性物質部分合并第二次過硅膠柱，流動相不變，收集活性組分，經干燥得白色粉末，活性部位為虎杖白藜蘆醇。
主要活性成分為虎杖大黃素的虎杖提取物3虎杖根莖粉碎，95％乙醇冷浸48小時，浸出液旋轉蒸干，得浸膏，將浸膏溶于水得懸濁液，后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，將乙酸乙酯相上硅膠柱進行正相層析，流動相為乙酸乙酯∶石油醚(3∶7)，點板跟蹤活性物質，將有活性物質部分合并再過硅膠柱，流動相改為氯仿，收集活性組分，經干燥得淡黃色粉末，活性部位為虎杖大黃素。
2、桑葉提取物桑葉干品，粉碎，乙醇回流4小時，4000rpm取上清液，濃縮后加蒸餾水，離心取上清液，石油醚萃取，得水醇液。上D101吸附樹脂，水洗至無色，后用無水乙醇洗脫至無色，濃縮干燥即得桑葉提取物，活性部位為桑葉黃酮。
3、仙鶴草提取物仙鶴草粗粉，40％乙醇浸提3次，過濾得濾液，濃縮，水醇法除去葉綠素，離心娶上清夜，石油醚萃取，取水醇層，濃縮后上D101大孔吸附樹脂，無水乙醇洗脫得仙鶴草提取物，活性部位為仙鶴草黃酮實施例一糖苷酶活性試驗藥物組合物的重量百分配比為虎杖提取物51份、桑葉提取物24份、仙鶴草提取物25份。按上述比例分別稱取虎杖提取物51mg(其中虎杖提取物1∶11.73mg、虎杖提取物2∶31.62mg、虎杖提取物3∶7.65mg)、桑葉提取物24mg、仙鶴草提取物25mg，溶解于100mL水(加入少量二甲亞砜助溶)中，配成1mg/mL濃度的溶液。測定方法根據Tremblay等(Pierre C，Roland R Tremblay.The Journal of C1inicai Chemistry，1978，24208～211)的方法，即以PNPG(4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷)為底物，0.1mol/L Na2CO3為終止液，于400nm處比色測定。該組合物對α-糖苷酶的抑制率和加入抑制劑量之間關系的抑制實驗，加入量5，10，15，20，25，30(μL)，測得對α-糖苷酶抑制率和抑制劑量之間的關系如圖1。
實施例二檢測實施例1中的組合物配比對醛糖還原酶的抑制實驗在0.86mL磷酸緩沖液(pH6.5)中加入20μL硫酸鋰(0.4mol/L)，20μL還原型輔酶II(10mmol/L)溶液，10μL抑制劑溶液(1mg/ml)和60μL醛糖還原酶提取液，37℃下保溫4min，再加入30μL DL-甘油醛(10mmol/L)溶液，在340nm下掃描記錄吸光度6min的變化。經實驗得出該組合物對醛糖還原酶抑制率為65.9％。而單獨采用三種提取物對醛糖還原酶抑制率分別為虎杖提取物58.2％、桑葉提取物24.1％、仙鶴草提取物2.5％。
實施例三餐后血糖實驗取正常小鼠24只(實驗前先禁食10小時)，分為3組，灌胃前先取血待測0時刻血糖值，再分別用生理鹽水、拜糖平(Glucobay)(100mg/kg)、實施例1中配比組合物以及單獨三種提取物灌胃(300mg/kg)，結束后灌淀粉液(5g/kg)，然后各鼠分別于灌淀粉液后0.5、1、2小時取血。測定不同時間所取血液的血糖值，結果見表1。圖2為藥物組合物對小鼠餐后血糖影響的效果圖。
表1組合物對正常小鼠餐后血糖含量的影響

實施例四連續給藥實驗糖尿病小鼠模型的建立取65只正常小鼠喂養三天后，禁食16h(飲水不限)，腹腔注射四氧嘧啶(200mg/kg)后，喂養72h，禁食四小時后測血糖濃度，選取血糖值在11.0mmol/L以上者。將糖尿病小鼠分為4組，A、B、C、D組，其中A組灌格華止(Glucophage、鹽酸二甲雙胍)(100mg.kg-1.d-1)，B組灌拜糖平(100mg.kg-1.d-1)，C組灌組合物(200mg.kg-1.d-1)，D組灌生理鹽水，連續灌藥8天后，末次灌藥后禁食4小時后測小鼠血糖值，取血方法為斷尾取血，結果如表2。
表2組合物連續多次給藥對糖尿病小鼠血糖含量的影響

2與1比較p＜0.00權利要求
1.一種用于治療糖尿病的藥物組合物，其特征是該組合物的組成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物 48-57％桑葉提取物 18-25％仙鶴草提取物22-33％；其中所述的虎杖提取物是主要活性成份為虎杖鞣酸的虎杖提取物、主要活性成份為虎杖白藜蘆醇的虎杖提取物及主要活性成份為虎杖大黃素的虎杖提取物以20-25∶60-65∶14-16的重量比的混合物；所述的桑葉提取物的主要活性成份為桑葉黃酮；所述的仙鶴提取物的主要活性成份為仙鶴草黃酮。
2.根據權利要求1所述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備降血糖藥物中的應用。
3.如根據權利要求1所述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種用于治療糖尿病的藥物組合物，特別是一種以中草藥提取物為原料的藥物組合物。該組合物的組成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物48－57％；桑葉提取物18－25％；仙鶴提取物22－33％。本發明的用于治療糖尿病的藥物組合物具有顯著降低小鼠餐后血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用，可應用于預防和治療糖尿病及其并發癥。
文檔編號A61P3/00GK1730046SQ20051002727
公開日2006年2月8日 申請日期2005年9月9日 優先權日2005年9月9日
發明者沈忠明, 王逸蕓, 沈莉娟, 殷建偉, 徐正東 申請人:上海大學