專利名稱：用于改善的經口和透粘膜輸送的克拉屈濱制劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及制成固體口服劑型或透粘膜劑型的包含克拉屈濱-環糊精復合物的組合物，還涉及增強克拉屈濱的口服和透粘膜生物利用度的方法。
背景技術：
克拉屈濱是一種酸不穩定的藥物，其具有如下所述的化學結構 它也稱作2-氯-2′-去氧腺苷或2-CdA。
克拉屈濱是一種抗代謝藥，可以用于治療淋巴增殖病。其已經用于治療實驗性白血病例如L1210，臨床上用于毛細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病以及瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥。其還已經用作免疫抑制劑和治療多種自身免疫病的藥物，所述自身免疫病包括類風濕性關節炎、炎性腸病(例如，克羅恩氏病，潰瘍性結腸炎)和多發性硬化(見例如，J.Liliemark，Clin.Pharmacokinet，32(2)120-131，1997)。還已經在實驗中或臨床上研究了它，例如在淋巴瘤、郎格罕氏細胞組織細胞增多病、紅斑狼瘡、慢性斑塊狀牛皮癬、Sezary綜合征、Bing-Neel綜合征、復發性神經膠質瘤和實體瘤中。
由于多種原因，首先是患者的依從性，或由于成本或治療方面的考慮，經口輸送藥物經常優于腸胃外輸送。口服劑型能減少對醫護人員的重復就診、或者注射的不適或與有些活性藥物有關的延長灌輸次數，由此增強患者的依從性。在健康護理成本逐漸增加的時代，相對于腸胃外施用成本與經口的或透粘膜的施用有關的降低成本變得更重要。腸胃外施用的成本要高得多，因為需要健康護理專業人員在健康護理者的場所施用克拉屈濱，這也包括與該施用有關的所有附加成本。而且，在某些情況下，治療方面的考慮，例如需要經較長的時間緩釋克拉屈濱，實際上只能通過經口的或透粘膜的輸送來實現。
但是，迄今為止，經口和透粘膜輸送克拉屈濱存在下述缺點低生物利用度(見，例如，J.Liliemark等，J.Clin.Oncol.，10(10)1514-1518，1992)，和欠佳的患者間差異(見，例如，J.Liliemark，Clin.Pharmacokinet，32(2)120-131，1997)。也見，A.Tarasuik等報道的較差吸收和pH依賴性的不穩定性(Arch.Immunol.et Therapie Exper.，4213-15，1994)。
環糊精是由環狀α-(1→4)連接的D-吡喃型葡萄糖單元組成的環狀寡糖。已經將具有6-8個單元的環糊精分別命名為α-、β-和γ-環糊精。單元的數目決定了錐形空腔的大小，后者能表征環糊精，且能將藥物包入其中，形成穩定的復合物。已知了許多α-、β-和γ-環糊精衍生物，其中一個或多個羥基被替代為醚基或其它基團。因此，已知這些化合物是復合劑，以前已經用于制藥領域，以與水不溶性的藥物形成包合復合物，由此使它們溶于水性介質中。
最近，Schultz等已經在美國專利號6,194,395 B1中描述了用環糊精復合和增溶克拉屈濱。Schultz等的專利主要解決了以前所述的克拉屈濱水性制劑固有的問題，特別是對于皮下和肌肉內注射劑。Schultz等已經發現，克拉屈濱當與環糊精配制時，不但可以明顯地更易溶于水性介質，而且當與環糊精結合時，對酸催化的水解更穩定。后一發現對于配制固體口服劑型特別有用，其中化合物在胃內容物的酸性pH中通常會經歷水解。Schultz等似乎沒有描述與固體口服劑型有關的任何實際工作。實際上，他們僅僅描述了一種制備固體劑型的方法，這是一種熔體擠出方法，其中將克拉屈濱和環糊精與其它任選的添加劑一起混合，然后加熱直到熔解。而且，在該專利中列出的1mg至15mg克拉屈濱和100mg至500mg環糊精的寬劑量范圍表明，相對于固體口服劑型中給定量的克拉屈濱，應當存在的環糊精的具體量不是至關重要的。實際上，這些劑量范圍包括了許多組合，其可能適合作為混合物，但是不適用于復合物形成。例如，1mg克拉屈濱與500mg環糊精的比例，包含了太多的環糊精，所以藥物不能容易地離開復合物并實現其治療功能。另一方面，15mg克拉屈濱和僅僅100mg環糊精不足以復合該量的克拉屈濱。
Schultz等的專利雖然提出了通過與環糊精結合/復合來提高口服劑型中的克拉屈濱的穩定性，但是沒有提出通過這樣的方式提高藥物的口服生物利用度；實際上，該專利沒有描述或提出增強或最大化來自克拉屈濱和環糊精的固體口服劑型的克拉屈濱的生物利用度的方法或特別設計的用于實現該目的的組合物。而且，Schultz等沒有提出用于透粘膜施用的克拉屈濱/環糊精組合，也就是說，以旨在經過鼻、口、陰道或直腸腔內襯粘膜而不是經過口胃途徑給藥的形式，更不用說當以這種劑型施用時增強藥物的生物利用度。
許多人員已經研究了特定藥物在含有不同濃度的選定環糊精的水中的溶解度，以證實提高環糊精的濃度可以提高該藥物在選定溫度和pH水平的溶解度，如例如Schultz等的專利中所報道的。不同的人員還已經進行了相溶解度研究，以闡明復合物形成的本性，例如，環糊精和藥物是否形成1∶1復合物或1∶2復合物；見，例如，Harada等的美國專利號4,497,803，其涉及蘭卡殺菌素類抗生素與環糊精的包合復合物，和Shinoda等的美國專利號4,478,995，其涉及(2′-芐氧基羰基)苯基反式-4-胍基甲基環己烷甲酸酯的酸加成鹽與環糊精的復合物。
在制藥領域，在使用環糊精提高藥物溶解的固體劑型中使用過量的環糊精已經成為常規技術，除非溶解度會使過量的環糊精導致太大的劑型。常識表明，對于固體口服劑型，特別是酸不穩定的藥物例如克拉屈濱，預期過量的環糊精在胃的酸性環境中能保護藥物，并理想地透過腸壁/胃粘膜輸送它，仍作為與環糊精的復合物予以保護。在血流中，遠離胃酸的有害影響，則預期藥物會從復合物中解離，并實現其治療功能。
盡管Schultz等教導，克拉屈濱-環糊精復合物會提高克拉屈濱的水溶性和酸穩定性，該現有技術并未提示，當在固體口服劑型或透粘膜劑型中施用該復合物時，如何就生物利用度和患者間差異而言來最大化或增強復合的益處。
發明概述現在已經發現，過量的環糊精會抑制包含克拉屈濱-環糊精復合物的固體口服劑型或透粘膜劑型中的克拉屈濱的吸收，飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的固體口服或透粘膜劑型能提高口服和/或透粘膜的生物利用度和/或實現更低的藥物患者間和/或患者內差異。
本發明提供了一種藥物組合物，其包含制成固體口服劑型或透粘膜劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。在本發明的一個具體方面，藥物組合物包含制成固體口服劑型或透粘膜劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。該組合物提供了當與胃粘膜(對于口服劑型的情況)或直腸、陰道、口腔或鼻的粘膜(對于透粘膜劑型的情況)接觸時具有最高熱力活性狀態的克拉屈濱。
本發明還提供了提高克拉屈濱的口服或透粘膜生物利用度的方法，包括給需要的對象施用藥物組合物，其中包含制成固體口服劑型或透粘膜劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。在本發明的一個具體方面，施用的組合物包含制成固體口服劑型或透粘膜劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
本發明還提供了提高來自固體口服劑型或透粘膜劑型的克拉屈濱在需要用克拉屈濱治療的哺乳動物中的生物利用度的方法，該方法包括(a)確定與選定量的克拉屈濱復合和將所述選定量的克拉屈濱維持在復合物中所需的環糊精的最小量；(b)使超過所述選定量的克拉屈濱與所述的最小量的環糊精在水性介質中合并；(c)從復合介質中去除未復合的克拉屈濱；(d)從得到的溶液中去除水，得到干燥的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物；(e)將所述的干燥的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物配制成固體口服劑型或透粘膜劑型，其基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精；和(f)將該劑型經口地或透粘膜地施用給哺乳動物。在該方法的一個具體方面，步驟(e)包含將所述的干燥的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型或透粘膜劑型，基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
本發明還提供了通過施用本發明的組合物來治療哺乳動物的對施用克拉屈濱有反應的病癥的方法。還提供了克拉屈濱在制備用于給藥以治療克拉屈濱反應性病癥癥狀和增強克拉屈濱的口服或透粘膜的生物利用度的本發明的藥物組合物中的應用。
在一個具體實施方案中，本發明提供了一種新的特別有利的克拉屈濱∶γ-環糊精的1∶2復合物。在一個相關的實施方案中，提供了1∶1克拉屈濱∶γ-環糊精復合物和1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物的混合物，其中1∶2復合物是占主要的。


參考下面的詳細描述和附圖，可以更容易地理解本發明的更完整的價值和它的許多附加優點，其中圖1是相溶解度研究的結果的圖示，其中用不同的環糊精(CD)摩爾濃度對不同的克拉屈濱摩爾濃度作圖，用(◆)代表羥丙基-β-環糊精，(■)代表具有添加的羥丙基甲基纖維素的羥丙基-β-環糊精，且(▲)代表γ-環糊精。
圖2顯示了給狗施用5mg單劑量克拉屈濱后的克拉屈濱的血漿圖譜，數據顯示了克拉屈濱在血漿中的平均濃度(pg/ml)±5-6只動物/組的標準偏差，對時間(小時)作圖，施用下述的克拉屈濱制劑(◇)靜脈內的(i.v.)推注；(*)飽和的口含的克拉屈濱γ-環糊精復合物；(×)飽和的口含的克拉屈濱-羥丙基-β-環糊精復合物；(●)飽和的口服的克拉屈濱-γ-環糊精復合物；(○)克拉屈濱與10倍過量的γ-環糊精的物理混合物的口服膠囊；(□)克拉屈濱復合物與10倍過量的γ-環糊精的口服膠囊；(▲)飽和的口服的克拉屈濱-羥丙基-β-環糊精復合物；和(△)克拉屈濱與10倍過量的羥丙基-β-環糊精的物理混合物的口服膠囊。
圖3對比了給狗施用5mg單劑量的克拉屈濱后的克拉屈濱的血漿圖譜，數據顯示了平均濃度(pg/ml)±5-6只動物/組的標準偏差，對時間(小時)作圖，施用下述的克拉屈濱制劑(◆)靜脈內的(i.v.)推注，(●)飽和的口服的克拉屈濱-γ-環糊精復合物，和(▲)飽和的口服的克拉屈濱-羥丙基-β-環糊精復合物。
圖4對比了給狗經口服施用5mg單劑量的克拉屈濱后的克拉屈濱的血漿圖譜，數據顯示了平均濃度(pg/ml)±5-6只動物/組的標準偏差，對時間(小時)作圖，施用下述的克拉屈濱制劑(●)飽和的口服的克拉屈濱-γ-環糊精復合物；(○)克拉屈濱與10倍過量的γ-環糊精的物理混合物的口服膠囊；和(□)克拉屈濱復合物與10倍過量的γ-環糊精的口服膠囊。
圖5對比了給狗經口服施用5mg單劑量的克拉屈濱后的克拉屈濱的血漿圖譜，數據顯示了平均濃度(pg/ml)±5-6只動物/組的標準偏差，對時間(小時)作圖，施用下述的克拉屈濱制劑(▲)飽和的口服的克拉屈濱-羥丙基-β-環糊精復合物；和(△)克拉屈濱與10倍過量的羥丙基-β-環糊精的物理混合物的口服膠囊。
圖6說明了在施用關于圖2所述的各種制劑后，克拉屈濱在5-6只狗的組中對時間(小時)作圖得到的平均累積曲線下面積(AUC)(pgxh/mL)，其中各標識如圖2所示。
發明詳述在本說明書和權利要求書中，采用下面的定義和一般描述。
在本文中引用的專利、公開的申請和科技文獻，建立了本領域的技術人員的知識，它們都在這里整體引作參考，其程度與特別地個別引作參考相同。如果這里引用的任何文獻與本說明書的具體教導存在任何沖突，應當以后者為準。類似地，如果本領域理解的對詞語或短語的定義與本說明書的具體教導的詞語或短語的定義存在任何沖突，應當以后者為準。
如本文所使用的術語″復合物″是指包合復合物，其中克拉屈濱分子的疏水部分(含氮環系)插入環糊精分子的疏水空腔中。
如本文所使用的，無論是在過渡短語中還是在權利要求主體中，術語″包含″和″包括″都應當理解為具有開放含義。也就是說，該術語應當理解為與短語“至少具有”或“至少包括”同義。當在方法的上下文中使用時，術語″包括″是指，該方法至少包括所述的步驟，但還可以包括其它步驟。當在組合物的上下文中使用時，術語″包含″是指，該組合物至少包括所述的特征或組分，但是也可以包括其它特征或組分。
術語″基本上由……組成″具有半封閉的含義，也就是說，它們不允許包括會實質上改變方法或組合物的基本特征的步驟或特征或組分；例如，會顯著干擾本文所述的組合物的目標性質的步驟或特征或組分，即該方法或組合物限于指定的步驟或材料和不會從本質上影響本發明的基本的新特征的那些。基本的新特征在這里是，提供了在固體口服劑型或透粘膜劑型中的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，其基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精，從而在施用后能提供改善的生物利用度和/或更低的患者間差異。在本發明的一個具體實施方案中，基本的新特征在這里是，提供了在固體口服劑型或透粘膜劑型中的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，其基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精，在施用后能提供特別增強的生物利用度和/或低的患者間和/或低的患者內差異性。
術語″由……組成″和″組成″是封閉的術語，僅僅允許包括所述的步驟或特征或組分。
如本文所使用的，單數形式″一個″、″一種″和″該″具體地也包括它們所指的術語的復數形式，除非上下文另有清楚的說明。
術語″約″在本文中用于指大約、附近、粗略或左右。當術語″約″與數值范圍聯合使用時，它通過將邊界擴展到所述數值以上和以下來修飾該范圍。通常，術語″約″或″大約″在本文中用于將數值修飾到所述值以上和以下20％偏差。
當與環糊精中的克拉屈濱的復合物聯合使用時，術語″飽和的″是指該復合物是克拉屈濱飽和的，也就是說，該復合物含有可以在使用的復合條件下與給定量的環糊精復合的最大量克拉屈濱。相溶解度研究可以用于提供該信息，如下文更詳細描述的(下面還更詳細地描述了復合的條件)。或者，可經驗性地得到飽和的復合物，通過簡單地向選定的環糊精的水性溶液中加入克拉屈濱，直到形成(未復合的克拉屈濱的)沉淀；最終，去除沉淀，凍干溶液，得到干燥的飽和的復合物。
表述″基本上″，如在″基本上不含有″或″基本上所有的″中，是指在精確計算量的20％內。在表述“基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精”的情況中，從如下面更詳細地解釋的相溶解度研究中，可以得到將克拉屈濱維持在復合物中所需的環糊精的最小量。環糊精的實際量應當在該最小值±20％內，優選在該最小值±10％內，甚至更優選在該最小值±5％內，且應當將至少90％或更多、優選至少95％或更多的藥物維持在復合物中。另一方面，當使用表述“基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精”時，可以使用低于前述量的環糊精，結果在劑型中可能存在更大量的未復合形式的克拉屈濱。通過使用更低濃度的環糊精溶液進行復合反應和/或通過在下述的溫度范圍的上限進行復合，會發生該現象。但是，認為使用足夠的環糊精來將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中、從而使劑型中未復合的克拉屈濱的量最小化是特別有益的。
術語″患者間差異性″是指向其施用藥物的患者間的差異。術語″患者內差異性″是指當在不同的時間給藥時同一患者所經歷的差異。
如本文所使用的，所述的變量的數值范圍意在表明，使用與該范圍內的任何值相等的變量，可以實現本發明。因而，對于本質上離散的變量，該變量可以等于該范圍內的任何整數值，包括該范圍的端值。類似地，對于本質上連續的變量，該變量可以等于該數值范圍內的任何實數值，包括該范圍的端值。作為一個實例，被描述成具有0-2之間的值的變量，對于本質上離散的變量，可以是0、1或2，對于本質上連續的變量，則可以是0.0、0.1、0.01、0.001或任何其它實數值。
在說明書和權利要求中，單數形式包括復數形式，除非上下文另有清楚的說明。如本文所使用的，除非另有特別說明，使用的詞語″或″具有″和/或″的“包含”含義，而不是“不是/就是”的“排除”含義。
本文使用的技術和科技術語具有本發明所屬領域的技術人員通常理解的含義，除非另有定義。這里參考本領域的技術人員已知的各種方法學和材料。描述藥理學的基本原理的標準文獻包括Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，第10版，McGraw Hill Companies Inc.，New York(2001)。
下文更詳細地參考本發明的具體實施方案。盡管將結合這些具體實施方案來描述本發明，應當明白，無意將本發明限制于這些具體的實施方案。相反地，意在覆蓋可以包含在所附權利要求書所定義的本發明的精神和范圍內的替代、改進和等同方案。在下面的說明中，描述了眾多具體細節，以徹底理解本發明。沒有這些具體細節中的部分或全部，也可以實現本發明。在其它的情況中，為了不使本發明無必要的晦澀，沒有詳細描述眾所周知的工藝操作。
本發明提供了組合物以及制備和使用用于實現理想的藥物動力學性質的藥物組合物的方法。這樣的組合物源自下述發現當呈遞到要經其吸收的(胃的、鼻的、直腸的、口腔的、舌下的或陰道的)粘膜時，其中克拉屈濱處于其最高熱力學狀態的環糊精和克拉屈濱的溶液伴有改善的克拉屈濱吸收，如更高的生物利用度和/或更低的患者間差異所反映的。
不希望如此限定本發明，假設通過溶解(例如，通過與流體例如體液接觸)，不含有過量環糊精的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的干燥組合物會形成局部飽和的克拉屈濱溶液，其中克拉屈濱處于最高熱力活性(HTA)狀態，從而有利于吸收。克拉屈濱具有相當低的(盡管不是可忽略的)固有水溶性。在飽和水性溶液中從復合物解離形成的游離的克拉屈濱表現出更穩定的活性水平，如果存在過量的環糊精，克拉屈濱會通過與環糊精重新復合而尋求更大的穩定性。通過控制環糊精的量，使得該劑型基本上不含有超過將克拉屈濱維持在復合物中所需的量的環糊精，局部飽和的溶液中的克拉屈濱不能容易地與環糊精重新結合。因此，該克拉屈濱會通過經胃粘膜(對于固體口服劑型的情況)或經鼻的、口腔的、陰道的或直腸的粘膜(對于透粘膜劑型的情況)的吸收，尋求更低的熱力活性/更大的穩定性狀態。除其他內容之外，下文特別證實了該方案能提高生物利用度，可能是通過避免或最小化由于存在過量的環糊精造成的對克拉屈濱吸收的抑制。在有大量的過量的環糊精存在下，預期溶液中的克拉屈濱會與環糊精重新結合。這不會實現最佳的生物利用度，因為如果克拉屈濱要實現其治療功能，該藥物必須從包封它的復合物中移動出來。
鑒于上述內容，顯然要生產固體口服或透粘膜劑型的最佳藥物組合物，這些劑型應當制成當固體劑型與粘膜處的體液接觸后能釋放局部飽和的克拉屈濱溶液，其中克拉屈濱處于其HTA狀態。為了在體內提供這樣的局部飽和的溶液，重要的是首先鑒定出要用于固體劑型中的克拉屈濱與環糊精的最佳比例，該比例在本文中稱作HTA比。在口含劑型的情況中，通過將飽和的復合物溶解到最小量的水中，制成了高度濃縮的溶液，將該溶液置于口腔中可以實現相同的作用。
經驗性地確定HTA比，并將其鑒定為克拉屈濱與特定環糊精的比例，其對應著可以與給定量的環糊精復合的最大量的克拉屈濱。使用經驗方法(例如相溶解度研究)來檢測可以與不同濃度的環糊精溶液溶解的克拉屈濱的飽和濃度，可以確定HTA比。由此，該方法可以鑒別出形成飽和的克拉屈濱-環糊精復合物時的濃度。應當注意，相溶解度圖上的點代表的摩爾比表明了多少摩爾的環糊精是在給定條件下將該藥物維持在復合物中所需的最小量；然后可以將其轉化成重量比。例如，如果相溶解度圖表明，將基本上所有的克拉屈濱維持在飽和的復合物中需要9摩爾給定的環糊精，那么通過用克拉屈濱的摩爾數X其分子量和用環糊精的摩爾數X其分子量，可以得到作為適當的最優化的重量比的產物的比例。相溶解度研究還提供了關于形成的克拉屈濱-環糊精復合物的性質的信息，例如，該復合物是1∶1復合物(1分子藥物與1分子環糊精復合)還是1∶2復合物(1分子藥物與2分子環糊精復合)。
根據本發明，可以使用環糊精或克拉屈濱作為固定變量開始，向其中加入過量的另一種，以鑒別不同的HTA數據點(指示飽和的克拉屈濱-環糊精復合物)，并繪出得到的HTA線。典型地，在憑經驗發現能促進復合物形成的條件下，向含有已知濃度的環糊精的水性溶液中加入克拉屈濱。濃溶液，例如，大約27％γ-環糊精的溶液和大約40％羥丙基-β-環糊精的溶液，在一個實施方案中特別有益。通常，在室溫或在輕微加熱下(至多約50℃或甚至高達60℃)進行復合。然后去除可能存在的過量的克拉屈濱，隨后檢測復合物中的克拉屈濱濃度。測得的濃度代表著對于給定的環糊精濃度的克拉屈濱飽和濃度。對于不同的已知濃度的環糊精，重復該方法，直到得到幾個數據點。每個數據點代表著溶解在已知濃度的環糊精中的克拉屈濱的飽和濃度。然后用數據點繪圖，顯示出針對使用的不同的環糊精濃度的克拉屈濱的飽和濃度。該圖是相溶解度圖，其可以用于確定在給定的復合條件下，對于用于形成飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的環糊精的任意具體濃度的克拉屈濱的飽和量。
本領域的技術人員能夠明白，通過多種替代方法，可以鑒別出形成飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的濃度(以及HTA比)。因此，本領域已知的適用于鑒別這些濃度的任何方法都在本發明的范圍內。
已經發現，理想的藥理學性質(改善的生物利用度和/或更低的患者間和/或患者內差異)與本發明的包合復合物有關。
本發明范圍內的環糊精包括天然的環糊精α-、β-和γ-環糊精及其衍生物，更具體地，在衍生物中，一個或多個羥基被取代，例如被烷基、羥烷基、羧烷基、烷基羰基、羧基烷氧基烷基、烷基羰基氧烷基、烷氧基羰基烷基或羥基-(單或多烷氧基)烷基取代；且其中每個烷基或亞烷基優選地含有最多6個碳。被取代的環糊精一般可以以不同的取代度得到，例如，從1至14，優選從4至7；取代度是環糊精分子上的取代基的大致平均數，例如，在羥丙基-β-環糊精分子的情況下，是羥丙基的大致數目，所有這樣的變化都在本發明的范圍內。在本發明中可以使用的被取代的環糊精包括聚醚，例如，如美國專利號3,459,731所述的。被取代的環糊精的其它實例包括醚，其中一個或多個環糊精羥基的氫被替代為C1-6烷基、羥基-C1-6烷基、羧基-C1-6烷基或C1-6烷氧基羰基-C1-6烷基，或其混合醚。更具體地，這樣的被取代的環糊精是醚，其中一個或多個環糊精羥基的氫被替代為C1-3烷基、羥基-C2-4烷基或羧基-C1-2烷基，或更具體地被甲基、乙基、羥乙基、羥丙基、羥丁基、羧甲基或羧乙基替代。術語″C1-6烷基″意在包括具有1-6個碳原子的直鏈的和有支鏈的飽和的烴基，例如甲基、乙基、1-甲基乙基、1，1-二甲基乙基、丙基、2-甲基丙基、丁基、戊基、己基等。用于本文用途的其它環糊精包括葡萄糖基-β-環糊精和麥芽糖基-β-環糊精。在本發明中特別有用的是β-環糊精醚，例如M.Nogradi(1984)在Cyclodextrins of the Future，Vol.9，No.8，p.577-578中所述的二甲基-β-環糊精，隨機甲基化的β-環糊精，和聚醚，例如羥丙基-β-環糊精，羥乙基-β-環糊精，羥丙基-γ-環糊精，和羥乙基-γ-環糊精，以及硫丁基醚，特別是β-環糊精硫丁基醚。除了簡單的環糊精外，還可以使用有支鏈的環糊精和環糊精聚合物。其它的環糊精記載在，例如，Chemical and PharmaceuticalBulletin 281552-1558(1980)；Yakugyo Jiho No.6452(28 March1983)；Angew.Chem.Int.Ed.Engl.19344-362(1980)；美國專利號3,459,731和4,535,152；歐洲專利號EP 0 149 197A和EP 0197 571A；PCT國際專利公開號WO90/12035；和英國專利公開GB2,189,245。描述了用于根據本發明的組合物的環糊精、且提供了環糊精的制備、純化和分析指南的其它文獻包括下述Jozsef Szejtli，Kluwer Academic Publishers(1988)在Cyclodextrin inPharmaceuticals一章中的Cyclodextrin Technology；M.L.Bender等，Springer-Verlag，Berlin(1978)的Cyclodextrin Chemistry；Advances in Carbohydrate Chemistry，第12卷，M.L.Wolfrom編，Academic Press，New York，Dexter French的″The SchardingerDextrins″一章，第189-260頁；J.Szejtli，Akademiai Kiado，Budapest，Hungary(1982)的Cyclodextrin and their Inclusioncomplexes；I.Tabushi，Acc.Chem.Research，1982，15，第66-72頁；W.Sanger，Angewandte Chemie，92，第343-361頁(1981)；A.P.Croft等，Tetrahedron，39，第1417-1474頁(1983)；Irie等，Pharmaceutical Research，5，第713-716頁(1988)；Pitha等，Int.J.Pharm.29，73(1986)；美國專利號4,659,696和4,383,992；德國專利號DE 3,118,218和DE-3,317,064；和歐洲專利號EP 0094157A。描述β-和γ-環糊精的羥烷基化衍生物的專利包括Pitha的美國專利號4,596,795和4,727,064，Müller的美國專利號4,764,604、4,870,060和Müller等的美國專利號6,407,079。
特別令人感興趣的用于與克拉屈濱復合的環糊精包括γ-環糊精；β-和γ-環糊精的羥烷基(例如羥乙基或羥丙基)衍生物；β-或γ-環糊精的羧烷基(例如羧甲基或羧乙基)衍生物；β-環糊精硫丁基醚；二甲基-β-環糊精；和隨機甲基化的β-環糊精。2-羥丙基-β-環糊精(HPβCD)，2-羥丙基-γ-環糊精(HPγCD)，隨機甲基化的β-環糊精，二甲基-β-環糊精，β-環糊精硫丁基醚，羧甲基-β-環糊精(CMβCD)，羧甲基-γ-環糊精(CMγCD)和γ-環糊精(γCD)本身是特別有利的，特別是γ-環糊精和羥丙基-β-環糊精，最特別是γ-環糊精。
如本文所解釋和示例的，可以在有利于復合物形成的條件下，在液體環境中制備出用于本發明的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的組合物。隨后可以將得到的液體制品轉化成適用于作為固體口服或透粘膜劑型施用的干燥形式。
技術人員能夠明白，本領域可以得到多種制備本文所述的組合物的方法。本文所示例的一種可得到的方法包括下述步驟將克拉屈濱混合到環糊精水性溶液中，將復合介質維持在室溫，攪拌約6至約24小時，即足以實現平衡的時間，分離可能存在的未復合的克拉屈濱(例如，通過過濾或離心)，凍干或冷凍干燥飽和溶液，形成固體飽和的克拉屈濱-環糊精復合物混合物。
冷凍干燥也稱作凍干，由3個基礎階段組成首先是冷凍階段，然后是首次干燥階段，最后是二次干燥階段。下面的實施例2提供了所述的進行批式凍干的細節。通過遵循在本文整體引作參考的和依賴的Xiaolin(Charlie)Tang和Michael J.Pikal in PharmaceuticalResearch，第21卷，第2期，2004年2月，191-200所述的原理，可以進一步優化該方法。
根據本發明的藥物組合物可以任選地包含一種或多種賦形劑或其它的藥學上惰性的組分。但是，本發明的優點之一是，使用進行成形和生產特定形式(例如片劑或貼劑)所必需的最小量的賦形劑，就可以制備出如本文所述的克拉屈濱藥物形式。可以從不會影響克拉屈濱、環糊精或復合物形成的那些賦形劑中選擇。
任選地在藥學上可接受的介質中和任意的眾所周知的藥學上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、凈化劑、矯味劑、著色劑和賦形劑一起配制劑型(見Handbook of PharmaceuticalExcipients，Marcel Dekker Inc.，New York and Basel(1998)；Lachman等編，The Theory and Practice of Industrial Pharmacy，第3版，(1986)；Lieberman等，Eds.Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Dekker Inc.，New York and Basel(1989)；和The Handbookof Pharmaceutical Excipients，第3版，American PharmaceuticalAssociation and Pharmaceutical Press，2000)；還見Rermington′sPharmaceutical Sciences，第18版，Gennaro，Mack Publishing Co.，Easton，PA(1990)和RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，Lippincott，Williams & Wilkins，(1995))。簡單的固體口服或透粘膜劑型由與小量(例如約1％重量)合適的粘合劑或潤滑劑(例如硬脂酸鎂)一起壓制的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物組成。
在具體的實施方案中，飽和的克拉屈濱-環糊精復合物用于透粘膜地或經口地施用克拉屈濱。
如本文所使用的，″粘膜″指鼻、口腔、陰道和直腸腔內襯的上皮膜，以及胃內襯的上皮膜(胃粘膜)。如本文所使用的，粘膜的和透粘膜的可互換地使用。透粘膜的輸送方法和形式是本領域眾所周知的。它們包括口含的和舌下的片劑、錠劑、粘性貼劑、凝膠、溶液或噴霧劑(粉末、液體或氣霧劑)和栓劑或泡沫(用于直腸的或陰道的施用)。透粘膜的輸送方法和形式不包括用于經口服使用的方法和形式，后者旨在被吞咽，在本文中簡單地稱作口服劑型，盡管它們最終會通過胃粘膜輸送藥物。當透粘膜的形式是液體時，可以通過將飽和的復合物溶于最小量的水中來得到，例如將500mg與HPβCD的飽和復合物溶于0.5ml水中(50％重量/重量溶液)，或將500mg飽和的γCD復合物溶于1.0ml水中。可以將幾滴這樣的溶液滴入口腔中，并在那里保留約2分鐘，以進行經口腔粘膜的吸收。然而，固體透粘膜劑型一般優于液體形式。
在某些情況下，通過加入不同的賦形劑和添加劑來提高溶解度或增強滲透，例如通過修飾微環境，或通過加入粘附粘膜的賦形劑來提高輸送系統和粘膜組織之間的接觸，可以進一步促進經口服的或粘膜的吸收。
通過將口含劑量單位置于接受藥物治療的個體的下牙齦和與其相對的口粘膜之間，可以實現口腔的藥物輸送。可以使用適用于口含施用藥物的賦形劑或介質，包括本領域已知的任意的這樣的材料，例如，無毒的且不與組合物的其它組分發生有害相互作用的任意的液體、凝膠、溶劑、液體稀釋劑、增溶劑等。將固體劑量單位制成能經過預定的時間階段逐漸溶解，以在口腔唾液中生成基本上飽和的藥物溶液，使克拉屈濱經粘膜吸收，其中基本上在整個該時間段內提供藥物輸送。口含劑量單位還可以包含能促進生產的潤滑劑，例如，硬脂酸鎂等。可以包含在口含劑量單位中的其它組分包括但不限于矯味劑、滲透增強劑、稀釋劑、粘合劑等。口含劑量單位的其余部分可包括生物蝕解的聚合載體和可能需要的任何賦形劑，例如粘合劑、崩解劑、潤滑劑、稀釋劑、矯味劑、著色劑等，和/或其它的活性藥物。
口含載體可以包括具有足夠粘性的聚合物，以確保該劑量單位能粘附到口腔粘膜持續必需的時間段，即在此期間將克拉屈濱輸送到口腔粘膜的時間段。另外，聚合載體是可逐漸“生物蝕解”的，即該聚合物在接觸水分后以預定的速率水解。可以使用藥學上可接受的、能提供合適的粘附度和理想的藥物釋放特征的任意聚合載體，且與要施用的克拉屈濱和口含劑量單位中可能存在的任意其它成分相容。通常，聚合載體包括能粘附到口腔粘膜的濕表面上的親水的(水溶性的和水溶脹性的)聚合物。這里使用的聚合載體的實例包括丙烯酸聚合物和共聚物，例如，稱作″卡波姆″的那些，例如，Carbopol。其它合適的聚合物包括但不限于水解的聚乙烯醇、聚氧化乙烯(例如，SentryPolyox)、聚丙烯酸酯(例如，Gantrez)、乙烯基聚合物和共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、瓜爾膠、果膠、淀粉和纖維素聚合物，例如羥丙基甲基纖維素(例如，Methocel)、羥丙基纖維素(例如，Klucel)、羥丙基纖維素醚、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、乙酸-鄰苯二甲酸纖維素、乙酸-丁酸纖維素等。劑量單位僅僅需要含有飽和的克拉屈濱-環糊精復合物。但是，在有些情況下，它可理想地包含一種或多種前述的載體和/或一種或多種其它組分。例如，可以包含潤滑劑來方便生產該劑量單位的工藝過程；潤滑劑還可以優化蝕解速率和藥物流出。如果存在潤滑劑，其量級為劑量單位的0.01重量％至約2重量％、優選約0.01重量％至1.0重量％。合適的潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、硬脂酰延胡索酸鈉、滑石、氫化植物油和聚乙二醇。
根據本發明，還可以以用于陰道或直腸施用的栓劑或泡沫形式施用飽和的克拉屈濱-環糊精復合物。通過眾所周知的方法，可以制備出這些組合物，例如，在栓劑的情況中，通過將飽和的復合物與合適的無刺激性的賦形劑或粘合劑混合，后者在常溫下是固體，但是在陰道或直腸溫度下是液體，因此會在陰道或直腸中熔解，釋放出藥物。這樣的材料包括可可脂和聚乙二醇。傳統的粘合劑和載體包括，例如，聚亞烷基二醇或甘油三酸酯[例如PEG 1000(96％)和PEG 4000(4％)]。從含有約0.5重量/重量％至約10重量/重量％、優選約1重量/重量％至約2重量/重量％范圍的活性成分的混合物，可以形成這樣的栓劑。
對于鼻內使用，可以使用飽和的復合物的粉末噴霧劑或軟膏劑，優選粉末形式。
而且，對于人用，口含劑型，特別是口含片劑或糯米紙囊劑或盤，有利地具有約15-30分鐘的崩解時間，或口腔貼劑(其中藥物僅僅從粘附到口腔粘膜上的那一側釋放，而另一側是不可透過的)，是令人感興趣的。口腔的施用可以利用在本文整體引作參考的和依賴的美國專利號4,226,848和4,250,163中記載的Nagai等的發明。因而，為了本文的用途，可以制備出能粘附口腔粘膜的片劑，其包括(a)水溶脹性的和能粘附粘膜的聚合基質，其包括約50％至約95％重量的纖維素醚和約50％至約95％重量的丙烯酸均聚物或共聚物或其藥學上可接受的鹽，和(b)分散在其中的適宜量的克拉屈濱，作為與2-羥丙基-β-環糊精或γ-環糊精的飽和復合物。理想的是，為了儲存穩定性，該片劑是無水的。
本文所述的方法和藥物組合物能為需要用克拉屈濱治療的患者的治療提供新的治療形式。如本文所表明的，本發明解決了傳統上伴隨著口服克拉屈濱的較差的生物利用度問題。或者，通過施用透粘膜的輸送形式，可以完全避免口胃途徑。
本發明的組合物特別適用于作為治療任何克拉屈濱反應性疾病的療法。文獻中充分記載了對克拉屈濱有反應的幾種疾病狀態(見下文)。對于任意的目標疾病狀態，使用有效量的優化的克拉屈濱-環糊精復合物(例如，對于治療多發性硬化、類風濕性關節炎或白血病有效的量)。
術語″治療有效量″或″有效量″用于表示在能有效地實現追求的治療結果的劑量的治療。在文獻中所述的治療上有效的劑量包括對下述疾病的治療有效量毛細胞白血病(0.09mg/kg/天，進行7天)，多發性硬化(約0.04至約1.0mg/kg/天(見美國專利號5,506,214))；其它疾病，也見美國專利號5,106,837(自身溶血性貧血)；5,310,732(炎性腸病)；5,401,724(類風濕性關節炎)；5,424,296(惡性星形細胞瘤)；5,510,336(組織細胞增多病)；5,401,724(慢性髓性白血病)；和6,239,118(動脈粥樣硬化)。
另外，不同的劑量和給藥方案已經記載在文獻中，用于治療多發性硬化；見，例如Romine等，Proceedings of the Association ofAmerican Physicians，第111卷，第1期，35-44(1999)；Selby等，The Canadian Journal of Neurological Sciences，25，295-299(1998)；Tortorella等，Current Opinion in InvestigationalDrugs，2(12)，1751-1756(2001)；Rice等，Neurology，54，1145-1155(2000)；和Karlsson等，British Journal ofHaematology，116，538-548(2002)；它們都在這里整體引作參考和依賴。
而且，應當考慮文獻中教導了治療有效劑量的給藥途徑。盡管本發明的組合物在經口或透粘膜施用后能優化克拉屈濱的生物利用度，應當明白，即使是來自口服或透粘膜劑型的最佳生物利用度，也不能期望會接近在靜脈內施用后獲得的生物利用度，特別是在較早的時間點；見，例如，下文中的圖3。因而，經常需要增加為靜脈內施用推薦的劑量，以達到整合進固體口服劑型或透粘膜劑型的合適劑量。目前認為，對于多發性硬化的治療，每天施用一次在本固體劑型中的作為飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的10mg克拉屈濱，在第一個月持續5-7天，在第二個月重復另外的5-7天，然后10個月不治療。或者，給患者每天施用一次10mg劑量，每月5-7天，持續6個月，然后18個月不治療。對于其它的給藥信息，也見美國臨時專利申請號[IVAX0021-P-USA/代理人案號033935-011]，和美國臨時專利申請號[IVAX0022-P-USA/代理人案號033935-012]，二者的標題都是″Cladribine Regimen for Treating Multiple Sclerosis″，于2004年3月25日提交，它們在這里整體引作參考。
而且，技術人員能夠明白，通過微調和/或通過與其它活性成分一起施用根據本發明的克拉屈濱，可以降低或提高在本文中施用的克拉屈濱的治療有效量。因此，本發明提供了使給藥/治療與針對給定的哺乳動物的具體情況相適應的方法。可以容易地確定治療有效量，例如，經驗性地從相對小量開始，并逐步增加，同時評價有益效果。
如前面段落中所述的，施用根據本發明的克拉屈濱，可以伴隨著施用一種或多種用于治療克拉屈濱反應性病癥的其它活性成分。以與每種其它的活性成分和治療的病癥相適應的給藥途徑、劑量和頻率，施用其它的活性成分。例如，在多發性硬化的治療中，其它有用的藥物包括干擾素β(Rebif，Betaseron/Betaferon，Avonex)，其與在人體內發現的天然存在的蛋白相同；格拉默醋酸酯(Copaxone)，即氨基酸谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸和酪氨酸的隨機鏈(聚合物)；那他珠單抗(Antegren)，即一種單克隆抗體；阿侖單抗(Campath-1H)，人源化的抗-CD52單克隆抗體；4-氨基吡啶(也稱作4-AP和氨吡啶)，即一種能阻斷神經元中的鉀通道的藥物；和金剛烷胺，即一種可以改善肌肉控制和減少肌肉僵硬且用于減輕多發性硬化中的疲勞癥狀的抗病毒藥物，為此目的，還可以使用匹莫林(Cylert)和L-肉毒堿(一種草藥制品)。在毛細胞白血病的治療中，其它的活性成分可包括干擾素α，噴司他丁，氟達拉濱，美羅華(一種抗-CD20單克隆抗體)和抗-CD22重組免疫毒素BL22；其它附加的活性成分在其它類型的白血病中可能是適當的。在類風濕性關節炎的治療中，可以選擇許多其它的活性成分。它們包括NSAIDS(非甾體抗炎藥)，其有3種類型水楊酸鹽例如阿司匹林，傳統的NSAIDS例如布洛芬和吲哚美辛，和COX-2抑制劑例如塞來昔布(Celebrex)，羅非考昔(Vioxx)，美洛昔康(Mobic)，伐地考昔(Bextra)，lumiracoxib(Prexige)和艾托考昔(Arcoxia).可以與本發明聯合使用的用于治療類風濕性關節炎的其它藥物包括DMARDS，糖皮質激素，生物反應調節劑和非-NSAID的止痛劑。DMARDS是疾病調節性抗風濕藥，其包括氨甲蝶呤，氯喹，來氟米特(Arava)，柳氮磺吡啶，金，青霉胺，環孢霉素，甲基環磷酰胺和硫唑嘌呤。糖皮質激素包括地塞米松，潑尼松龍，曲安西龍和許多其它藥物。生物反應調節劑(其能恢復免疫系統的與疾病斗爭的能力)包括依那西普(Enrel)，一種腫瘤壞死因子抑制劑，英夫利昔單抗(Remicade)，其也是一種抗-TNF藥，阿那白滯素(Kineret)，即一種選擇性的IL-1阻斷劑，和Humira，即一種人單克隆抗體，其是另一種抗-TNF藥。非-NSAID的止痛劑包括對乙酰氨基酚以及麻醉性的止痛劑例如氫可酮，羥考酮和右丙氧芬。一般而言，其作用機理與克拉屈濱不同的那些藥物對于和本文所述的克拉屈濱組合物一起治療是特別有益的。可以將單一劑型的經口或透粘膜施用途徑有效的、且與本發明克拉屈濱復合物相容的那些藥物整合進本劑型中；另外，它們當然可以以適合它們的量、頻率和施用途徑分開地施用。
如本文所使用的，″治療″指，與未根據本發明治療的個體的癥狀相比，減輕、預防、阻止已經給其施用了本發明化合物的個體中的癥狀的發展，控制、減輕和/或逆轉其癥狀。從業人員能夠明白，根據熟練的操作人員(醫生或獸醫)的連續臨床評價來確定后續的治療，使用本文所述的復合物、組合物、劑型和方法。這樣的評價會輔助和告知驗證是否增加、減少或繼續特定的治療劑量和/或改變給藥方式。
本發明的方法意在用于可以從本發明的方法獲益的任何對象/患者。因而，根據本發明，術語″對象″以及″患者″包括人和非人的對象，特別是家畜。
技術人員已知的任何合適的材料和/或方法都可以用于實施本發明。但是，描述了優選的材料和方法。除非另有說明，在下面的說明和實施例中提及的材料和試劑等都可以從商業來源得到。
下面的實施例意在進一步說明本發明的某些優選實施方案，而不是限制性的。僅僅使用常規實驗，本領域的技術人員能夠認識到或能夠確定本文所述的具體物質和方法的許多等同方案。
實施例實施例1相溶解度研究如下進行相溶解度研究。將過量的克拉屈濱加入不同濃度的γ-環糊精(γCD)或羥丙基-β-環糊精(HPβCD)的環糊精溶液中，如下面的實施例2所述進行復合。另外，在一組實驗中，研究了羥丙基甲基纖維素(HPMC)對復合的影響。通過過濾去除多余的未溶解的克拉屈濱。檢測復合溶液中的克拉屈濱的量，得到數據點。使用不同的已知濃度的環糊精重復該方法，直到得到幾個數據點。然后用這些數據點繪圖，每個數據點代表可以與特定濃度的環糊精復合的克拉屈濱的最大量，即每個點代表一種飽和的克拉屈濱-環糊精復合物。由數據點生成的線上的點代表HTA比。該線上的任意點代表一種特定的、唯一的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物。本領域的技術人員能夠認識到，如果將過量的環糊精加入到已知濃度的克拉屈濱溶液中，可以得到相同的結果。
作為一個實例，制備了不同濃度的環糊精溶液，并通過提供過量的克拉屈濱，用克拉屈濱飽和。下面的表I列出了對于給定的環糊精濃度的給定環糊精的飽和環糊精溶液。
表I

用表I中的克拉屈濱對環糊精的摩爾濃度繪圖，表示為圖1。為克拉屈濱-HPβCD、克拉屈濱-HPβCD和0.1％HPMC以及克拉屈濱-γCD繪出的線代表實驗條件下的最大克拉屈濱溶解，即克拉屈濱濃度與環糊精濃度的HTA比。每條圖線上面的面積代表存在著過量的不溶的克拉屈濱的情況。每條圖線下面的面積代表環糊精超過了將復合物維持在溶液中所需的量的情況。顯然，表I和圖1中的數據表明，HPMC(一種已知的復合促進劑)在較低的濃度時沒有作用，且在較高的濃度時具有負面作用。
在圖1中顯示的克拉屈濱-HPβCD的HTA圖是近似線性的；這指示著1∶1復合物，其中1分子的藥物與1分子的環糊精復合。圖1還表明，需要額外的環糊精來將克拉屈濱維持在復合物中。例如，在γ-環糊精的情況中，需要約0.10摩爾γCD來將約0.01摩爾克拉屈濱維持在其飽和復合物中；在HPβGD的情況中，需要約0.10摩爾環糊精來將約0.017摩爾克拉屈濱維持在其飽和的復合物。但是，在γCD的情況中，在更高濃度的環糊精時，藥物溶解度顯著提高；對于約0.15摩爾濃度的γCD，線的斜率改變，表明形成了克拉屈濱與環糊精的1∶2復合物，也就是說，1分子的克拉屈濱與2分子的γ-CD復合，后者實質上包圍和保護克拉屈濱分子。
認為在高環糊精濃度下，2分子的γ-CD彼此通過氫鍵結合，并將克拉屈濱分子包入它們之間的空腔。認為這是一個逐步的過程，其中首先形成1∶1復合物，然后第二個γ-CD分子與1∶1復合物中的γ-CD通過氫鍵結合，形成1∶2復合物。當然，經常得到1∶1和1∶2復合物的混合物，但是1∶2復合物占優勢是有利的。因而，在γ-CD的情況下，約0.20摩爾濃度的環糊精能將約0.017摩爾克拉屈濱維持在其飽和的復合物中。然后，在更高的環糊精和藥物濃度時，對于給定量的克拉屈濱所需的環糊精的量，在γCD和HPβCD之間差異較小，且與HPβCD相比，γ-CD能成比例地溶解更多的克拉屈濱。由于在更高濃度的γCD下形成的1∶2復合物是比1∶1復合物更強的復合物，當這樣的1∶2復合物在粘膜處的體液中釋放藥物時形成的飽和溶液中的克拉屈濱是更不穩定的，即具有比從1∶1復合物中釋放出的克拉屈濱更高的熱力活性，有利于藥物通過粘膜的更強移動。與γCD的復合物也是有利的，因為γCD是天然的環糊精，因而存在較少的組織相對毒性。而且，在固體口服劑型的情況下，認為與γ-CD的1∶2復合物能更好地保護克拉屈濱免受胃酸的攻擊，因為它能以環糊精基本上包圍藥物分子，因而能獨特地較好地適用于本發明的目的。
實施例2克拉屈濱-環糊精復合物的制備A部分通過下面的一般方法，使克拉屈濱與HPβCD或γCD復合。
將過量的克拉屈濱的水性懸浮液和環糊精的濃溶液(對于γ-環糊精，大約27％；對于HPβCD，大約40％)在室溫攪拌混合約9小時。這會達到平衡。過濾去除可能存在的過量的未復合的克拉屈濱。為了形成固體飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，在整合進固體口含或口服片劑之前，凍干干燥水性克拉屈濱-環糊精溶液。凍干方法包括使復合溶液迅速降到約-40℃至約-80℃的溫度維持約2至4小時、優選約3至4小時的冷凍階段，例如約-45℃的溫度維持約200分鐘，隨后進行在約-25℃維持約80-90小時的首次干燥階段，典型地在低壓下，然后進行在約30℃維持約15-20小時的二次干燥階段。
通過HPLC(使用Hypersil ODS 3微米柱和基于乙腈的流動相，在264nm進行紫外線檢測)，可以分析通過前述一般方法制備的產物，以確定終產物中的克拉屈濱與環糊精的重量比。通過本領域已知的方法，包括例如通過檢查外觀，通過HPLC確定總雜質含量，使用KarlFischer滴定儀確定水含量，通過標準方法檢測溶解性，例如使用USP<711>Apparatus II裝置和在264nm進行紫外線檢測，檢查含量均勻性和通過HPLC分析活性成分進行定量測定，可以進一步表征終產物制品。
B部分通過前述的一般方法，如下制備了2批克拉屈濱/環糊精產物使用了γ-CD的FD02和使用了HPβCD的FD03
對于每批，將純化水(對于FD02，585ml；對于FD03，575ml)分配到1升玻璃瓶中。稱量γ-環糊精(116g)和2-羥丙基-β-環糊精(115g)，經30分鐘緩慢地加入攪拌的水中。稱量克拉屈濱(對于FD02，2.53g；對于FD03，2.76g)，加入各自的攪拌的環糊精溶液中。超聲處理溶液20分鐘。在室溫攪拌得到的澄清溶液9小時。將溶液裝入100ml凍干瓶中(20ml溶液/瓶)，部分地塞住填充的瓶子。凍干包括在-45℃冷凍約3.3小時，在-25℃、100毫托的壓力下進行首次干燥階段約85.8小時，在30℃進行二次干燥階段約約17.5小時，如下所述凍干周期

通過HPLC(使用Hypersil ODS 3微米柱和基于乙腈的流動相，在264nm進行紫外線檢測)，分析了通過前述方法制備的FD02和FD03批次的克拉屈濱/環糊精，經驗性地發現其具有下述特征

通過DSR和X-射線衍射方法，分析了產物，以確定凍干產品中的任何游離的克拉屈濱。重要的是，樣品在210℃至230℃的區域沒有表現出躍遷，后者與晶體克拉屈濱的熔解有關。在兩種情況下，在210℃至230℃的范圍內，都沒有記錄到顯著的熱活性，表明在凍干結束時得到的復合物不具有任何顯著量的游離晶體克拉屈濱，考慮到分析方法的靈敏度(至多3％重量/重量)。2批復合物FD02和FD03的X-射線衍射痕跡中沒有晶體克拉屈濱的峰，也支持該結論。
如上所述，這些克拉屈濱∶環糊精復合物具有下述的克拉屈濱∶環糊精重量比對于克拉屈濱∶γ-環糊精，為約1∶46；對于克拉屈濱∶羥丙基-β-環糊精，為約1∶42。接近這些值的克拉屈濱∶環糊精重量比，例如約1∶35至約1∶50，是最理想的。這些比例可以根據使用的具體環糊精和在復合溶液中環糊精的量以及復合溫度而變化。
實施例3藥物動力學研究在畢爾格獵犬模型中，評價了克拉屈濱在與γCD或HPβCD復合時的生物利用度。預期從該模型得到的數據對于人體應用能有代表性。
將如實施例2的B部分制備的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物FD02和FD03用于制備口服和口含片劑。復合物材料與硬脂酸鎂穿過18目(0.9mm)篩，混合5分鐘，使用10mm沖壓機壓制。該10mm片劑具有上面略凸的形狀和下面平斜邊的形狀。生產配方如下表II，A部分

*該量的復合物含有約5mg克拉屈濱/片。
表II，B部分

如下在畢爾格獵犬模型中進行了生物利用度和藥物動力學研究。
使從IDRI(Dunakeszi，Hungary)得到的遠系繁殖的雄性畢爾格獵犬(稱作PM01-PM06)隨意獲取實驗室飲食和水。在整個研究中使用相同的狗，以使對象間的和對象內的差異性最小。如下進行生物利用度和藥物動力學研究。
在第一次實驗階段，給實驗對象靜脈內施用5mg克拉屈濱(0.25mg/ml，在等滲鹽水中)。在48小時內，以不同的時間間隔收集血樣。在第二次實驗階段，一半對象口腔接受如上所述的含有飽和的克拉屈濱-γCD或-HPβCD復合物的片劑。在48小時內，收集系列血樣。第三次實驗階段重復第二次實驗階段，只是以前接受γ-環糊精口含片劑的對象現在接受羥丙基-β-環糊精口含片劑，第二階段的羥丙基-β-環糊精片劑接受者現在接受γ-環糊精口含片劑。第四和第五實驗階段重復實驗階段2和3，只是經口服給予片劑。
通過HPLC和LC/MS/MS方法，檢測血液中的克拉屈濱水平。使用TopFit 2.0藥物動力學和藥效學數據分析系統來進行數據的藥物動力學分析。將對照(靜脈內的)和克拉屈濱-環糊精復合物的生物利用度研究的結果顯示在表III至VII中，并總結在表VIII中。
表III中的各列的標頭定義如下Cinitial是推注結束時的外推值；Cfirst是在施用劑量后5分鐘首次測定的濃度；
t1/2 terminal是終末消除半衰期；AUD是測得的數據下的面積，以線性梯形規則積分；AUDext是從最后測量的時間點至無窮的外推面積；AUC是外推至無窮的AUD；CItot是總體清除率(劑量/AUC)；和MRTtot是平均停留時間。
表IV至VII中的各列的標頭定義如下Cmax是測得的峰濃度；Tmax是至Cmax的時間；t1/2 terminal是終末消除半衰期；AUD是測得的數據下的面積，以線性梯形規則積分；AUDext是從最后測量的時間點至無窮的外推面積；AUC是外推至無窮的AUD；MRTtot是平均停留時間；和F是以％表達的生物利用度。
使用Analyst Software 1.1(PE SCIEX，Foster City，US)，確定峰面積、校準曲線、準確度、精密度值和濃度。為了計算平均值和標準偏差，使用了Excel 5.0軟件。使用分析物和內部標準品的濃度比相對于它們的峰面積比，擬合校準曲線。通過加權的最小平方線性回歸分析，在實驗點上擬合直線。使用的加權方案是1/濃度平方(pg/ml血漿)。
在靜脈內施用后早期的時間點，血漿濃度超過了校準曲線的上限。因而重新注射更小量的樣品，以證實線性檢測器反應。由于標準品/內部標準品比在適當的檢測器反應保持相同，可以接受超過100ng/ml的濃度。為了計算平均值、標準偏差和CV％，使用了Excel 5.0軟件。不接受低于定量限的水平。僅僅對靜脈內施用后測得的濃度計算平均值和標準偏差值。
表III

表IV

表V

*從均值排除(因為受試對象吞下了藥物劑型)
表VI

*從均值排除(因為獲得的值與其它受試對象相比高度反常)
表VII

表VIII

*從均值排除(因為獲得的值與其它對象相比高度反常)**從均值排除(因為受試對象吞下了藥物劑型)a過量的環糊精，約是用于飽和復合物的10倍。
這些研究中的環糊精的總量是對5mg克拉屈濱約2.5gm。
基于各血漿濃度對時間的曲線，進行藥物動力學分析。計算從各數據得到的參數的平均值和標準偏差。使用線性-梯形規則計算從0至最后測量濃度的血漿濃度-時間曲線下面積(AUD)。使用終點回歸線，以下述方式計算外推至無窮的面積(AUCt→∞)AUCt→∞＝Ccalc/λz其中，Ccalc代表通過在測得的濃度大于定量限的最后取樣時間點的回歸線估計的血漿濃度，λz代表從回歸線計算出的速度常數。
通過半對數曲線的線性部分的視覺確定，選擇決定回歸線(即最終階段)的各點。通過將部分面積加在一起，計算出總曲線下面積(AUC)AUC＝AUD+AUCt→∞。用在特定階段施用的實際劑量使AUC值標準化。為了計算生物利用度，將口含/口服AUC/劑量值除以靜脈內AUC/劑量值。
得到了個體的血漿水平-時間曲線。在靜脈內施用后發現較小的個體間差異性。非常快的初始降低后，克拉屈濱的經未消除半衰期是約10小時。證實了平均總體清除率是17ml/min/kg。在口含施用2種制劑的過程中，克拉屈濱γ-環糊精復合物的溶解期比克拉屈濱HP-β-環糊精復合物長。盡管在口含和口服施用后峰濃度和吸收特征均表現出了較高的個體間差異性，總暴露值(AUC)表現出低得多的差異性。證實了口服生物利用度是好的γ-環糊精和羥丙基-β-環糊精復合物分別是50±3％和45±5％。口含生物利用度值較低γ-環糊精復合物的為37±10％，羥丙基-β-環糊精復合物的為30±4.5％。
在下面的表IX中顯示了進一步對比γ-環糊精復合物和混合物的狗藥物動力學研究的結果。″口服復合物″列描述了在2.5g γ-環糊精中的5mg克拉屈濱的絕對生物利用度結果；這約是5mg克拉屈濱飽和復合物中的環糊精量的10倍。該制劑與″口服混合物″列相同，只是制備了復合物，而不是僅僅混合各組分。″口服混合物″和″口服復合物″的結果是可比較的，表明使用這樣大的過量的環糊精，在溶解過程中會形成復合物，干擾溶解，并對生物利用度產生負作用。如前使用相同的狗和相同的實驗方法。這些結果表明，使用過量的環糊精是達不到預期目標的，即基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物提供了增強的生物利用度和降低的患者間差異性。
表IX

*從平均值排除a過量的環糊精，約是用于飽和復合物的10倍。這些研究中的環糊精的總量是對于5mg克拉屈濱約2.5gm。
將前述藥物動力學研究的結果表示在圖2-6中。
圖2顯示了以上述的不同制劑施用5mg單次劑量后，克拉屈濱在狗中的血漿曲線，其中數據是平均值±標準偏差，每組5-6只動物。用血漿的平均藥物濃度(pg/ml)對時間(小時)繪圖。盡管每個實驗進行48小時，僅僅將前6小時表示在圖中；6小時后，大多數濃度已回歸至或接近基線，因此沒有顯示在圖中。認為靜脈內的值(◇)能產生100％生物利用度，并與其對比了口服和口含形式的血漿水平。標識的含義見上文的“

”。在這些實驗中發現，與γ-環糊精(*)和羥丙基-β-環糊精(x)的飽和復合物的口含制劑不如口服制劑有效，這可以從圖2中容易地看出。關于5種不同的口服制劑的結果，可以參考圖3-5更容易地看出。
圖3對比了靜脈內的制劑(◆)、口服飽和的克拉屈濱-γ-環糊精復合物制劑(●)和口服飽和的克拉屈濱-羥丙基-β-環糊精復合物制劑(▲)(圖2所示)的血漿曲線。這兩種口服制劑均提供了理想的特征。
圖4對比了口服飽和的克拉屈濱-γ-環糊精復合物制劑(●)、克拉屈濱與10倍過量的γ-環糊精的物理混合物的口服膠囊(○)克拉屈濱-γCD復合物與10倍過量的γ-環糊精的口服膠囊(□)圖2所示的血漿曲線。從中可以看出，過量的環糊精會減少血漿中的克拉屈濱的量，特別是在施用后的前1小時。
圖5對比了口服飽和的羥丙基-β-環糊精復合物制劑(▲)和克拉屈濱與10倍過量的羥丙基-β-環糊精的物理混合物的口服膠囊(△)(圖2所示)的血漿曲線。從中再次可以容易地看出，過量的環糊精會減少復合物中的克拉屈濱的量。在該情況下，在施用后的前2小時看到了減少。
圖6說明了對于圖2所示的8種制劑的累積曲線下面積(AUC)(pgxh/ml)。同樣，數據是每組5-6只動物的平均值。
因而各示說明了表III至IX中的數據所顯示的內容，即制成固體口服或透粘膜劑型的基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物能夠增強生物利用度，同時具有可接受的患者間差異性。
認為前面的內容僅僅用于解釋本發明的原理。而且，由于本領域的技術人員能容易地想到進行許多改進和變化，不應當將本發明限于所示的和描述的精確構成和操作，因此，可以實現的其所有合適的改進和等同方案都在要求保護的本發明的范圍內。
權利要求
1.制成固體口服劑型或透粘膜劑型的含有飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的藥物組合物，所述的組合物基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。
2.制成固體口服劑型或透粘膜劑型的含有飽和的克拉屈濱-環糊精復合物的藥物組合物，所述的組合物基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
3.根據權利要求1或2的組合物，其中飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型。
4.根據權利要求1，2或3的組合物，其中環糊精是γ-環糊精，羥丙基-β-環糊精，羥丙基-γ-環糊精，二甲基-β-環糊精，隨機甲基化的β-環糊精，羧甲基-β-環糊精或硫丁基-β-環糊精。
5.根據權利要求1，2或3的組合物，其中環糊精是γ-環糊精。
6.根據權利要求1，2或3的組合物，其中環糊精是羥丙基-β-環糊精。
7.根據權利要求5的組合物，其中復合物包含1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物。
8.根據權利要求4，5或6的組合物，其中克拉屈濱與環糊精的重量比是約1∶35至約1∶50。
9.根據權利要求5的組合物，其中克拉屈濱與γ-環糊精的重量比是約1∶46。
10.根據權利要求6的組合物，其中克拉屈濱與羥丙基-β-環糊精的重量比是約1∶42。
11.根據權利要求2-6中的任一項的組合物，其中克拉屈濱與環糊精的近似摩爾比對應著位于克拉屈濱在不同濃度的環糊精中的飽和復合物的相溶解度圖上的點。
12.根據權利要求11的組合物，其中環糊精是γ-環糊精，且該點取自指示著形成克拉屈濱∶γ-環糊精的1∶2復合物的相溶解度圖部分。
13.提高克拉屈濱的口服或透粘膜的生物利用度的方法，包括給需要的對象施用藥物組合物，其包含制成固體口服劑型或透粘膜劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，所述的組合物基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。
14.提高克拉屈濱的口服或透粘膜的生物利用度的方法，包括給需要的對象施用藥物組合物，其包含制成固體口服劑型或透粘膜劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，所述的組合物基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
15.根據權利要求13或14的方法，其中飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型。
16.根據權利要求13，14或15的方法，其中環糊精是γ-環糊精，羥丙基-β-環糊精，羥丙基-γ-環糊精，二甲基-β-環糊精，隨機甲基化的β-環糊精，羧甲基-β-環糊精或硫丁基-β-環糊精。
17.根據權利要求13，14或15的方法，其中環糊精是γ-環糊精。
18.根據權利要求13，14或15的方法，其中環糊精是羥丙基-β-環糊精。
19.根據權利要求17的方法，其中復合物包含1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物。
20.根據權利要求16，17或18的方法，其中克拉屈濱與環糊精的重量比是約1∶35至約1∶50。
21.根據權利要求17的方法，其中克拉屈濱與γ-環糊精的重量比是約1∶46。
22.根據權利要求18的方法，其中克拉屈濱與羥丙基-β-環糊精的重量比是約1∶42。
23.根據權利要求14-18中的任一項的方法，其中克拉屈濱與環糊精的近似摩爾比對應著位于克拉屈濱在不同濃度的環糊精中的飽和復合物的相溶解度圖上的點。
24.根據權利要求23的方法，其中環糊精是γ-環糊精，且該點取自指示著形成克拉屈濱∶γ-環糊精的1∶2復合物的相溶解度圖部分。
25.治療患有克拉屈濱反應性病癥癥狀的對象的所述癥狀的方法，包括給所述的對象施用藥物組合物，其包含制成固體口服劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，所述的組合物基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。
26.治療患有克拉屈濱反應性病癥癥狀的對象的所述癥狀的方法，包括給所述的對象施用藥物組合物，其包含制成固體口服劑型的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物，所述的組合物基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
27.根據權利要求25或26的方法，其中克拉屈濱反應性病癥選自多發性硬化，類風濕性關節炎和白血病。
28.根據權利要求27的方法，其中克拉屈濱反應性病癥是多發性硬化。
29.根據權利要求25，26，27或28的方法，其中飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型。
30.根據權利要求25-29中的任一項的方法，其中環糊精是γ-環糊精，羥丙基-β-環糊精，羥丙基-γ-環糊精，二甲基-β-環糊精，隨機甲基化的β-環糊精，羧甲基-β-環糊精或硫丁基-β-環糊精。
31.根據權利要求25-29中的任一項的方法，其中環糊精是γ-環糊精。
32.根據權利要求25-29中的任一項的方法，其中環糊精是羥丙基-β-環糊精。
33.根據權利要求30，31或32的方法，其中克拉屈濱與環糊精的重量比是約1∶35至約1∶50。
34.根據權利要求31的方法，其中克拉屈濱與γ-環糊精的重量比是約1∶46。
35.根據權利要求32的方法，其中克拉屈濱與羥丙基-β-環糊精的重量比是約1∶42。
36.根據權利要求31的方法，其中復合物包含1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物。
37.提高來自施用給需要用克拉屈濱治療的哺乳動物的固體口服或透粘膜劑型的克拉屈濱的生物利用度的方法，所述的方法包括(a)確定與選定量的克拉屈濱復合和將所述選定量的克拉屈濱維持在復合物中所需的環糊精的最小量；(b)使超過所述選定量的克拉屈濱與所述的最小量的環糊精在水性介質中合并；(c)從水性復合介質中去除未復合的克拉屈濱；(d)從水性復合介質中去除水，得到干的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物；(e)將所述的干的飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型或透粘膜劑型，其基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精；和(f)將所述的劑型經口地或透粘膜地施用給所述的哺乳動物。
38.飽和的克拉屈濱-環糊精復合物在制備用于給藥以治療克拉屈濱反應性病癥癥狀的固體口服劑型或透粘膜劑型中的應用，所述的劑型基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。
39.飽和的克拉屈濱-環糊精復合物在制備用于給藥以治療克拉屈濱反應性病癥癥狀的固體口服劑型或透粘膜劑型中的應用，所述的劑型基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
40.根據權利要求38或39的應用，其中克拉屈濱反應性病癥選自多發性硬化，類風濕性關節炎和白血病。
41.根據權利要求40的應用，其中克拉屈濱反應性病癥是多發性硬化。
42.根據權利要求38，39，40或41的應用，其中飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型。
43.根據權利要求38-42中的任一項的應用，其中環糊精是γ-環糊精，羥丙基-β-環糊精，羥丙基-γ-環糊精，二甲基-β-環糊精，隨機甲基化的β-環糊精，羧甲基-β-環糊精或硫丁基-β-環糊精。
44.根據權利要求38-42中的任一項的應用，其中環糊精是γ-環糊精。
45.根據權利要求38-42中的任一項的應用，其中環糊精是羥丙基-β-環糊精。
46.根據權利要求43，44或45的應用，其中克拉屈濱與環糊精的重量比是約1∶35至約1∶50。
47.根據權利要求44的應用，其中克拉屈濱與γ-環糊精的重量比是約1∶46。
48.根據權利要求45的應用，其中克拉屈濱與羥丙基-β-環糊精的重量比是約1∶42。
49.根據權利要求44的應用，其中復合物包含1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物。
50.飽和的克拉屈濱-環糊精復合物在制備用于提高克拉屈濱的口服或透粘膜的生物利用度的固體口服劑型或透粘膜劑型中的應用，所述的劑型基本上不含有超過使復合物中的克拉屈濱的量最大化所需的最小量的環糊精。
51.飽和的克拉屈濱-環糊精復合物在制備用于提高克拉屈濱的口服或透粘膜的生物利用度的固體口服劑型或透粘膜劑型中的應用，所述的劑型基本上不含有超過將基本上所有的克拉屈濱維持在復合物中所需的最小量的環糊精。
52.根據權利要求50或51的應用，其中飽和的克拉屈濱-環糊精復合物制成固體口服劑型。
53.根據權利要求50，51或52的應用，其中環糊精是γ-環糊精，羥丙基-β-環糊精，羥丙基-γ-環糊精，二甲基-β-環糊精，隨機甲基化的β-環糊精，羧甲基-β-環糊精或硫丁基-β-環糊精。
54.根據權利要求50，51或52的應用，其中環糊精是γ-環糊精。
55.根據權利要求50，51或52的應用，其中環糊精是羥丙基-β-環糊精。
56.根據權利要求53，54或55的應用，其中克拉屈濱與環糊精的重量比是約1∶35至約1∶50。
57.根據權利要求54的應用，其中克拉屈濱與γ-環糊精的重量比是約1∶46。
58.根據權利要求55的應用，其中克拉屈濱與羥丙基-β-環糊精的重量比是約1∶42。
59.根據權利要求54的應用，其中復合物包含1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物。
60.1∶2的克拉屈濱γ-環糊精復合物。
61.1∶1克拉屈濱∶γ-環糊精復合物和1∶2的克拉屈濱∶γ-環糊精復合物的混合物，其中1∶2復合物是主要的。
全文摘要
本發明提供了克拉屈濱和環糊精的組合物，其特別適于經口和口含施用克拉屈濱。
文檔編號A61K31/519GK1787810SQ200480012714
公開日2006年6月14日 申請日期2004年3月26日 優先權日2003年3月28日
發明者N·S·博多 申請人:伊瓦克斯公司