專利名稱：人β－2整聯蛋白α亞基的制作方法
技術領域：
本發明涉及編碼新的人β2整聯蛋白α亞基的多核苷酸的克隆和表達，這種新的人β2整聯蛋白α亞基被稱為αd，在結構上與已知人β2整聯蛋白α亞基CD11a、CD11b和CD11c相關。本發明亦涉及從其他物種中分離的，顯示出與人αd編碼序列同源性的多核苷酸。
背景技術：
整聯蛋白是一組膜聯蛋白，它們主動參與細胞粘著。整聯蛋白是包含一個與β亞基非共價相聯的一個α亞基的跨膜異二聚體。迄今，至少鑒定了14種α亞基和8種β亞基〔參見Springer綜述，自然346425-434(1990)〕。一般地，將能與多于一個α亞基相聯的β亞基和共享一個共同的β亞基的異二聚體分類為整聯蛋白類群中的亞家族。
一組被限于在白細胞中表達的人整聯蛋白的特征是共同的β2亞基。這種細胞特異性表達的結果是，這些整聯蛋白一般被稱為白細胞整聯蛋白，Leu-CAM或白細胞整聯蛋白(leucointegrin)。因為該共同的β亞基，這一類群的另一種名稱是β2整聯蛋白。先前，已將β2亞基(CD18)與三種不同的α亞基，CD11a，CD11b和CD11c之一種相結合分離出來。編碼人CD18的cDNA的分離之描述見Kishimoto等人，細胞48681-690(1987)。在正式的WHO命名法中，異二聚體蛋白被稱為CD11a/CD18，CD11b/CD18和CD11c/CD18；在普通命名法中，它們分別被稱為LFA-1，Mac-1或Mol和p150，95或LeuM5〔Cobbold等，白細胞分型III，McMichael(編)牛津出版社，p.788(1987)〕。已證實人β2整聯蛋白α亞基CD11a，CD11b和CD11c在還原條件下，在電泳時分別以大約180kD，155kD和150kD的表觀分子量遷移，已經克隆了編碼這些亞基的DNA〔CD11a，Larson，et al.，細胞生物學雜志，108703-712(1989)；CD11b Corbi et al，生化雜志26312403-12411(1988)和CD11c，Corbi，等EMBO J.64023-4028(1987)〕。由分子量近似一致性所確定的、假定的人β2整聯蛋白同系物，在包括猴和其它靈長類〔Letvin等，血液，Blood 61408-410(1983)〕，小鼠〔Sanchez-Madrid，et al.，實驗醫藥雜志1541517(1981)〕，和狗〔Moore，et al.，組織抗原36211-220(1990)〕的其他物種中，被各不相同地鑒定。
來自其它物種的假定同系物的絕對分子量顯示出明顯的變動〔見，例如，Danilenko等，組織抗原4013-21(1992)〕，而且在缺乏序列資料的條件下，人整聯蛋白亞基和那些在其他物種中鑒定的分子之間的確定的相關性是不可能的。而且，亦觀察到不同物種之間，蛋白質家族的成員的數目是變動的。例如，考慮到在兔中比在人類中分離到更多的IgA同種型〔Burnett.等，EMBO J.84041-4047(1989)和Shneiderman等，美國國家科學院院報(USA)867561-7565(1989)〕同樣的，在人類中，先前至少有金屬硫蛋白的六種變體被鑒定〔Karin和Richards，自然299797-802(1982)和Varshney.等，分子細胞生物學626-37(1986)〕，而在小鼠中，僅有兩種此類變體是明顯的〔Searle.等，分子細胞生物學41221-1230(1984)〕因而，一個物種中的某一蛋白質家族的多個成員的存在并不必然地意味著在其他物種中存在著相應的家族成員。
就具體的β2整聯蛋白而言，在狗中，觀察到推測的人CD18的狗β2相似物能夠與多至四個的潛在的不同的α亞基形成二聚體〔Danilenko等，見上〕。用狗脾細胞免疫小鼠而產生抗體造成了這樣的單克隆抗體，它能夠免疫沉淀試驗性設計的，基于基本相近而不相同的分子量的人CD18，CD11a，CD11b和CD11c的狗同系物的蛋白質。另一個抗狗脾細胞抗體Cal 1.8H2識別并免疫沉淀第四種α樣狗亞基，且能與β2亞基相結合，但具有一獨特的分子量并限于在分化的組織巨噬細胞亞群中表達。
用鼠樹狀細胞免疫倉鼠產生抗體造成了兩種抗-整聯蛋白抗體〔Metlay等，實驗醫學雜志1711753-1771(1990)〕。一種抗體是2E6，免疫沉淀一種主要的異二聚體，該異二聚體具有近似分子量為在分子量范圍為150-160kD的小帶之外的180kD和90kD的亞基。第二種抗體是N418，沉淀另一種明顯的異二聚體。該異二聚體具有近似分子量為150kD和90kD的亞基。基于細胞粘附阻斷實驗，假設抗體2E6識別人CD18的鼠相似物。而N418抗原的分子量則提示識別人CD11c/CD18的鼠同系物，進一步的分析表明鼠抗原展示了與從人CD11c/CD18所觀察的一致的組織分布形式。
由狗Cal 1.8H2抗體和鼠N418抗體識別的抗原能夠代表先前確定的狗和鼠α亞基的變體種類(例如，一種糖基化或剪接變體)。另一種選擇是，這些抗原可能代表獨特的狗或鼠α亞基，在沒有關于一級結構的具體信息情況下，這些選擇方案是不能區別的。
在人類中，CD11a/CD18在所有白細胞上表達。CD11b/CD18和CD11c/CD18基本上限于在單核細胞，粒細胞，巨噬細胞和天然殺傷(NK)細胞上表達，但CD11c/CD18亦在一些B細胞類型上被檢測到一般地，CD11a/CD18主要位于淋巴細胞上，CD11b/CD18則主要位于粒細胞上，而CD11c/CD18主要位于巨噬細胞上〔綜述見Arnaout，血液751037-1050(1990)〕。然而，α鏈的表達隨著各自的細胞類型的激活和分化狀態而變化〔綜述參見，Larson和Springer，Immunol.Rev114181-217(1990)〕使用能夠阻斷β2整聯蛋白相關細胞粘著的單克隆抗體證明了β2整聯蛋白參予了人類免疫和炎癥應答。例如CD11a/CD18，CD11b/CD18和CD11c/CD18主動參予了天然殺傷(NK)細胞與淋巴瘤和腺癌細胞的結合〔Patarrogo，et al.，免疫學綜述11467-108(1990)〕，粒細胞積聚〔Nourshargh et al.，免疫學雜志，1423193-3198(1989)〕，依賴于粒細胞的胞質滲漏〔Arfbrs，等，血液69338-340(1987)〕，經刺激的白細胞的趨化性應答〔Arfors等，見上〕以及白細胞粘著到血管內皮細胞〔Price.等，免疫學雜志1394174-4177(1987)和Smith等，臨床研究雜志J.Clin. Invest.832008-2017(1989)〕。β2整聯蛋白在免疫和炎癥應答中的基礎作用在被稱為白細胞粘著缺陷(LAD)的臨床綜合征中明顯起來，該綜合征的臨床征狀包括復發的和經常危及生命的細菌感染。LAD由β2亞基的異源性突變引起〔Kishimoto，等，細胞50193-202(1987)〕，且疾病狀態的嚴重程度與β2亞基表達缺乏的程度成比例。完整的整聯蛋白異二聚體的形成被β2突變破壞〔Kishimoto等，見上〕。
令人感興趣的是，至少一種特異于CD18的抗體顯示出抑制人類免疫缺陷病毒病毒I型(HIV-1)合胞體病毒在體外的形成，盡管這一抑制的準確機制還不清楚〔Hildreth和Orentas，科學2441075-1078(1989)〕。這一意見與CD11a/CD18的主要反受體ICAM-1的發現相一致，ICAM-1也是鼻病毒血清型的主要類群的一個表面受體〔Greve等，細胞56839(1989)〕。
β2整聯蛋白結合活性在人免疫和炎癥應答中的重要性加強了建立對于這一類表面蛋白的更完整的了解的必要性。鑒定這一亞群的尚且未知成員及其反受體，及產生單克隆抗體或其他可改變β2整聯蛋白的生物學活性的可溶性因子將提供用于治療調停β2整聯蛋白相關的免疫和炎性應答的實際手段。
發明簡述一方面，本發明提供新的純化和分離的編碼新的人β2整聯蛋白α亞基，αd及其變異體(如缺失、添加或替換類似物)的多核苷酸(如DNA和RNA轉錄本，其有義鏈和反義鏈)其中所述變異體具有與αd固有的結合和/或免疫性。優選的本發明的DNA分子包括cDNA，基因組DNA和完全的或部分化學合成的DNA分子。本優選的多核苷酸是SEQ IDNO1給出的DNA，它編碼SEQ ID NO2的多肽。還提供了重組質粒和病毒DNA構建物(表達構建物)，它包括αd編碼序列，其中αd編碼序列可操作地連接到一個或多個同源或異源轉錄調節元件上。
本發明還提供了分離的和純化的、展示了與編碼人αd的多核苷酸同源性的小鼠和大鼠多核苷酸。優選的小鼠多核苷酸在SEQ ID NO52中給出；優選的大鼠多核苷酸在SEQ ID NO54中給出。
本發明的另一方面是提供了用本發明的DNA序列轉化或轉染的原核或真核細胞，其表達αd多肽或其變異體。本發明的宿主細胞在大規模生產αd多肽中特別有用，其中αd多肽可從宿主細胞本身或從宿主細胞生長的培養基中分離。在其細胞外膜表面表達αd多肽的宿主細胞亦可在αd-特異性抗體的生產中用作免疫原。優選地，用αd轉染的宿主細胞可以被共轉染以表達整聯蛋白β2亞基，致使異二聚體的表面表達成為可能。
本發明還提供了純化的和分離的αd多肽，及其片段或變異體。優選的αd多肽是如SEQ ID NO2中所示的。本發明的新的αd產物以及αd變異體產物，可以作為天然來源的分離物得到，但是，優選地由涉及本發明的宿主細胞的重組過程產生。αd多肽的完全糖基化，部分糖基化，和完全脫糖基化形式可以通過改變選擇用于重組子生產的宿主細胞和/或分離后加工而產生。本發明的變異體αd多肽可包括水溶性的或水不溶性的αd多肽，其包括其中一個或多個氨基酸被缺失或取代的類似物(1)并不喪失，而且優選提高一種或一種以上αd特異性生物學活性或免疫學特性，或(2)特異性失去一種具體配體/受體結合功能或信號功能。還提供融合多肽，其中αd氨基酸序列與來自其他多肽的氨基酸序列連續地表達。與野生型αd相比，這樣的融合多肽具有修飾的生物學的，生物化學的和免疫學的特性。考慮包含便于形成多體的附加氨基酸(例如，賴氨酸或半胱氨酸)殘基的類似物多肽。
本發明還包括與αd特異性結合的多肽和其它非肽分子。優選的結合分子包括抗體(如單克隆和多克隆抗體)，反受體(如，天然地發生的或合成的分子)和其它配體，包括那些當αd單克隆抗體和/或特異性反受體出現時，競爭性結合αd的配體。結合分子可用于αd多肽的純化和鑒定表達αd的細胞型。結合分子還可用于αd的體內結合和/或信號傳導活性的調制(即，抑制，阻斷或刺激)。
還提供了αd結合分子的試驗，包括固定化配體結合試驗，溶液結合試驗，閃爍接近(scintillation proximity)，雙-雜交篩選實驗，等。
用于鑒定抗體或其他調制αd活性的化合物的體外實驗可以涉及，例如，固定化αd或αd與之結合的天然配體，可檢測地標記非固定化的結合伙伴，將結合伙伴共同溫育并確定測試化合物在標記結合的量的影響，其中，在測試化合物存在的情況下標記結合與測試化合物不存在的情況下標量結合量相比減少表明測試試劑是αd結合的抑制劑。
用于鑒定調制αd與其配體之間相互作用的化合物的另一種實驗類型涉及將αd或其片段固定化于包被了(或浸透了)熒光劑的固體支持物上，將配體用能夠激發熒光劑的化合物標記，在推定的調制物化合物存在或不存在的情形之下，將固定化αd與標記的配體相接觸，檢測熒光劑發射的光，將那些與調制化合物不存在的情形之下的光發射相比，影響了熒光劑的光發射的化合物鑒定為調制化合物。或者是在實驗中，將αd配體固定化，而將αd標記。
本發明考慮到的用于鑒定調制αd和配體之間相互作用的化合物的另一方法涉及用包含處于啟動子控制之下的報道基因的DNA構建物轉化或轉導合適的宿主細胞，其中該啟動子受具有DNA結合域和激活域的轉錄因子調節，在宿主細胞內表達第一雜種DNA序列，該序列編碼αd的全部或部分和轉錄因子的DNA結合域或者激活域的第一融合體，在宿主細胞內表達編碼配體的全部或部分和未參入第一融合的轉錄因子的DNA結合域或者激活域的第二融合體的第二雜種DNA序列，通過在推定的調制物存在或不存在的情形之下測量宿主細胞內報道基因產物的產生，而檢測在具體宿主細胞內配體與αd的結合，借此評價一種推定的調制化合物對于αd和配體之間的相互作用的影響，將那些與調制化合物不存在的情形之下相比改變了報道基因產物的產生的化合物鑒定為調制化合物。目前本實驗中優選使用的是lexA啟動子，lexA DNA結合域，GAL4反式激活域，lacZ報道基因，和酵母宿主細胞。
上述實驗的一種改進的版本可用于分離編碼結合αd的蛋白質的多核苷酸，方法是用包含處于啟動子控制之下的報道基因的DNA構建物轉化或轉染合適的宿主細胞，其中啟動子被具有DNA結合域和激活域的轉錄因子調節，也可用于在宿主細胞內表達編碼αd的全部或部分和轉染因子的DNA結合域或者激活域的第一融合體的第一雜種DNA序列，用于在宿主細胞內表達編碼假定的αd結合蛋白的部分或全部和未參入第一融合體的轉錄因子的DNA結合域或激活域的第二融合體的第二雜種DNA序列的文庫，用于通過檢測宿主細胞內報道基因產物的產生而檢測αd結合蛋白與αd在具體宿主細胞內的結合，和用于從具體宿主細胞內分離編碼αd結合蛋白的第二雜種DNA序列。
本發明還包括產生αd特異性抗體的雜交瘤細胞系。產生分泌單克隆抗體的雜交瘤的技術是本領域公知的。雜交瘤細胞系可以在用純化的αd或αd變異體，或在細胞外膜表面表達αd或其變體的細胞免疫動物后產生。免疫原細胞的類型包括體內表達αd的細胞，或者是正常情況下在體內一般不表達αd的轉染的原核或真核細胞系。目前優選的本發明的抗體由被稱為169A，169B，170D，170F，170E，170X，170H，188A，188B，188C，188E，188F，188G，188I，188J，188K，188L，188M，188N，188P，188R，188T，195A，195C，195D，195E，195H，197A-1，197A-2，197A-3，197A-4，199A，199H，和199M的雜交瘤細胞系所分泌。
通過公開αd的DNA和氨基酸序列而貢獻的信息的價值是顯著的。在實施例的一個系列中，公開的αdcDNA序列使分離包括基因組序列的轉錄控制元件的人αd基因組DNA序列成為可能。還包括αd等位變異體和異源物種(如大鼠或小鼠)DNA的鑒定。人αd基因組DNA和異源物種DNA的分離可以通過標準DNA/DNA雜交技術，在合適的嚴格條件下，使用全長或部分αdcDNA序列作探針以篩選合適的文庫來完成。或者是，采用基于已知cDNA序列設計的寡核苷酸引物的聚合酶鏈式反應(PCR)可用于擴增和鑒定基因組αdDNA序列。編碼αd多肽，包括其片段和其他變異體的合成DNA可用傳統合成方法產生。
本發明的DNA序列信息亦使通過同源重組或“剔除”(“knockout”)策略〔見，如Kappechi，科學2441288-1292(1989)〕以產生不能表達功能性αd多肽或者是表達變異體αd多肽的嚙齒類動物成為可能。這樣的嚙齒類動物可用作研究體內αd和αd調制物的活性。
本發明的DNA和氨基酸序列亦使分析主動參預反受體結合的αd表位，以及可能調節而不是主動參預結合的表位成為可能。本發明還包括可能參預跨膜信號傳導的表位的鑒定。
本發明的DNA還可用于表達αd多肽的細胞型的探測。使用αdDNA以探測αdRNA的標準DNA/RNA雜交技術可用于確定細胞內αd轉錄的組成型水平，以及應答內部或外部因子的轉錄水平的改變。反過來，修飾αd轉錄和/或翻譯的因子的鑒定可以用來評價潛在的治療或預防價值。本發明的DNA亦使αdDNA對細胞RNA進行原位雜交，以在復雜的細胞類群和組織中確定αd特異性信息的細胞定位成為可能。
本發明的DNA還可用于鑒定那些顯示與人αd序列同源性的非人多核苷酸序列。擁有非人αdDNA序列允許了人系統的動物模型(包括，例如，轉基因模型)的建立。
作為本發明的另一方面，αd特異性單克隆或多克隆抗體可用于免疫組織化學分析，以在組織中將αd定位于亞細胞區室或個別細胞。這類免疫組織化學分析當與原位雜交聯合使用以定位αdmRNA和αd基因的多肽產物時特別有用。
表達αd的細胞型的鑒定在治療及預防劑的開發方面可具有一些有意義的延伸。預期涉及αd的本發明的產物可被用于其中巨噬細胞是疾病過程的必要因素的疾病的治療。本技術已描述了巨噬細胞活性相關的許多疾病的動物模型。例如，Jntila等人在J.Leukocyte Biol 5430-39(1993)報道了小鼠中，巨噬細胞募集到急性和慢性炎癥位點。在大鼠中，Adams等人〔移植531115-1119(1992)和移植56794-799(1993)〕描述了異位腹部心臟同種異體移植術后移植動脈硬化的模型。Rosenfeld等人〔動脈硬化79-23(1987)和動脈硬化724-34(1987)〕描述了飼食添加膽甾醇的食料的兔中誘導的動脈粥樣硬化。Hanenberg等人〔糖尿病32126-134(1989)〕報道了BB大鼠中依賴于胰島素的糖尿病的自發發生。Yamada等〔胃腸學104759-771(1993)〕描述了注射鏈球菌肽聚糖-多糖聚合物后的大鼠中誘導的炎性腸疾病，慢性肉芽腫性結腸炎。Cromartie等〔J.Exp.Med1461585-1602(1977)〕和Schwab等〔感染與免疫594436-4442(1991)〕報道了注射鏈球菌細胞壁蛋白質于大鼠中。導致了關節炎疾病，其特征是外周關節炎癥隨后關節損傷。最后，Hintinga等人〔Eur.J.Immunol.23709-715(1993)描述Lewis大鼠中作為多發性硬化模型的實驗變應性腦脊髓炎。在這些模型中的每一個，αd抗體其他αd結合蛋白，或αd可溶性形式被假設通過失活巨噬細胞活性而用于減弱疾病狀態。
本發明提供了用于治療這些或其他疾病狀態的藥物組合物。藥物組合物被設計用于抑制αd和其配體之間相互作用以及包括αd的多種可溶和膜聯形式(包括完整的αd多肽，或其主動參予αd結合的片段)，αd結合蛋白的可溶和膜聯形式(包括抗體，配體，等)，αd結合活性的胞內或胞外調制物，和/或αd和/或αd-配體多肽表達的調制物，包括轉錄，翻譯，翻譯后加工和/或細胞內轉運的調制子。
本發明還包括用于治療牽涉到αd結合，或表達αd的細胞的局部積聚的疾病狀態的方法，其中患有所述疾病的病人被提供足以調制αd結合水平或足以調制表達αd的細胞類型的積聚量的本發明的藥物組合物。本發明的治療方法可用于例如，但不限于以下疾病，I型糖尿病，動脈粥樣硬化，多發性硬化，哮喘，牛皮癬，肺炎，急性呼吸紊亂綜合征和類風濕關節炎。
附圖簡述在考慮下列做為附圖參照的描述時，本發明的多種其他方面和優點將是顯而易見的

圖1A至圖1D包括人氨基酸序列CD11b(SEQ ID NO3)，CD11c(SEQ ID NO4)和αd(SEQ ID NO2)的排列。
發明詳述本發明通過下列涉及從人脾cDNA文庫中分離編碼αd的cDNA克隆的實施例得到說明。更具體的，實施例1說明了應用抗犬αTMl抗體試圖探測同源人蛋白質。實施例2詳述了犬αTM1的純化和多肽N-末端測序以設計用于犬αTM1基因PCR擴增的寡核苷酸探針。實施例3述及犬αTM1的大規模純化，用于內部測序以設計另外的PCR引物。實施例4描述了PCR及內部序列引物的應用以擴增犬αTM1基因的片段。實施例5描述了人αd編碼cDNA序列的克隆。實施例6描述了人組織和細胞的關于αdmRNA表達的Northern印跡雜交分析。實施例7詳述了人αd表達質粒的構建和用生成的質粒轉染COS細胞。實施例8描述了轉染的COS細胞中的αd表達的ELISA分析。實施例9描述了用人αd表達質粒轉染的COS細胞的FACS分析。實施例10描述了在共轉染COS細胞內CD18與αd相聯的免疫沉淀。實施例11涉及αd表達構建物在中國倉鼠卵巢細胞中的穩定轉染。實施例12述及依賴于CD18的，αd與細胞間粘著分子ICAMR，一種ICAM-R突變體蛋白質，和補體因子iC3b的結合。實施例13描述了閃爍接近篩選實驗，用以鑒定αd配體/抗配體結合相互作用的抑制劑或增強子(即調制物)。實施例14描述了編碼αd可溶形式的表達質粒的構建，和該表達產物的結合分析。實施例15涉及αd特異性多克隆血清和單克隆抗體的產生。實施例16描述了使用抗αd多克隆血清分析αd組織分布，αd在外周血白細胞中的表達，和在炎性和非炎性滑膜中αd表達。實施例17描述了顯示與人αd基因序列具有同源性的大鼠cDNA序列分離。實施例18涉及大鼠αd表達質粒、包括I結構域/IgG融合蛋白的大鼠αd結構域表達載體的構建，以及針對全長的和I結構域融合蛋白的單克隆抗體的產生。實施例19述及顯示了與人αd基因序列有同源性的鼠cDNA序列的分離。實施例20描述了用于證實序列分析的另外小鼠αdcDNA克隆的分離。實施例21涉及多種小鼠組織的原位雜交分析，以確定推定的人αd的小鼠同系物的組織和細胞特異性表達。實施例22描述了推定的編碼人αd的小鼠同系物的表達構建物的產生。實施例23述及“剔除”小鼠的設計，其中編碼人αd的推定的小鼠同系物的基因被打破。實施例24描述了顯示對于人αd編碼序列有同源性的兔cDNA克隆的分離。實施例25描述了人類疾病的動物模型，其中αd的調制被分析其治療能力。實施例26描述了在疾病狀態動物模型中，αd的表達。
實施例1探測狗αTM1的人同系物的嘗試狗αTM1特異性單克隆抗體Cal 1.8H2〔Moore et al.，見上〕被檢測其與人外周血白細胞的交叉反應性，試圖鑒定狗αTM1的人同系物。在0.1％疊氮鈉存在的情況下，將細胞制備物(一般是1×106細胞)與未稀釋的雜交瘤上清液或純化的小鼠IgG-陰性對照抗體(10μg/ml)冰浴。通過隨后與6μg/ml FITC-偶聯馬抗-小鼠IgG(載體實驗室，Burlingame，CA)溫孵而檢測單克隆結合。經染色的細胞用2％w/v的溶于磷酸鹽緩沖液(PBS)的多聚甲醛固定，并且用Facstar Plus熒光激活細胞分類儀(Becton Dickinson.Mountain View，CA)。一般地，使用對數擴增法就熒光強度對10,000細胞進行分析。
結果表明Cal 1.8H2不同人外周血白細胞表達的表面蛋白質交叉反應，而對照細胞，贅生性狗外周血淋巴細胞基本上都是αTM1陽性。
因為狗α亞基特異性的單克隆抗體Cal 1.8H2不與人同系物交叉反應，狗αTM1DNA的分離被認為是分離假如存在的人基因對應物的必備前提。
實施例2用于N末端序列分析的狗αTM1的親和純化親和純化狗αTM1以確定用于寡核苷酸探針/引物設計的N-末端氨基酸序列。簡言之，抗-αTM1單克隆抗體Cal 1.8H2被偶聯到Affigel 10層析樹脂(BioRad，Hercules，CA)，并通過特異性抗體-蛋白相互作用分離蛋白質。按照BioRad提供的方案，以大約每毫升樹脂5mg抗體的濃度將抗體偶聯到樹脂上。結合反應之后，移去過量抗體。用三倍體積的0.1M乙醇胺封閉樹脂。然后用30倍體積的磷酸緩沖液(PBS)洗滌。
一只25克的狗脾在250ml含0.32M蔗糖的25mM Tris-HCl，pH8.0溶液，并加有蛋白酶抑制劑的緩沖液中勻漿。于1000g離心15分鐘將核和細胞碎片沉淀。于100,000g離心30分鐘將膜從上清液中沉淀下來。膜沉淀重懸于200ml溶胞緩沖液(50mM NaCl，50mM硼酸，pH8.0，加有2％NP-40)中并冰浴1小時。不可溶物質于100,000g離心60分鐘沉淀下來。10毫升澄清的溶胞物被轉移到盛有上述的0.5mlCal 1.8H2結合的Affrgel 10樹脂的15ml聚丙烯管中。將管于4℃旋轉溫孵過夜，隨后用50柱體積D-PBS洗滌。然后將樹脂轉移到微量離心管中，于1ml Laemmli(非還原性)樣品緩沖液中煮沸10分鐘。該緩沖液含有0.1M Tris-HCl，pH6.8，2％SDS，20％甘油和0.002％溴酚藍。離心沉淀樹脂并棄去；上清液用1/15體積β-巰基乙醇(Sigma，St，Louis，MO)在7％聚丙烯酰胺凝膠上電泳。如下將分離的蛋白質轉移到Immobilon PVDF膜(Millipore，Bdeford，MA)上。
將凝膠在去離子的，Millipore-過濾水中洗滌一次，在含10％甲醇的10mM 3-〔環己胺〕-1-丙磺酸(CAPS)中平衡15-45分鐘。Immobilon膜用甲醇潤濕，在過濾水中潤洗，在CAPS轉移緩沖液中平衡15-30分鐘。最初的轉移使用Biorad轉移儀于70伏進行3小時。轉移之后移取Immobilon膜，在過濾的0.1％R250考馬斯中染色10分鐘。膜在50％甲醇/10％乙酸中脫色三次，每次脫色10分鐘。脫色之后，在濾過水中洗滌并空氣干燥。
檢測到大約是150kD，95kD，50kD和30kD的譜帶。設想50kD和30kD帶由抗體污染造成。試圖對150kD和95kD帶進行N-末端測序，但是95kD蛋白被封閉因而妨礙了測序。150kD的蛋白帶被從膜上切下。用Applied Biosystems(Foster City，CA)Model 473A蛋白質測序儀，按廠家說明直接測序。得出的氨基酸序列在SEQ ID NO5中用單字母氨基酸命名給出。
FNLDVEEPMVFQ(SEQ ID NO5)鑒定的序列包括整聯蛋白家族的α亞基的特征性FNLD序列(Tamura，等，J.Cell.Biol，1111593-1604(1990))。引物設計及擴增犬αTM1序列的嘗試由N-末端序列信息，設計了三種用于雜交的寡核苷酸探針基于哺乳動物密碼子的使用，它們分別是a)“Tommer”，一種完全簡并的寡核苷酸；b)“Patmer”，一種部分簡并的寡核苷酸；和c)“Guessmer”，一種非簡并性核苷酸。這些探針分別在SEQ ID NO6、7和8中給出。在本文中，這些和所有其他核苷酸序列的核酸符號按照37C.F.R.§1.882。
5′-TTYAAYYTGGAYGTNGARGARCCNATGGTNTTYCA-3′(SEQ ID NO6)5′-TTCAACCTGGACGTGGAGGAGCCCATGGTGTTCCAA-3′(SEQ ID NO7)5′-TTCAACCTGGACGTNGAASANCCCATGGTCTTCCAA-3′(SEQ D NO8)基于測序資料，使用這些寡核苷酸在幾種對克隆到λZAP(Stratagene，La Jolla，CA)犬脾/外周血巨噬細胞cDNA文庫低嚴格度雜交中沒有檢測到相關克隆。
隨后基于推導的N-末端序列設計了四種其它寡核苷酸引物，稱為5′Deg，5′Spec，3′Deg和3′Spec(如SEQ ID NO9、10、11和12分別給出的，其中Deg指簡并性，Spec指非簡并性)，試圖由噬菌體文庫DNA經PCR擴增犬αTM1序列，其中DNA從上述的Stratagene文庫的平板裂解物中純化。
5′-TTYAAYYTNGAYGTNGARGARCC-3′ (SEQ ID NO9)5′-TTYAAYYTGGACGTNGAAGA-3′ (SEQ ID NO10)5′-TGRAANACCATNGGYTC-3′ (SEQ ID NO11)5′-TTGGAAGACCATNGGYTC-3′(SEQ ID NO12)αTM1寡核苷酸引物與T3或T7載體引物配對，其分別在SEQ IDNO13和14中給出，它們與λZPA中發現的Bluescript噬菌體質粒嵌合體的多聚接頭區的側翼序列雜交。
5′-ATTAACCCTCACTAAAG-3′ (SEQ ID NO13)5′-AATACGACTCACTATAG-3′ (SEQ ID NO14)PCR擴增在含鎂鹽的Taq緩沖液(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)中完成，其中含150ng文庫DNA，1μg每種引物，200μM dNTP和2.5單位Taq聚合酶(Boehringer Mannheim)，產物經1％瓊脂糖凝膠電泳分離，凝膠用Tris-乙酸鹽-EDTA(TAE)緩沖液配制，含有0.25μg/ml溴化乙錠。于10×SSPE洇漬(Wick)過夜，而將DNA轉移到 Hybond(Amersham，Arlington Heights，IL)，轉移之后，固定化的DNA用含0.6m NaCl的0.5M NaOH變性，用配制于1.5m NaCl的1.0M Tris-HCl pH8.0中和，然后，再用Stratalinker(Stratagene)交聯儀UV交聯之前，用2×SSPE洗滌兩遍。膜于預雜交緩沖液(5×SSPE，4×Denhardts，0.8％SDS，30％甲酰胺)中于50℃振蕩溫孵2小時。
用Boehringer Mannheim激酶緩沖液，其具有100-300μCiγP32-dATP和1-3單位多核苷酸激酶將寡核苷酸探針5′Deg，5′Spec，3′Deg，3′Spec(分別是SEQ ID NO9、10、11和12)于37℃標記1-3hr。用10mM Tris-HCl，pH8.0，1mM EDTA(TE)緩沖液經Sephaden G-25精細(Pharmacia，Piscataway，NJ)層析移去未參入的標志。流出物直接加至預雜交溶液。膜于42℃，振蕩與探針雜交16小時，并重復洗滌，經最終1×SSPE/0.1％SDS于50℃嚴格洗滌15分鐘。然后將印漬于-80℃曝光kodak X-Omat AR膠片1-4小時。
寡核苷酸5′Deg，5′Spec，3′Deg和3′Spec僅能和它們被用作引物的反應的PCR產物雜交，而不能和期待它們未被用作引物的反應的PCR產物雜交。因而，得出結論，沒有PCR產物是αTM1特異性的，因為沒有產物和所有的合適的探針雜交。
實施例3用于內部測序的大規模親和純化犬αTM1為提供其他用于引物設計的氨基酸序列，純化犬αTM1以用于內部測序。來自于成年犬的兩個部分脾的三個冷凍脾切塊(大約每塊50g)和冷凍細胞被用于產生用于內部測序的蛋白質。50g脾用Waring攪切機在200-300ml硼酸緩沖液中勻漿。勻漿物用1體積含有4％NP40的緩沖液稀釋。將混合物溫和攪拌至少一小時。勻成的溶胞物通過2,000g離心20分鐘以清除大的碎片，然后用Corning(Corning，NY)prefilter或Corning 0.8微米濾器過濾。經Corning 0.4微米濾器系統過濾，將溶胞物進一步澄清。
脾溶胞物和抗體結合的Affigel 10樹脂(如實施例2中描述的)以150∶1的體積比合并，其體積是100ml于4℃振蕩溫孵過夜。于1000g離心5分鐘后，移取溶胞物，如上與更多的抗體結合Affigel 10樹脂合并，并溫孵過夜。合并吸附的樹脂部分并用50體積D-PBS/0.1％吐溫20洗滌并將樹脂轉移到50ml Biorad柱上。用3-5倍體積的0.1M甘氨酸(pH2.5)將吸附的蛋白質從樹脂上洗脫下來。收集大約900ml的級分并用100μl 1M Tris緩沖液，pH8.0中和。從每一級分中取15μl等份體積在等體積的含有1/15體積的1M二硫蘇糖醇(DTT)的2×Laemmli樣品緩沖液中煮沸，這些樣品在8％Novex(San Diego，CA)聚丙烯酰胺凝膠上電泳，通過考馬斯染色，或按制造商提供的方案使用Daiichi試劑盒(Enprotech，Natick，MA)銀染而可被肉眼觀察。合并含有最大量的蛋白質的級分，真空濃縮。存留的溶液用還原的Laemmli樣品緩中液稀釋到50％，在1.5mm 7％聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳，緩沖液是tris-甘氨酸/SDS緩沖液。采用Hoefer轉移儀按實施例2中描述的方法將蛋白質從凝膠上轉移到Immobilon膜上。
從10 PVDF膜上切下對應于犬αTM1的蛋白帶，得到大約47μg總蛋白。將帶在4ml 50％甲醇中脫色5分鐘，空氣干燥并切成1×2mm小片。將膜碎片于4℃浸沒于2ml 95％丙酮中30分鐘，偶爾劇烈振動(vortex)，然后空氣干燥。
在蛋白水解酶切膜所結合的蛋白質之前，3mg溴化氰(CNBr)(Pierce，Rockford，IL)溶于1.25ml 70％甲酸中。該溶液加到盛有PVDF膜碎片的試管中，將該管避光室溫保存24小時。將上清液(S1)轉移到另一試管中，將膜碎片用0.25ml 70％甲酸洗滌。移取上清液(S2)，加至原來的上清液中(S1)將2ml Milli Q水加到合并的上清液(S1和S2)，將溶液凍干。N2氣下干燥PVDF膜，用1.25ml的60％乙腈，0.1％四氟乙酸于42℃再次萃取17小時。移取上清液(S3)，將膜碎片再次用1.0ml 80％乙腈，0.08％TFA于42℃再次萃取1小時，該上清液(S4)與原有上清液(S1、S2和S3)合并并真空干燥。
干燥的CNBr片段溶于63μl 8M脲，0.4M NH4HCO3中。該片段在5μl 45mM二硫蘇硫醇(DTT)中還原，然后于50℃保溫15分鐘。溶液冷卻至室溫，通過加入5μl 100mM碘乙酰胺(Sigma，St.Louis，MO)而將片段烷基化。室溫保溫15分鐘后，將樣品用187μl Milli Q水稀釋，使其脲的終濃度為2.0M。以酶∶蛋白質為1∶2.5(w∶w)的比率加入胰蛋白酶(Worthington，Freehold，NJ)，蛋白質于37℃消化24小時。加入30μl TFA而終止消化。
在Waters 625LC系統(Millipore，Milford，MA)上使用0.05％TFA和HPLC水(buffer A)平衡的2.1×250mm，5微米Vydac C-18柱(Vydac，Hesperia，CA)上高效液相層析(HPLC)分離蛋白質片段。肽用配制于0.04％TFA中的80％的乙腈(buffer B)的增長的濃度洗脫，其中65-95分鐘bufer B的梯度是38-75％，在95-105分鐘，bufferB的梯度是75-98％。肽在0.2ml/分的流出速度下分級分離，在210nm檢測。
分級分離之后，通過在Applied Biosystems Model 437A蛋白質測序進行自動Edman降解而分析肽的氨基酸序列，采用制造商的標準循環，和Model 610A Data Analysis軟件，1.2.1版本。所有的測序試劑由Applide Biosystem供給。8個內部片段中的7個的氨基酸序列在下面給出，其中“X”表示氨基酸的身份尚未被確定。
VFQEXGAGFGQ (SEQ ID NO15)LYDXVAATGLXQPI (SEQ ID NO16)PLEYXDVIPQAE(SEQ ID NO17)FQEGFSXVLX (SEQ ID NO18)TSPTFIXMSQENVD (SEQ ID NO19)LVVGAPLEVVAVXQTGR (SEQ ID NO20)LDXKPXDTA (SEQ ID NO21)引物設計獲得一個內部氨基酸序列(在SEQ ID NO22中給出)被用于設計一個完全簡并性寡核苷引物，被稱為p4(R)，在SEQ ID NO23中給出。
FGEQFSE (SEQ ID NO22)5′-RAANCCYTCYTGRAAACTYTC-3′(SEQ ID NO23)實施例4犬αTM1片段的PCR克隆從雙鏈犬脾cDNA中PCR擴增犬αTM1基因5′部分。
A.雙鏈犬脾cDNA的產生來自于年青狗脾的1g冷凍材料在干冰上于液氮中研磨，在20mlRNA-Stat 60緩沖液(Tel-Test B.Inc.Friendswood，TX)中勻漿。加入4ml氯仿，于12,000g離心15分鐘而提取溶液。加入10ml乙醇，將RNA從水相層中沉淀出來。在Dynal Oligo dT Dynabeads(Dynal，Oslo，Norway)上選擇poly A+RNA。合并五份100μg總RNA，同等體積2×結合緩沖液(20mM Tris·HCl pH 7.5，1.0M LiCl，1mMEDTA，0.1％SDS)稀釋。RNA與Oligo dT Dynabeads(全部樣品用1.0ml或5mg小珠)溫孵5分鐘。按照制造商的方案，在用2mMEDTA，pH7.5洗脫poly A+mRNA之前，用含有10mM Tris·HCl，pH7.5，0.15M LiCl，1mM EDTA和0.1％SDS的緩沖液洗滌小珠。按照制造商的方案，采用洗脫的poly A+mRNA和Boehringer MannheimcDNA合成試劑盒合成雙鏈cDNA。
B分離部分犬αTM1， cDNA在標準PCR反應中采用寡核苷酸引物5′Deg(SEQ ID NO9)和p4(R)(SEQ ID NO23)，該反應中采用150ng雙鏈cDNA，500ng每種引物。200μM dNTPs，和1.5單位制備于含鎂的Taq buffer(Boehringer Mannheim)中的Taq聚合酶(Boehringer Mannheim)。用同一引物將生成的產物(1μl的起始反應物)進行第二輪PCR，以提高產物的產量。于65℃，在含有10mM Tris·HCl，pH8，1mMEDTA，1.5M NaCl的緩沖液中，將該帶從1％瓊脂糖凝膠洗脫到Schleicher和Shuell(Keene，NH)NA 45濾紙上，沉淀，采用TA克隆試劑盒(Invitrogen)和制造商提供方案連接到pCRtmII載體(Invitrogen，San Diego，CA)上。連接混合物通過電穿孔轉化到XL-1 Blue細菌(Stratagene)中。確定一個克隆，2.7含有對應于在引物設計中未使用的、αTM1肽序列的序列。
在Applied Biosystems 373A DNA測序儀(Foster City CA)上進行測序，采用Dge deoxy終止子循環測序試劑盒其中熒光標記dNTP在不對稱PCR反應中如下述而參入〔McCabe，“不對稱PCR產生單鏈DNA”，見PCR方案方法和應用指南，Innis等，(編)pp.76-83，學術出版社紐約(1990)〕。樣品于96℃保溫4分鐘。經下述步驟順序的25個循環96℃15秒鐘；50℃1秒鐘；60℃4分鐘。測序資料自動地記載于計算機的樣品文檔中，其包括層析譜和文本文檔。克隆2.7的完整的插入序列在SEQ ID NO24中給出。
從Stratagene文庫分離(如實施例2描述)全長犬αTM1cDNA的努力未成功。在低嚴格度條件下，使用30％甲酰胺，和克隆2.7作探針，雜交篩選大約1×106噬斑，但未得到陽性克隆。使用衍生于克隆2.7的特異寡核苷酸或若干來自于其它肽片段的氨基酸序列，與基于保守的α亞基氨基酸基序GFFKR(Tamura等，見上文)的簡并性寡核苷酸配對的簡并性引物，擴增克隆2.7中出現的序列的下游相關序列的努力亦尚未成功。
實施例5推定的犬αTM1的人同系物的克隆為試圖分離與犬αTM1同源的人序列，將來自于克隆2.7的大約1kb的犬αTM1片段用作探針。使用NT2(如SEQ ID NO25)和p4(R)(SEQ ID NO23)引物，在實施例2描述的條件下，經PCR產生探針。
5′-GTNTTYCARGARGAYGG-3′ (SEQ ID NO25)采用Qiagen(Chatsworth，GA)Quick Spin試劑盒和制造商提供的方案純化PCR產物。使用Boehringer Mannheim隨機引物標記盒和制造商提供的方案用200μCiα32PdCTP標記純化的DNA(200ng)。未參入的同位素用Sephadex 25(細)重力層析而除去。使用前，探針用0.2N NaOH變性，用0.4M Tirs·HCl，pH8.0中和。
制備克隆在pCDNA/Amp(Invitrogen，San Diego，CA)中的人脾cDNA文庫的Hybond濾膜(Amersham)上的菌落拓片(colony lift)。開始，將濾膜如實施例2中描述變性和中和，隨后，在含有30％甲酰胺的預雜交溶液(8ml/濾膜)中溫孵，于50℃，溫和振蕩2小時，如上標記的探針加入到該溶液中，于42℃與濾膜共同溫孵14小時。濾膜于2×SSC/0.1％SDS，37℃洗兩次，于2×SSC/0.1％SDS，50℃，洗兩次。最終嚴格性洗滌是1×SSC/0.1％SDS，65℃洗兩次(1×SSC是150mM NaCl，15mM檸檬酸鈉，pH7.0)。濾膜借助于增感屏曝光于柯達X-Omat AR軟片6小時。在一式兩份的拓片上給出的菌落在含有鎂的LB培養基/羧芐青霉素平板上劃線，于37℃溫孵過夜。得到的劃線菌落用Hybond濾膜拓片，將這些濾膜如上處理。使用來自克隆2.7的1kb探針，如上述方法標記，在50％甲酰胺雜交溶液在更嚴格的條件下于50℃雜交3小時。探測的濾膜在最終嚴格度為0.1×SSC/0.1％SDS于65℃洗滌，借助于增感屏，于-80℃曝光于柯達X-OmatAR軟片2.5小時。確定陽性克隆并在LBM/羧芐青霉素培養基上培養過夜。使用Promega Wizard微型制備試劑盒，按制造商的方案從培養物制備DNA，生成的DNA被測序。
首輪篩選獲得18個陽性克隆，而在更為嚴格的雜交條件進行的第二輪篩選，產生了一個陽性克隆，被稱為19A2。人αd克隆19A2的DNA和推定的氨基酸序列分別在SEQ ID NO1和2中給出。人αdcDNA和預測的多肽的表征克隆19A2擁有成熟蛋白質的完整編碼區域，加上5′上游信號序列的48個堿基(16個氨基酸殘基)，和未在多聚腺苷酸序列終止的3′非翻譯序列。成熟的蛋白質的核心分子量預計為大約125kD。預計胞外域擁有SEQ ID NO2的大約17至1108位氨基酸殘基。胞外域與同源于人CD11c跨膜區域(SEQ ID NO2的1109和1128位殘基)的大約20個氨基酸區域鄰接。胞質域包含大約30個氨基酸(大約是SEQ ID NO2的1129至1161位殘基)。該蛋白質還包含與CD11a、CD11b和CD11c〔Larson和Springer，見上〕，αE〔Shaw等，生物化學雜志2696016-6025(1994)〕和在VLA-1和VLA-2〔Tamura，等見上〕共有的I(插入序列)域同源的大約202個氨基酸。在其他整聯蛋白的I結構域被表明參與了ICAM結合〔Landis等，J.Cell.Biol.(1993)；Diamond，et al.J.Cell.Biol.1201031-1043(1993)〕，提示αd可能結合表面分子的ICAM家族的成員。該區域未被證明存在于任何其他整聯蛋白亞基中。
αd的推定的氨基酸序列顯示了與CD11a的大約36％的一致性，與CD11b的大約60％的一致性，與CD11c的大約66％的一致性。圖1中表明了CD11b(SEQ ID NO3)，CD11c(SEQ ID NO4)和αd(SEQ ID NO2)的氨基酸序列的排列。
同物種內β2整聯蛋白的α亞基的胞質域一般是互不相同的，而個體的α亞基卻顯示了跨越物種界限的高度同源性。與這些觀察相一致，除了表明在所有α整聯蛋白中保守的膜接近GFFKR氨基酸序列外，αd的胞質區域明顯不同于CD11a、CD11b和CD11c〔Rojiani等，生物化學309859-9866(1991)〕。因為整聯蛋白的胞質尾端區域參與了“膜內側外翻”信號和親合力調節〔Landies等，見上〕，很可能αd與不同于那些與CD11a、CD11b和CD11c相互作用的分子的細胞溶質分子相互作用，結果是，αd參與了不同于牽涉其它β2整聯蛋白的信號通路。
αd的胞外域含有與I結構域鄰接的保守DGSGS氨基酸序列在CD11b中，DGSGS序列是配體相互作用所需要的金屬結合區〔Michishita等，細胞72857-867(1993)〕。CD11b和CD11c的三個另外的推定的陽離子結合位點在克隆19A2(SEQ ID NO1)的465-474，518-527和592-600位氨基酸的αd序列中保守。αdI-結構域與CD11a、CD11b和CD11c中的相應序列分別有36％、62％、57％的一致性，在該區域的相對低的序列同源性提示αd可能與一套細胞外的蛋白質相互作用，這一套細胞外蛋白質不同于與其它已知β2整聯蛋白相互作用的蛋白質。另外，αd對于已知β2整聯蛋白配體如ICAM-1，ICAM-2和/或ICAM-R的親和力可能不同于已知對于其他β2整聯蛋白/ICAM相互作用的親和力。用于序列鑒定的其它人αdcDNA克隆的分離為了證實編碼人αd的DNA序列，通過從克隆在pcDNA/Amp中的人脾寡聚dt-引物的cDNA文庫(Invitrogen)(實施例5描述)雜交而分離，并經瓊脂糖凝膠電泳而按尺寸選擇長度大于3kb的其它人cDNA用于雜交的探針如下所述從αd的5′區衍生。除下述雜交外，雜交條件同上述用于分離起始的人αd克隆的條件是同一的濾膜在2×SSC/0.1％SDS中，于室溫中洗兩次，于2×SSC/0.1％SDS于42℃中洗一次。濾膜曝光Kodak X-Omat AR軟片過夜。
在下列條件下使用引物CD11c 5′For(SEQ ID NO94)和CD11c 5′Rev(SEQ ID NO95)經PCR從19A2克隆產生5′αd雜交探針。樣品于94℃保持4分鐘，并于Perkin Elmer 9600熱循環儀中經30個循環的溫度步驟序列i)94℃，15秒；ii)5℃，30秒；和iii)72℃，1分鐘。CD11c 5′For(5′)CTGGTCTGGAGGTGCCTTCCTG(3′)(SEQ ID NO94)CD11c5′Rev(5′)CCTGAGCAGGAGCACCTGGCC(3′)(SEQ ID NO95)
按制造商的說明，使用BioRad(Hercules CA)Prep-A-Gene試劑盒純化擴增產物生成的5′αd探針大約是720堿基長；對應于SEQID NO1的1121位核苷酸到1839位核苷酸的區域。按照制造商的方案使用Boehringer Mannheim(Indianapolis，Indiana)隨機引物標準試劑盒，用32P-dCTP標記純化DNA(大約50ng)。按照制造商的方案，使用Centrisep Spin Columns(Princeton Separations，AdelPhia，NJ)移去未參入的同位素。標記的探針被加入到在含有45％甲酰胺的預雜交溶液的濾膜并讓其在50℃，溫孵過夜，溫孵之后，濾膜如上洗滌。
在一式兩份的拓片上有十三個菌落給出了信號。從主平板(masterplate)上檢出陽性克隆，在LBM和羧芐青霉素(100μg/ml)中稀釋，以不同的稀釋度在Hybond(Amersham)膜上涂平板。一式兩份的濾膜用來自首輪雜交試驗的同一溶液雜交，雜交后，濾膜在終嚴格性為2×SSC/0.1％SDS，于42℃洗滌，曝光軟片。
最初確定的13個陽性克隆里的10個在第二輪篩選中被肯定。這10個克隆中，2個(稱為A7.Q和A8.Q)被測序，并且被確定編碼人αd。發現克隆A7.Q大約是2.5kb長，包括一個5′引導序列，部分編碼序列，還有另外的5′非翻譯序列的60個堿基。確定不完整的編碼區由位于對應于SEQ ID NO1的2152位核苷酸的非正常剪切內含子區域引起。確定A8.Q大約是4kb長，跨越完整的編碼區，而且包含位于對應于SEQID NO1的堿基的內含子序列。與最初分離的αd克隆(SEQ ID NO1)相比，在A7.Q和A8.Q克隆中都觀察到一個不同之處是，確定在1495堿基發生了三堿基CAG密碼子的插入。A7.Q和A8.Q克隆的序列分別在SEQ ID NO96和97中給出，一種由克隆A7.Q和A8.Q推斷的復合人序列，及其相應的氨基酸序列分別在SEQ ID NO98和99中給出。
實施例6組織中人αd表達的Northern分析為了確定αd的相對表達水平和組織特異性使用來自克隆19A2的片段作探針進行Northern分析。大約10μg約來自幾種人組織或培養的細胞系的每一種的總RNA被上樣于含有1μg溴化乙酸的甲醛瓊脂糖凝膠。于100V電泳4小時后，RNA通過在10×SSC洇漬(wicking)過夜而轉移到硝酸纖維素膜上(Schieicher&Schuell)。膜于80℃真空烘烤1.5hr。含有溶于3-(N-嗎啉代)丙烷磺酸(MOPS)緩沖液的50％丙酰胺的預雜交溶液用于在42℃封閉膜3小時。按生產商的說明，采用Bochriager Mannheim Randomd Prime試劑盒標記克隆19A2的片段，包括αP32dCTP和αP32dTTP。未參入的標記在TE緩沖液中在Sephadex G25柱上棄去。用1.5×106計數/ml預雜交緩沖液探測膜。印跡連續在下列條件下洗滌2×SSC/0.1％SDS于室溫，2×SSC/0.1％SDS于42℃，2×SSC/0.1％SDS于50℃，1×SSC/0.1％于50℃，0.5×SSC/0.1％SDS于50℃和0.1×SSC/0.1％SDS于50℃。然后印跡曝光膠片19小時。
使用來自于克隆19A2的Bst×I片段(對應于SEQ ID NO1的2011至3388位核苷酸)進行雜交，展示了在肝、胎盤、胸腺和扁桃腺總RNA中有微弱的信號。在腎、腦和心樣品中未檢測到信號。在腎泳道中出現的RNA的量是最小的，當用溴化乙錠染色時。
當使用克隆19A2的第二個片段(跨越SEQ ID NO1的500至2100位堿基的區域)，對于人的poly A+RNA(Clontech)進行多組織Northern(MTN)檢測到兩個不同大小的RNA轉錄本。在脾和骨骼肌中觀察到6.5kb的帶，而肺和外周血白細胞檢測到4.5kb。觀察到大小的變化可以由組織特異性多腺苷酸化，探針與其他整聯蛋白家族成員的交叉反應性，或與另種方式剪接的mRNA的雜交引起。
使用來自克隆19A2的第三種片段，其跨越SEQ ID NO1的2000至3100位核苷酸進行Northern分析，給出了與使用其他克隆19A2片段相一致的結果。
來自于三種髓系細胞系的RNA亦用對應于SEQ ID NO1的500至2100，和2000至3100位核苷酸的片段進行探測。預先用PMA刺激的THP-1細胞系給出同樣大小范圍(大約5.0kb)的彌散的信號，比組織信號稍強。來自于未刺激的和DMSO刺激的HL-60細胞的RNA與αd探針以與組織樣品相同的強度與αd探針雜交，然而，PMA看來增強信號強度。因為PMA和DMSO分別驅使HL-60細胞向單核細胞巨噬細胞和粒系細胞途徑分化，這種結果提示αd表達在單核/巨噬細胞類型中是提高的。U937細胞表達αd信息，這一信號并不隨PMA的刺激而升高，在Molt，Doudi，H9，JY或Jurkat細胞中檢測不到帶。
實施例7人αd構建物的瞬時表達A表達構建物的產生人克隆19A2缺乏甲硫氨酸起始密碼子和可能缺乏5′信號序列的一部分。因而，為了產生含有19A2序列的人表達質粒，采用了兩種不同的策略。在第一種策略中，構建了兩個質粒，其中從編碼CD11b或CD11c的基因衍生的信號肽序列被剪接到19A2中，以產生嵌合αd序列。在第二種策略中，構建了第3種質粒，其中在克隆19A2的0位置加了一個腺苷酸堿基以編碼起始甲硫氨酸。
這三個質粒含有不同的編碼αd序列的5′部分的區域或嵌合αd序列。αd區域是用特異的3′引物BamRev(在SEQ ID NO26中給出)，和三個5′引物之一PCR擴增(見實施例2中的條件)。這三個5′引物包含以下序列(1)在其1-6位是使之可被酶切的相同的非特異性堿基，7-12位的EcoRI位點和在其13-18位的共有Kozak序列；(2)CD11d(primer ER1B)或CD11c(引物ER1C)信號序列的一部分，或一個腺苷酸(引物ER1D)；和(3)附加的15-17位堿基，其特異性地重疊了來自克隆19A2的5′序列使引物退火成為可能。引物ER1B、ER1C或ER1D分別在SEQ ID NO27、28或29中給出，其中起始甲硫氨酸密碼子是下劃線的。EcoRI位點是雙重下劃線的。
5′-CCACTGTCAGGATGCCCGTG-3′(SEQ ID NO26)5′-AGTTAC
GCCACCATGGCTCTACGGGTGCTTCTTCTG-3′(SEQ ID NO27)5′-AGTTAC
GCCACCATGACTCGGACTGTGCTTCTTCTG-3′(SEQ ID NO28)5′-AGTTAC
GCCACCATGACCTTCGGCACTGTG-3′(SEQ ID NO29)生成的PCR產物用EcoR I和BamHI酶切。
所有三種質粒含有包括αd克隆的3′末端的共同的第二αd區域(將被插入先前段落所述的5′區域的鄰接下游)。第二αd區域，它從克隆19A2的625位核苷酸延伸至位于載體3′多聚接頭區域的XbaI位點，通過用BamHI和XbaI酶切克隆19A2而分離。
使用Boehringer Mannheim連接酶緩沖液和T4連接酶(1單位/反應)進行連接反應，該反應中，3′αdBamHI/XbaI片段連接到三個5′αdEcoRI/BamHI片段之一上。于14℃溫孵4小時后，合適量的用EcoRI和XbaI酶切的載體pcDNA.3(Invitrogen)，以及附加的一單位連接酶被加入到每一份反應中。反應混合物的1/10被轉化到感受態XL-Blue細胞。如實施例5培養生成的菌落并分離DNA。EcoRI酶切鑒定了三個限制性位點陽性克隆并因此鑒定了其工程化信號序列。這些克隆被稱為pATM.B1(CD11b/αd，來自引物ER1B)，pATM.C10(CD11c/αd，來自引物ER1C)和pATM.D12(腺苷酸/αd，來自ER1D)。在每一克隆中的合適的信號序列的出現被核酸測序證實。B.轉染COS細胞以上討論的αd質粒的表達通過用個別的質粒和CD18表達載體pRCCD18共轉染COS細胞而完成。做為陽性對照，亦用質粒pRC CD18和CD11a表達質粒，pDC.CD11a共轉染COS細胞。
在轉染前16小時，將細胞在培養基中(DMEM/10％FBS/penstrep)傳代到10cm Corning組織培養皿中，其鋪滿度是50％。在所有步驟中、用不含胰蛋白酶的Versene緩沖液(0.5mM NaEDTA溶于PBS)從平皿上移下細胞。轉染前，用不含血清的DMEM洗滌平板一次，在每一平板上，15微克的每一種質粒被加至5ml轉染緩沖液中(含有20μg/ml DETE-Dextran和0.5mM Chloroquine)。于37℃溫孵1.5小時后，細胞用5ml DMEM/10％DMSO休克1分鐘，然后用10ml/平板培養基代替DMSO溶液。
生成的轉染子用ELISA，FACS和免疫沉淀如實施例8、9和10中所述而分析。
實施例8COS轉染子的ELISA分析為了確定COS細胞是否被CD18表達質粒pRC CD18和與CD18相關的在細胞表面表達αd的αd質粒共轉染，使用制備抗CD18的第一抗體(如，從ATCC HB203中純化的TS 1/18)進行ELISA。作為陽性對照，亦對用CD18表達質粒和CD11a表達質粒，pDC CD11A共轉染的細胞進行ELISA。在對照中，第一抗體包括CD18抗體和抗-CD11a抗體(如從ATCC HB202中純化的TS 1/22)。
為進行ELISA，來自于每一平板的細胞用Versene緩沖液洗下，轉移到一塊96孔平底Corning組織培養平板上。在測試前細胞在培養基中溫孵2天。平板用150μl/孔D-PBS/0.5％teleost皮膚明膠(Sigma)溶液洗兩遍。該緩沖液用于除顯色過程之外的所有步驟中。在室溫進行所有的洗滌和溫孵步驟。樣品孔用明膠封閉1小時。第一抗體在明膠溶液中稀釋到10μg/ml，在每一樣品孔中加入50μl。就每一第一抗體而言，設置了一式三份的樣品孔。溫孵1小時后，用3×150μl明膠溶液/樣品孔進行洗滌。1∶3500稀釋度的第二抗體(羊抗鼠Ig/HRD-Fc特異性〔Jackson，West Grove，PA〕)以50μl/樣品孔加入，將平板溫孵1小時。洗滌三次之后，平板在加入50μl/樣品孔15％硫酸之前，用100μl/樣品孔鄰苯二胺(OPD)(Sigma)溶液(1mg/ml OPD溶于檸檬酸緩沖液)顯色20分鐘。
用抗-CD18特異性抗體以ELISA方法對轉染子進行分析，表明在只用編碼CD18質粒轉染的細胞中沒有明顯高于本底的表達。用CD18特異性抗體或用CD11a特異性試劑分析時，用含有CD11a和CD18的質粒共轉染的細胞顯示了高于本底的表達的升高。對于用編碼CD18的質粒和αd表達構建物(pATM.C10或pATM.D12)之一共轉染的細胞進行進一步分析表明CD18在細胞表面表達被αd的同時表達拯救。在用pATM.C10或pATM.D12轉染的COS細胞中可探測的CD18表達的升高與在共轉染CD11a/CD18陽性對照細胞中所觀察到的CD18表達的升高是類似的。
實施例9COS轉染子的FACS分析為進行FACS分析，在轉染之后的那天用新鮮培養基飼養平皿里的細胞，并其在測試前溫孵2天，用3ml Versene將轉染子以平板上洗下用5ml FACS緩沖液(DMEM/2％FBS/0.2％疊氮鈉)洗一遍。并將其稀釋成懸浮于0.1ml FACS緩沖液中，500,000細胞/樣品。向每份樣品中，加入10微升1mg/ml FITC結合的CD18，CD11a，或CD11b特異性抗體(Becton Dickinson)或800μg/ml CFSE-結合鼠23F2G(抗-CD18)(ATCC HB11081)。樣品冰浴45分鐘，用5ml洗滌FACS洗滌3遍，重懸于0.2ml FACS緩沖液。在Becton Dickinson FACscan上分析樣品。用Lysys II軟件(Becton Dickinson)分析數據。
CD18序列轉染COS細胞僅僅不被CD18、CD11a和CD11b染色當與CD11a/CD18共轉染時，大約15％細胞被CD11a或CD18抗體染色。所有用CD18和任何αd構建物轉染的所有細胞不能造成可檢測的CD11a和CD11b抗體染色。pATM.B1、pATM.C10和pATM.D12群CD18染色陽性分別為4％、13％和8％、CD11a/CD18群中陽性群的熒光比本底高4倍。相比而言，αd構建物和CD18構建物的共轉染產生的陽性克隆顯示出高于本底4-7倍增長的熒光強度。
實施例10來自共轉染COS細胞的人αd/CD18復合物的生物素標記的免疫沉淀試圖對于用CD18和實施例7中分別描述的αd表達載體中的每一種共轉染的細胞進行免疫沉淀，以確定αd是否可作為整聯蛋白特性的2β異二聚體復合物的一部分分離出來。
用Versene緩沖液將轉染細胞(1-3×108細胞/組)從平皿上移下。用50ml D-PBS/組洗3遍。于室溫將每一樣品用2mg SulphoNHS生物素(Pierce，Rockford，IL)標記15分鐘。通過以50ml冷D-PBS/樣品洗滌三遍而猝停反應。洗滌的細胞重懸于1ml溶胞緩沖液(1％NP40，50mM Tris-HCl，pH 8.0，0.2M NaCl，2mM Ca++、2mM Mg++，和蛋白酶抑制劑)冰浴15分鐘。不可溶物質于10,000離心5分鐘沉淀，將上清轉移到新管中。為了去除非特異性地與小鼠免疫球蛋白反應的物質，必需預先進行預澄清(pre-clearance)步驟。25μg小鼠免疫球蛋白(Cappel，West Chester，PA)與上清液于4℃溫孵2.5hr之后，100μl(25μg)結合到Sepharose上的兔抗-小鼠1g(Protein A Sepharose 4B和兔抗小鼠IgG制備，均購自Zymed，SanFrancisco，CA)被加入到每一樣品中，在4℃持續振蕩溫孵16小時。經離心從上清液中移取瓊脂糖珠。預澄清后，上清液用20μg抗-CD18抗體(TS1.18)于4℃處理2小時。通過與上述的100μl兔抗小鼠/蛋白質A-sepharose制備物/樣品共同溫孵而從上清分離抗體/抗原復合物。用10mM HIPES，0.2M NaCl和1％Triton-X100將珠洗滌4次。沉淀洗滌過的小珠并在含有2％β-巰基乙醇的20μl Laemuli樣品緩沖液煮沸10分鐘。沉淀樣品并在8％預制的Novex聚丙烯酰胺凝膠(Novex)于100V，電泳30分鐘。在TBS-T緩沖液中，將蛋白質向硝酸纖維素膜(Schleicher & Schuell)于200mAmp，轉移1小時。膜用TBS-T中的3％BSA封阻2hr。膜用1∶6000稀釋度的鏈霉親和素辣根過氧化物酶(POD)(Boehringer Mannheim)處理1小時，然后在TBS-T中洗滌3次。按照制造商的說明，用Amersham EnhancedChemiluminescence試劑盒顯色印漬。將膜曝光于Hyperfilm MP(Amersham)0.5至2分鐘。
來自于用PCR.CD18和pATM.B1，pATM.C10或pATM.D12轉染的細胞的CD18復合物免疫沉淀揭示異二聚體的種類的表面表達由大約100kD的β鏈和大約150kD的α鏈組成，其中前者與CD18的預計尺寸相一致，后者對映于αd。
實施例11中國倉鼠卵巢細胞中人αd的穩定轉染為了確定αd是否作為與CD18相連的異二聚體在細胞表面表達，編碼每一條鏈的cDNA以瞬時和穩定方式轉染缺乏αd和CD18的細胞系。
為進行這些實驗，如實施例7所述，αdcDNA用附加的引導序列和kozak共有序列增大，并亞克隆到表達載體pcDNA3中。最終構建物被稱為pAPM.D12，與編碼人CD18的修飾的商購載體pDC1.CD18共轉染二氫葉酸缺陷中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。質粒pDC1.CD18編碼DHFR+標志，轉染子可用合適的核苷酸缺乏培養基選擇。導致pDC1.CD18的修飾見如下說明。
質粒pRC/CMV(Invitrogen)是一哺乳動物表達載體，其帶有一個巨細胞病毒啟動子和氨芐青霉素抗性標記基因。DHFR基因來自于質粒pSC 1190-DHFR，被插入SV40復制起點的PRC/CMV5′。另外，來自于質粒pHF2G-DHF的5′區的多聚接頭被連接到pRC/CMV/DHFR構建物的DHFR基因的3′。然后將CD18編碼序列克隆到生成的質粒中，位于5′側翼多聚接頭區和牛生長激素poly A編碼區之間。
采用單克隆抗體TS1/18對于CD18的表面表達進行流式細胞儀分析。檢測到的在αd和CD18之間異源二聚體的形成與實施例10所述的用COS細胞中瞬時表達的免疫沉淀相一致。
實施例12人αd以依賴于CD18的融合方式，結合到ICAM-R上考慮到一些報道證明了白細胞整聯蛋白和介導細胞-細胞接觸的細胞間粘附分子(ICAMs)之間的相互作用〔Hynes，細胞6911-25(1992)〕，用兩種方法分析了表達的αd/CD18 CHO細胞與ICAM-1，ICAM-R或VCAM-1的結合能力。
在一式兩份的測試中，可溶性ICAM-1，ICAM-R或VCAM-1 IgG融合蛋白被固定化在塑料上，并確定αd/CD18 CHO轉染細胞結合固定化配體的能力。轉染細胞用calcein內部標記，用結合緩沖液洗滌(加入1％BSA的RPMI)在單獨的緩沖液(加入或不加入10ng/mlPMA)或加入10μg/ml的抗CD18單克隆抗體的緩沖液中溫孵。轉染細胞加入到預先用可溶性ICAM-1/IgG1，ICAM-R/IgG1或VCAM-1/IgG1融合蛋白，或牛血清白蛋白(BSA)(作為陰性對照)包被的96-孔Immulon 4微滴度板。在1993年8月5日提交的共同未決的和共同擁有美國專利申請系列號08/102,852中描述和完全公開了這些粘附分子的可溶性形式的設計。在加入標記的細胞之前，用1％BSA(溶于PRS)封閉樣品孔。將板沒入含有0.1％BSA的PBS中20分鐘以洗滌平板后，用Cytofluor 2300(Milliproe，Milford，MA)測量殘留在每一樣品孔中的總熒光。
在用固定化ICAM進行的實驗中，αd/CD18共轉染子持續地顯示了與ICAM-R/IgG1樣品孔的結合比與BSA包被樣品孔的結合增高了3-5倍。這種結合的特異性和CD18依賴性被抗CD-18抗體TS1/18的抑制效應所證實。用CD11a/CD18轉染的細胞與ICAM/IgG樣品孔的結合與在BSA包被樣品孔中所觀察到的結合是類似的。僅在PMA預處理之后，CD11a/CD18轉染細胞與ICAM/IgG1樣品孔的結合增長了2-3倍。用PMA處理αd/CD18轉染子不影響其與ICAM-1/IgG1或ICAMR/IgG1樣品孔的結合。未觀察到αd/CD18轉染子與VCAM-1/IgG樣品孔的可檢測的結合。
通過流式細胞計量術確定αd/CD18轉染細胞與可溶性ICAM-1/IgG1，ICAM-R/IgG1或VCAM-1/IgG1融合蛋白的結合。大約1×106αd/CD18-轉染CHO細胞(生長于旋動三角瓶中以獲得更高表達)/測量體積被懸浮于加或不加10μg/ml抗-CD18抗體的100μl結合緩沖液中(RPMI和1％BSA)。室溫溫孵20分鐘之后，細胞用結合緩沖液洗滌并加入ICAM-1/IgG1或ICAM-R/IgG1融合蛋白，蛋白終濃度為5μg/ml。結合在37℃下進行30分鐘，在此之后細胞洗滌3遍并重懸于100μl含有稀釋度為1∶100的FITC-結合綿羊抗人IgG1的結合緩沖液中。溫孵30分鐘后，樣品洗滌3遍并重懸于200μl結合緩沖液中，用于Becton Dickinson FACScan分析。
大約40-50％的αd/CD18轉染子表明與ICAM-R/IgG1結合，但αd/CD18轉染子不與ICAM-1/IgG1或VCAM-1/IgG1蛋白質結合用PMA預處理轉染細胞不影響αd/CD18與ICAM-1/IgG1，ICAM-R/IgG1或VCAM-1/IgG1的結合，這與固定化粘附實驗相一致。用抗CD18抗體TS1/18處理αd/CD18轉染子之后，ICAM-R的結合降低到本底水平。
從這兩個結合試驗收集的數據表明αd/CD18與ICAM-R結合且與ICAM-1和VCAM-1相比是優先的。αd/CD18與ICAM-R的高于ICAM-1的優先結合與用CD11a/CD18和CD11/CD18所觀察的結果相反。這樣αd/CD18結合的調制被期望選擇性影響ICAM-R起重要作用的正常和病理性免疫功能。而且，測試了多種ICAM-R胞外區的免疫特異性抗體的抑制ICAM-R與αd/CD18轉染子結合的能力類似的實驗的結果表明αd/CD18和CD11a/CD18與ICAM-R的不同結構域相互作用。
CD11a/CD18與溶液中的ICAM-1/IgG1或ICAM-R/IgG1結合的失敗提示在CD11a/CD18和ICAM-1或ICAM-R之間結合的親和力太低，不能在溶液中結合，然而，檢測到αd/CD18與ICAM-R/IgG1的結合提示了異常高的結合親和力。
上述的FACA粘著試驗被用于測試ICAM-R突變體E37A/Ig與表達αd/CD18的CHO細胞的結合。已經顯示了E37A/Ig消除了與LFA1/Ig嵌合體的結合〔Sadhu等，細胞粘著和通訊2429-440(1994)〕突變體蛋白以可溶形式從穩定轉染的CHO細胞系表達，并如Sadhu等人描述方法(見上文)在Prosep A柱上純化。
在重復試驗中未檢測到E37A/Ig與αd/CD18轉染子的結合。被FITC標記的抗人抗體檢測的E37A/Ig嵌合體的平均熒光強度(MFI)與檢測抗體本身的MFI一致，表明在該實驗中使用E37A/Ig突變體蛋白未顯示出高于本底的可檢測信號。同樣的，在如實施例14所述的ELISA中，E37A/Ig突變體未顯示出與αd/CD18結合。αd與iC3b的結合補體組分C3可被蛋白水解酶切成iC3b復合物，其引發補體激活的旁路途徑并最終導致靶的細胞介導的破壞。CD11b和CD11c都參與了iC3b的結合和隨后iC3b-包被顆粒的吞噬作用。最近鑒定了一個CD11bI結構域的肽片段作為iC3b相互作用位點〔Ueda等，美國國立科學院院報9110680-10684(1994)〕。在CD11b，CD11c和αd中iC3b結合區高度保守，提示了αd/iC3b結合作用。
在玫瑰花結試驗中，使用轉染子或天然表達αd細胞系(如，PMA刺激HL60細胞)和iC3b-包被的綿羊紅細胞(sRBC)進行αd與iC3b的結合實驗。〔Dana等，J.Clin.Invest，73153-159(1984)〕。αd/CD18CHO轉染子，VLA4-CHO轉染子(陰性對照)和PMA刺激的HL60細胞的形成玫瑰花結的能力在抗-CD18單克隆抗體(如TS1/18.1)存在或不存在的情況下比較。
實施例13通過閃爍接近實驗進行篩選本發明的αd配體和它們的結合伙伴(αd配體/抗配體對)之間的結合的特異性抑制劑用多種方法確定，例如在美國專利No.4,271,139，Hart和Greenwald分子免疫學12265-267(1979)和Hart及Greenwald，J.Nac.Med.201062-1065(1979)泛泛描述的閃爍接近技術，每一文獻均在此引入作為參考。
簡言之，αd配體/抗-配體對的每一成員被直接或間接地結合到固體支持物上。間接俘獲涉及間接結合到支持物上的、識別可溶的整聯蛋白β鏈蛋白的C-末端特異表位的單克隆抗體。這一表位可能是血凝素蛋白或分枝桿菌IIFE9表位〔Anderson等，免疫學雜志141607-613(1988)〕。熒光劑亦結合到支持物上。或者是，如在此引入作為參考的美國專利No.4,568,649中描述的將熒光劑整合到固體支持物上。αd配體/抗配體對的非支持物結合的成員用放射活性化合物結合。其發射放射性以激發熒光劑。當配體與放射性標記的抗配體結合時，將標記與支持物結合的熒光劑(fluorescer)足夠靠近以激發熒光劑造成光發射。未結合時，標記一般與固體支持物相距太遠，不能激發熒光劑，光發射太弱。測量發射的光，并與配體和抗-配體之間的結合相聯。向樣品中加入結合抑制劑則會通過將放射活性標記保持在固體支持物鄰近處，不被俘獲而降低熒光發射。因此結合抑制劑可由它們對于樣品熒光發射的影響而被鑒定。用同樣的方法可鑒定潛在的αd的抗配體。
通過下述方法可將可溶性重組體αd/CD18亮氨酸拉鏈構建物(見實施例14)用于閃爍接近實驗以篩選CAM結合的調制劑。將重組整聯蛋白固定化在事先包被有非封閉的抗α亞基或抗β亞基抗體的包埋了閃爍劑的板上。化學文庫化合物和一種特異的生物素化CAM/Ig嵌合體同時加入板中。通過標記的鏈霉抗生物素蛋白探測CAM/Ig。在本實驗中，按照制造商的方案用NHS-Sulfo-biotin LC(長鏈，Pierce)將ICAM-1/Ig和ICAM-3/Ig生物素化。標記的蛋白質仍與CAM特異性抗體反應，并當用鏈霉抗生物素辣根過氧化物酶探測且隨后用OPD顯色時，ELISA檢測可顯示出其與固定化LFA-1反應。
或者是，重組亮氨酸拉鏈蛋白質被純化，或部分純化，且直接包被到閃爍劑包埋的板上。同時加入未標記的CAM/Ig嵌合體和化學文庫化合物，用125I標記的抗人Ig探測結合的CAM/Ig。
另一種選擇方案是，純化的CAM/Ig蛋白質固定化在閃爍劑板上。化學文庫化合物和來自于表達重組體亮氨酸拉鏈整聯蛋白的細胞的濃縮上清液加至板上。用標記的，未封閉α或β亞基抗體檢測重組體整聯蛋白的結合。
實施例14可溶性人αd表達構建物全長的，可溶性人αd/CD18異二聚體蛋白的表達為免疫和結合試驗提供了容易地純化的材料。產生可溶性蛋白質的優點是它可以從上清液而不是從細胞溶胞物(如全長膜結合αd/CD18那樣)純化；因而提高了收率降低了雜質。
可溶性αd表達質粒如下構建。克隆到質粒pATM.D12中的、對應于SEQ ID NO1殘基0-3161位堿基的區域的核苷酸片段通過HindIII和AatII酶切而分離。與HindIII/AatII片段重疊的且在其3′末端含有另外的MluI限制性位點的，對應于SEQ ID NO1的3130至3390位堿基的PCR片段，采用分別在SEQ ID NO30和31中給出的引物sHAD.5和sHAD.3從pATM.D12中擴增。
5′-TTGCTGACTGCCTGCAGTTC-3′ (SEQ ID NO30)5′-GTTCTGACGCGTAATGGCATTGTAGACCTCGTCTTC-3′(SEQ ID NO31)
用AatII和MluI酶切PCR擴增產物且連接到HindIII/AatII片段上。生成的產物連接到HindIII/MluI消化物質粒pDCl.S上。
構建物在穩定轉染的CHO細胞中與可溶性CD18共表達，并通過放射自顯影可視化來自35S-甲硫氨酸標記細胞的免疫沉淀CD18復合物而檢測表達。構建物還與CD18在293細胞中共表達，〔Berman等，J.Cell.Biochem.52183-195(1993)〕。可溶性全長αd構建物本發明還考慮了任選的αd表達構建物。為便利完整劑的αd/CD18異二聚體的表達和純化，構建包括在純化過程中，穩定異二聚體的“亮氨酸拉鏈”融合序列的可溶性αd和CD18表達質粒〔Chang等，美國國立科學院院報，9111408-11412(1994)〕。簡言之，采用Chang等人描述的寡核苷酸通過引物退化產生編碼拉鏈的酸性和堿性氨基酸鏈的DNA。DNA序列被進一步修飾，以在DNA的5′和3′末端分別包括另外的MluI和XbaI限制性位點，以便利亞克隆到先前描述的αd或CD18表達構建物中。另外，代表血凝素或聚組氨酸序列亦被加入，而且一個終止密碼子亦被插入XbaI之后。血凝素或聚組氨酸序列被參入以便利表達蛋白質的親和純化。編碼拉鏈的堿性鏈的序列被參入表達CD18的質粒載體，酸性鏈被插入到α鏈構建物。在宿主細胞內表達修飾的αd和CD18蛋白質時，設想拉鏈結構的酸性和堿性鏈之間的相互作用將穩定異二聚體，且允許如上述的親和純化而分離完整的αd/CD18分子。
構建用于表達具有酸性和堿性亮氨酸拉鏈序列的可溶性αd和CD18的質粒，并通過實施例7描述的DEAE/Dextran方法轉染COS細胞。生成的蛋白質被稱為αd/CD18 LZ。血凝素和聚組氨酸標志被參入αd/CDLZ。轉染細胞在減低血清的條件(2％)下生長14天。每5天從轉染細胞收集上清并如實施例8所述通過ELISA分析其蛋白產生。簡言之，αd/CD18 LZ異二聚體被固定到包被了抗-αd單克隆抗體169B(見實施例15)的板上。αd/CD18 LZ復合物通過加入生物素化的抗-CD18單克隆抗體，TS1/18.1(見實施例8)，然后加入鏈霉抗生物素蛋白/辣根過氧化物酶(HRP)結合物和鄰苯二胺(OPD)而探測。在上清液中可清晰地探測到蛋白質。采用可溶全長αd表達產物進行結合實驗使用上述可溶性全長αd/CD18 LZ異二聚體進行的功能性結合實驗通過將異二聚體固定化在包被了單克隆抗體169B或未封閉的抗-CD18單克隆抗體(見實施例15)的板而進行。用魚皮明膠封閉樣品孔以防止以起始濃度為10μg/ml加入CAM/Ig嵌合體(見實施例12)之前非特異性結合。用羊-抗-人Ig HRP結合物(Jackson Labs)和隨后用OPD顯色來檢測嵌合物與αd/CD18的結合。
VCAM-1/Ig被觀察到以高于俘獲的CD11a/CD183-5倍結合于俘獲的αd/CD18 LZ。ICAM-1/Ig和ICAM-2/Ig以分別高于本底1510倍結合于可溶性CD11a/CD18異二聚體，但不結合αd/CD18，在VCAM-1特異性抗體130K和130P用于組合物而出現時，VCAM-1結合降低了大約50％。
使用固定于96-孔板ICAM/Ig蛋白質，然后加入細胞上清液中的重組體可溶性整聯蛋白而進行結合實驗。用未標記的未封閉α或β亞基特異性鼠抗體然后與HRP-結合羊抗小鼠抗體溫孵和用OPD顯色而檢測可溶性整聯蛋白的結合。
結果表明未封閉抗體檢測到的αd/CD18 LZ與ICAM-R/Ig的結合高于在不含有抗體的對照樣品孔中檢測到的結合的10倍。用固定化ICAM-1/Ig未檢測到可溶性αd/CD18結合，然而，在αd/CD18和固定化CD11b/CD18和CD11a/CD18之間分別檢測到高于本底結合15和5倍的結合。
因為先前的研究證明Cd11b和CD11c結合脂多糖(LPS)〔Wright，Curr.Opin.Immunol.383-90(1991)；Ingalls和Golenboc k，J.Exp.Med.1811473-1479(1995)〕，亦用流式細胞計量術和基于板的實驗(plate-based assay)測量了LPS與αd/CD18的結合。結果表明20μg/ml的從S.Minnesota和S.typhosa分離的、用FITC標記的脂多糖(均購自Sigma)能與αd/CD18轉染的CHO細胞微弱地結合。未觀察到與未轉染的對照CHO細胞結合。在ELISA實驗中，0.5-3.0μg的生物素化LPS〔Luk等，Alan Biochem.232217-224(1995)〕與固定化αd/CD18 LZ結合，具有的信號比單獨的俘獲抗體和封閉劑給出的信號高4倍。LPS與CD11a/CD18的表觀結合通過從每一實驗值減去與抗CD11a抗體TS2/4的本底結合而折算。
為了鑒定αd/CD18的其它配體，重組體αd/CD18 LI蛋白質被用于兩個滴定研究中。不同細胞類型與固定化蛋白質的結合被用于確定何種細胞在細胞表面表達αd配體。然后用抗體抑制確定觀察到的細胞結合是否由與已知的表面粘附分子之間的相互作用引起。假如未有引起抑制，與來自結合αd的細胞的溶胞物的蛋白質結合的αd/CD18 LI共沉淀，用于試圖鑒定配體。可溶性人αdI結構域表達構建物先前報道CD11a的I結構域可以作為獨立的結構單元表達，該單元保持了配體結合能力和抗體識別能力〔Randi和Hogg，J.Biol.Chem.26912395-12398(1994)，Zhou等，J.Biol.Chem.26917075-17079(1994)，Michishita等，細胞72857-867(1993)〕。為產生包含αdI結構域，和人IgG4的可溶性融合蛋白質，通過PCR擴增αdI結構域，該PCR采用的引物被設計加了BamHI和XhoI限制性位點側翼以便利亞克隆。這些引物在SEQ ID NO32和33中給出，限制性位點被下劃線。
5′ACGTATGCAGGATCCCATCAAGAGATGGACATCGCT-3′(SEQ ID NO32)5′-ACTGCATGTCTCGAGGCTGAAGCCTTCTTGGGACATC-3′(SEQ ID NO33)緊鄰SEQ ID NO32的BamHI位點3′的C核苷酸對應于SEQ IDNO1的435位核苷酸，位于SEQ ID NO33的XhoI位點3′的G核苷酸互補于SEQ ID NO1的1067位核苷酸。擴增的I結構域用合適的酶消化，純化的片段連接到哺乳動物表達載體pDCs上和原核表達載體pGEX-47-3(Pharmacia)上，并測序I結構域片段。然后，融合蛋白在轉染或轉化了合適的表達構建物的COS，CHO或E.coli細胞中表達。
假設αd與ICAM-R有親和力，αdI結構域的表達可能具有足夠的親和力，以充當αd參與的細胞粘著的有用的抑制劑。人αdI結構域/IgG4融合蛋白的分析在還原或非還原條件下通過SDS-PAGE拆分蛋白質，并通過銀染或考馬斯染色而可視。然后將蛋白質轉移到Immobilon PVDF膜上，用抗人IgG單克隆抗體或抗牛Ig單克隆抗體進行Western印跡分析。
探測的蛋白質被確定為在非還原條件下以大約120kD遷移，還原條件下，以大約45kD遷移。在非還原膠上大約40-50kD處檢測到小的條帶，它與抗人抗體反應，但不與抗牛抗體反應。經Western印跡確定，200kD的小條帶是牛Ig。使用I結構域表達產物進行結合實驗以ELISA方式檢測I結構域特異性識別ICAM-R/IgG嵌合蛋白的能力。將αdI結構域IgG4融合蛋白(Iαd/IgG4)在TBS中的系列稀釋液與固定化在Immulon IV RIA/EIA板上的ICAM-1/IgG，ICAMR/IgG，VCAM-1/IgG或不相關的IgG1骨髓瘤蛋白溫孵。CD11a I結構域/IgG嵌合蛋白和人IgG4/κ骨髓瘤蛋白被用作陰性對照。用生物素化的抗-IgG4單克隆抗體HP6023，然后加入鏈霉抗生物素蛋白-過氧化物結合物和用底物鄰苯二胺顯色而探測結合的IgG4。
在重復的實驗中，未檢測到CD11a/IgG4蛋白或/IgG4骨髓瘤蛋白與任何固定化蛋白質的結合。Iαd/IgG4蛋白不與魚皮明膠或牛血清白蛋白封閉劑，人IgG1或ICAM-1/IgG結合。使用1-5μg/ml濃度的Iαd/IgG4蛋白，在ICAM-R/IgG蛋白包被的樣品孔中檢測到高于本底2至3倍的結合信號。在VCAM-1/IgG蛋白包被樣品孔的信號高于本底7-10倍。在先前的試驗中，αd/CD18轉染的CHO細胞不結合VCAM-1/IgG蛋白，提示了VCAM-1結合可能是分離的1結構域氨基酸序列的特征。其它αdI結構域構建物以與前述構建物相同的方式產生了其它的αdI結構域構構建物，但是參入了更多的圍繞αdI結構域的氨基酸。具體的構建物包括i)在現有的構建物之前，有來自外顯子5(SEQ ID NO2的127-353位氨基酸)的序列，ii)在I結構域之后有EF手重復片段(EF-handrepeat)(SEQ ID NO2的17-603位氨基酸，和iii)在跨膜區域(SEQ ID NO2的17-1029位氨基酸)截短的α鏈，以及用于純化和檢測目的的IgG4尾。這些構建物被連接到哺乳動物表達載體pDCS1或原核表達載體pGEX-4T-3(pharmacia)上，并測序I結構域。融合蛋白在轉染或轉化了合適的表達構建物的COS，CHO或大腸桿菌中表達。蛋白質在ProSep A柱(bioprocessing Limited，Durham，England)純化，檢測其與抗-IgG4單克隆抗體HP 6023的反應性，并用考馬斯染色使之在聚丙烯酰胺凝膠上可視化。
為了構建完整αd多肽的表達質粒，上文描述的pATM.D12被以下列方式修飾以表達αd-IgG4融合蛋白。采用分別參入了5′AatII限制性位點(SEQ ID NO89)和3′XbaI限制性位點(SEQ ID NO90)的引物，經PCR從載體pDCS1分離IgG4編碼DNA。
5′-CGCTGTGACGTCAGAGTTGAGTCCAAATATGG-3′ (SEQ ID NO89)5′-GGTGACACTATAGAATAGGGC-3′ (SEQ ID NO90)用AatII和XbaI酶切質粒pATM.D12，將適當酶切和純化的IgG4PCR產物連接到線性載體中。
實施例15人αd特異性抗體的產生A.單克隆抗體的產生實施例7的瞬時轉染細胞用Dulbecco’s磷酸鹽緩沖液(D-PBS)中洗滌三遍，以5×106細胞/鼠的數量和50μg胞壁二肽PBS溶液(Sigma)/鼠一起注射Balb/c小鼠。以2周間隔以同一方式注射小鼠兩次以上。如實施例9所述用FACS分析來篩選來自小鼠的前血(prebleed)和免疫血清，來自于小鼠的對αd/CD18轉染細胞有高度反應性的脾被融合。分別篩選缺乏對CD11a/CD18轉染的COS細胞的反應性，和對用αd表達質粒和CD18共轉染細胞的具有反應性的雜交瘤培養物上清液。
這種方法不生成單克隆抗體。
2.作為生產單克隆抗體的一種選擇性方式，可溶性αdI結構域/IgG4融合蛋白從穩定轉染的CHO細胞的上清液中親和純化，并按上述方法免疫Balb/c小鼠。建立雜交瘤。來自這些雜交瘤的上清液經ELISA，就其針對αdI結構域融合蛋白的反應性進行篩選。然后就其對于在CHO轉染子上表達的全長αd/CD18復合物的反應性分析陽性培養物。
小鼠1908接受了三次起始的αd/CD18轉染CHO細胞的免疫接種，和隨后兩次用αd/CD18異二聚體進行的加強免疫。兩次最終的免疫接種包括50μg αdI結構域/IgG4融合蛋白/小鼠。該融合共產生270個產生IgG的樣品孔。經ELISA測定，來自于45個樣品孔的上清液呈現出高于人IgG4至少7倍的與Iαd/IgG4融合蛋白的結合。經FACS分析確定，沒有上清液與αd/CD18轉染的CHO細胞反應。
為確定在其它環境中，上清液是否識別整聯蛋白α亞基蛋白質，將新鮮的冷凍脾切片用來自45個樣品孔中的24個的上清液染色。3個上清液被確定為陽性1個染色在紅髓質中的大細胞，另外兩個染色分散在紅髓質和小柱的細胞。
這些上清液被進一步就能免疫沉淀來自αd/CD18轉染CHO細胞或PMA刺激HL60細胞的生物素化CD18復合物的能力進行分析。具有識別在去垢劑溶胞物中(不會在其構象上強迫作為異二聚體表達蛋白)的蛋白質的上清液的融合樣品孔被選擇用于進一步亞克隆。識別去垢劑中的蛋白質的單克隆抗體在免疫沉淀來自轉染子，組織，和細胞等的異二聚體復合物中可能更有用。
3.正如單克隆抗體產生的其它方案，在預先清除了CD11a/CD18(使用單克隆抗體TS2/4)和CD11b/CD18(使用單克隆抗體Mo-1)之后，CD18復合物從人脾溶胞物中和抗CD18單克隆抗體23F2G一起免疫沉淀。5只10至12周齡的Balb/c小鼠在0天皮下注射大約在完全弗氏佐劑中的30μg生成的蛋白質而免疫接種，然后在28天和43天用30μg不完全弗氏佐劑中的免疫原/小鼠而加強免疫兩次在最終一次加強免疫后10天抽取血清，使用1∶500稀釋度的每一血清測驗反應性，以在Western印跡中探測1μg/泳道的免疫原。來自于三只小鼠的血清探測大約95和150kD的條帶，在用1∶50稀釋度的免疫前血清處理的泳道中未見信號。150kD的條帶被推測為代表處于活體內糖基化狀態的αd。另外，所有免疫后血清從糖基化αd/CD18 CHO細胞的溶胞物免疫沉淀蛋白，該蛋白在SDS-PAGE中以適于表示異二聚體的分子量遷移。從這些結果中，選擇小鼠#2212，進一步在64天用30μg PBS中的免疫原腹內注射而免疫。4天后處死該小鼠，無菌移取脾臟。
通過浸沒在補充了2mM L谷氨酸，1mM丙酮酸，100單位/ml青霉素，和100μg/ml鏈霉素的無血清RPMI(Gibco，Canada)中，將脾在兩片玻璃顯微載玻片的冷凍末端之間研磨而形成單細胞懸浮液。細胞懸液通過一個無菌70目Nitex細胞滲濾器(Becton Dickinson，Parsippany，New Jersey)，濾液于200g離心5分鐘洗兩遍。生成的沉淀重懸于20ml無血清RPMI。以同樣方式制備來自于三只天然的Balb/c小鼠的胸腺細胞。
在融合之前，于對數期保藏在補充了10％Fetalclone血清(FBS)(Hyclone Laboratories，Inc.，Logan，Utah)的RPMI中，在融合前保藏了3天的NS-1骨髓瘤細胞，于200g離心5分鐘而沉淀，如前述段落所述洗滌兩次，并計數。大約2×108脾細胞與4×107NS-1細胞合并，生成的混合物于2000g沉淀。棄去上清。敲擊離心管，使細胞沉淀脫離原有的位置，在1分鐘的過程中，振搖加入2ml于75mM-Hepes(pH8.0，37℃)(Boehringer Mannheim)中的50％PEG1500。在隨后的7分鐘內加入另外14ml不含血清的RPMI，然后隨即加入14mlRPMI。生成的混合物于200g離心10分鐘并棄去上清。沉淀重懸于含有15％FBS，100mM次黃嘌呤鈉，0.4mM氨基蝶呤，16mM胸苷(HAT)(Gibco)，25單位/ml IL-6(Boehringer Mannheim)和1.5×106胸腺細胞/ml的200ml RPMI，以200μl/樣品分裝到96孔平底組織培養板(Corning United Kingdom)。在融合后2，4和6天用18G針頭(Becton Dickinson)從每個孔中吸取100μl，然后加入除了含有10單位/ml IL-6和缺乏胸腺細胞外，與上述相同的培養基，加入量為100μl/孔，以飼養細胞。
在融合后7-10天，通過抗體俘獲ELISA篩選來自每一樣品孔的上清液，檢測小鼠IgG的出現。用50μl/樣品孔以1∶5000稀釋于50mM碳酸鹽緩沖液，pH 9.6的羊抗小鼠IgA，IgG或IgM(Oragon Teknikd)于4℃包被Immulon 4板(Dynatech，Cambridge，Massachusetts)。用含有0.5％Tween 20(PBST)的PBS洗滌板三次，向每個樣品孔加入50μl培養物上清液。37℃溫孵30分鐘后，如上用PBST洗滌樣品孔向每個樣品孔中加入50μl以1∶5500稀釋于PBST中的辣根過氧化物酶結合的羊抗小鼠IgG(fc)(Jackson Immuno Research，West Grove，Pennsylvania)。板如上溫孵，用4×PBST洗4遍，并加入100μl底物，底組由1mg/ml鄰苯二胺(Sigma)和0.1μl/ml溶于100mM檸檬酸鹽，pH4.5中的30％H2O2。5分鐘后，加入50μl 15％H2SO4中止顏色反應。用平板計數儀(Dynatech)測量每孔的490nm處的吸光率。
雜交瘤細胞被進一步如下表征。通過流式細胞計量術分析了來自產生IgG的培養物的上清液對于αd/CD18轉化CHO細胞的反應性，但檢測不到其對于JY細胞(一種LFA-1陽性B細胞，但在以前的in-house染色實驗中，觀察到其是其他β2整聯蛋白陽性的)的反應性。簡言之，5×105αd/CD18轉化的CHO或αd/CD18-JY細胞懸浮于含有2％FBS和10mM NaN3(FACS緩沖液)的50μl RPMI中。各個細胞懸液加入96孔圓底板(Corning)的孔中的50μl IgG陽性雜交瘤培養物上清中。冰浴30分鐘之后，細胞通過在醫用離心機中洗兩遍而沉淀。棄去每一樣品孔中的上清，將沉淀重懸于200-300μl FACS緩沖液。最后一次洗滌用50μl 1∶100稀釋度的配制于FACS緩沖液中的羊抗鼠IgG(H+L)-FIFC結合物的F(ab′)2片段。如上述步驟溫孵后，細胞用補充了10mM(Sigma，S+Louis Missouri)NaN3的Dulbecco’s PBS(D-PBS)洗滌兩遍，然后重懸于含有1％多聚甲醛的D-PBS中。然后將樣品轉移到聚苯丙烯管中，用于用Becton Dickinson FACsan分析儀進行的流式細胞計量術分析(FACS)。
該融合產生了用兩種標準評判均確實是陽性的四株培養物。大約4天之后，在擴大的上清液中重復第二輪篩選，四株培養物中的三株仍是陽性。這三個樣品孔，被稱為169A，169B，169D，通過在RPMI，15％FBS，100mM次黃嘌呤鈉鹽，16mM胸腺嘧啶，和10單位IL-6/ml，中雙倍稀釋，被連續克隆2至3次。4天之后克隆平板的樣品孔被可視地記錄下來，而且記錄最低密度的集落的數目。7-10天之后，每一克隆的選擇的樣品孔用FACS分析。在培養物中的兩個。169A和169B中發現活性。在最終克隆中，含有單個集落的陽性樣品孔在含11％FBS的RPMI中擴大。按照制造商的說明，使用IsoStrip試劑盒(Boehringer Mannheim)對來自169A和169B的克隆化上清液的抗體進行同種型分析，發現是IgG1同種型。
來自于CHO轉染子和PMA刺激的HL60細胞的αd/CD18復合物的免疫沉淀可用作關于特異性的第三輪篩選。經SDS-PAGE鑒定，雜交瘤169A和169B從CHO細胞中沉淀合適的條帶，從HL-60細胞中沉淀150-160kD的單個α鏈類型。雜交瘤細胞于1995年5月31日保藏在美國典型培養物保藏中心，12301 Parklawn Drive，Rockville，Maryland20852，其保藏號分別是HB 11907和HB 11906。
為了更完整地表征169A和169B的結合特性，測試了每一抗體抑制其他或抗-CD18抗體TS1/18.1與可溶性αd/CD18的結合的能力。用分布在96-孔板的每一份未標記抗體固定化可溶性全長αd/CD18，并用生物素化抗體探測被相同或不同未標記抗體結合的蛋白。使用羊抗鼠Ig/HRP結合物隨后加入OPD底物而探測結合。結果表明抗體169A能夠封阻生物素化169A和TS1/18.1的結合，而抗體169B僅封閉其自身的結合。
4.另一只小鼠(#2214)被用與小鼠#2212的同一方法免疫接種，被選擇用于在70天用30μg于PBS中的來自脾溶胞物的純化αd經融合前加強免疫(pre-fasion boost)而進一步免疫。4天之后處死小鼠，無菌取出脾臟。
陽性細胞的融合和克隆如上述條件下完成。該融合產生了5個抗-αd單克隆雜交瘤，被稱為170D，170E，170F，170X和170H，按制造商的說明，使用IsoStrip試劑盒(Boehringer Mannheim)，將其同種型分析為IgG1。
5.還有另一只鼠#2211，被與小鼠#2212和小鼠#2214相同的起始方法免疫之后，被選擇且在88天用30μg免疫原和在203天用30μg免疫原進行融合前加強免疫。4天之后處死小鼠，取脾如上述步驟進行融合。如上述段落所詳述的由抗體俘獲ELISA和由流式細胞計量術篩選雜交瘤上清液。
鑒定了15個陽性雜交瘤，分別稱為188A，188B，188C，188E，188F，188G，188I，188J，188K，188L，188M，188N，188P，188R和188T，在ELISA實驗中進行同種型分析。簡言之，用1∶5000稀釋于50mM碳酸鹽緩沖液，pH9.6的50μl羊抗小鼠IgA、G、M(Organon Teknika)/樣品孔于4℃包被Immulon 4板(Dynatech，Cambridge，Massachusetts)。板于37℃用1％BSA的PBS溶液封閉30分鐘，用PBS/0.05％Tween 20(PBST)洗滌3遍，加入50μl培養物上清液(以1∶10稀釋于PBST)。如上溫孵和洗滌后，加入以1∶1000稀釋于PBST中的辣根過氧化物酶標記的兔抗小鼠IgG1、G2a和G3(Zymed，San Francisco，California)，和1％正常羊血清。如上溫孵板子。用PBST洗滌4次之后，加入100μl溶于100mM檸檬酸，pH4.5的由1mg/ml鄰苯二胺(Sigma)和0.1μl/ml 30％H2O2組成的底物中加入50μl 15％H2SO4在5分鐘中止顏色反應。在板讀數儀(Dynateeh)讀出A490，所有的15種抗體均被確定為IgG1。
剩余的來自小鼠#2211的脾細胞冷凍在冷凍管中，且貯于液氮中冷凍管置于37℃水浴中快速融化，將其圓周移動直到內容物剛巧融合。將細胞轉移到15毫升離心管中，其中一次加入溫熱的含有11％FBS的RPMI 1ml，間隔3至5分鐘后，加入另外5ml溫熱RPMI，停留5分鐘后，將離心管在200g離心5分鐘吸去上清。細胞重懸于RPMI中，如上步驟進行融合。如上通過抗體俘獲和流式細胞術篩選雜交瘤上清液。融合產生了5個克隆，被命名為195A，195C，195D，195E和195H。用如上述ELISA方法將克隆進行同種型分析，單克隆抗體195A，195C，195D和195E被確定為IgG1，195H被確定為IgG2a。
6.為了鑒定能夠抑制功能性αd結合的抗體，可溶性αd/CD18LZ(見實施例14)被用于免疫接種。從瞬時轉染COS細胞的上清液在親和性層析樹脂上分離蛋白質，樹脂結合的αd被用作免疫原。如上所述免疫一只選擇的小鼠，在初始免疫之后兩周，給一次最終免疫加強。用這種技術進行的免疫避免了經常與細胞的去垢劑溶胞相關聯的可能的蛋白質構象的轉變。另外的小鼠亦用樹脂結合的重組蛋白進行免疫，但初始免疫不采用從細胞溶胞物純化的蛋白。
使用非封閉抗體的Fab片段，對于如上制備的由免疫接種引起的雜交瘤通過ELISA就其來自于細胞上清液的固定化重組蛋白質進行篩選。或者是，用αdcDNA轉染之前流式細胞計量術被用于分析對JY細胞的反應性。
7.另一種選擇方案是，單克隆抗體如下產生。來自于穩定轉染CHO細胞的去垢劑溶胞物的親和純化αd/CD18異二聚體蛋白質和50μg/ml胞壁二肽被如上所述免疫Balb/c小鼠。通過在CHO轉染子免疫沉淀生物素化復合物而鑒定針對αd/CD18的血清反應性之前，小鼠被免疫接種三次。根據標準方法從陽性動物建立雜交瘤，之后使用αd/CD18轉染子進行流式細胞計量術而選擇雜交瘤培養物。CD11a/CD18轉染子被用作僅對CD18有的反應性的對照。
8.作為單克隆抗體產生的另一選擇，Balb/c小鼠經受免疫接種/免疫抑制方案，該方案被設計用于降低對于用于免疫接種的轉染子的CHO細胞決定簇的反應性。該方案涉及用未轉染的CHO細胞進行免疫接種，隨后用環膦酰胺處理殺死CHO-反應性B細胞母細胞，經三輪免疫接種和環膦酰胺處理后，小鼠按上述步驟用αd/CD18 CHO轉染細胞進行免疫。
9.另一種選擇是，來自于PMA刺激HL-60細胞的去垢劑溶胞物的CD18復合物通過如上述步驟預清除而富集。其它β2整聯蛋白在同一柱上清除。同生成的復合物進行免疫接種，如上文所述方案進行雜交瘤產生和篩選。B.多克隆血清產生純化的αdI結構域/IgG4嵌合體(實施例14)被用于在兔中產生多克隆血清。最初，配制于完全弗氏佐劑中的αdI結構域/IgG4抗原被從100μg/兔注射，然后用配制于不完全弗氏佐劑的等量蛋白質進行三次免疫加強。在第三和第四次注射之后分析血樣。兔免疫球蛋白(Ig)從血清中在蛋白質A-瓊脂糖柱上純化，且在人IgG/Affigel 10柱上預清除抗人IgG反應性。通過ELISA檢測到的與I結構域嵌合體，但不與人IgG具備反應性，證實了完全的預清除。
預清除的多克隆血清用于免疫沉淀來自于預先用αd和CD18表達載體轉染的表面生物素化CHO細胞去垢劑溶胞物的蛋白質。通過先前在實施例10中描述方法進行免疫沉淀。預清除的血清識別與抗CD18單克隆抗體TS1.18沉淀的蛋白的分子量相同的蛋白質復合物。另外，在來自αd/CD18轉染CHO細胞的CD18復合物的Western印跡實驗中，血清識別合適大小的單一條帶。來自人脾的親和純化整聯蛋白CD11a/CD18，CD11b/CD18，和VLA4不被兔多克隆血清識別。在溶液中，血清不能與αd轉染CHO細胞反應，正如流式細胞計量術所確定的。因而得出結論多克隆兔血清僅能識別變性αdI結構域/IgG4蛋白質。
為嘗試產生多克隆抗αd/CD18抗血清，用αd轉染CHO細胞(D6CHO，αd/CD18)和佐劑肽免疫小鼠3次，用純化αd/CD18異二聚體免疫1次。最后的加強免疫僅包含αd/CD18異二聚體。通過在4℃加入大約108LFA-1-轉染CHO細胞2小時來預清除大約100μl免疫血清。在正常人脾上，將生成的血清于1/5000，1/10000，1/20000和1/40000稀釋度分析其αd反應性。多克隆抗體于1/20000具有反應性，而在1/40000稀釋度時，染色很淺。
實施例16αd分布的分析使用如實施例15所述產生的多克隆抗血清確定αd/CD18的組織分布。
純化的兔多克隆抗體以120ng/ml至60μg/ml的濃度范圍用于冷凍人脾切片的免疫化學分析。6微米厚的切片鋪覆于Superfrost，Plus Slides(VWR)上于-70℃凍存。使用前，切片從-70℃取出，置于55℃5分鐘，然后切片于冷丙酮中固定2分鐘，然后風干。切片于室溫下在含有1％BSA，30％正常人血清和5％正常兔血清的溶液中封閉30分鐘。在室溫下，第一抗體施用于每一切片1小時。未結合抗體通過在TBS溶液中洗滌3次而移去，每次洗滌5分鐘。然后，在同樣的TBS緩沖液中的兔抗小鼠IgG聯結抗體被施用于每一切片。小鼠堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶(APAAP)抗體于室溫下溫孵30分鐘，被用于檢測第二抗體。然后將玻片在TBS緩沖液中洗3次。加入Fast Blue底物(Vector Labs)，通過沒入水中而終止顏色顯示。在用Aqua Mount(Baxter)計數之前，將玻片在Muclear Fast Red(Sigma)中復染然后用水潤洗。用這種試劑在脾紅髓質中檢測到了染色，但用不相關兔多克隆Ig制備物或來自同一動物的未純化免疫前血清則無此結果。
一旦確定小鼠血清具有特異性αd反應性，該血清用于染色多種淋巴和非淋巴組織。識別CD18，CD11a，CD11c的單克隆抗體在同一實驗中用作對照。用αd多克隆血清，和CD11a，CD11b，CD11c和CD18的單克隆抗體揭示了以下結果。用αd多克隆血清所觀察到的圖樣(pattern)不同于用CD11a，CD11b，CD11c或CD18標記的圖樣用一些位于白髓質的邊緣區的細胞進行的標記有清晰的圖樣，并且邊緣區的外周細胞有清晰的標記。用其他抗體未觀測到該圖樣。散布于紅髓質中的單個細胞亦被標記，它們與用CD11a和CD18所標記的是亦可能不是同一類群或亞群。
用CD11c標記確實展示了在邊緣區一些細胞的染色，但與αd多克隆血清相比，抗體在白髓質周圍不顯示清晰的環狀圖樣，在紅髓質進行標記時亦不給出與αd多克隆血清相同的圖樣。
因而，與使用抗其他β2整聯蛋白(CD11a，CD11b，CD11c和CD18)的抗體時所見圖樣相比，用αd多克隆抗血清所見標記圖樣是獨特的。提示αd在人體中的體內分布不同于其他β2整聯蛋白。用單克隆抗體表征人αd表達雜交瘤169A和169B分泌的抗體被用于分析人αd表達，其中在冷凍切片中借助于免疫化學，在細胞系和外周血白細胞中借助于流式細胞計量術。在這兩套試驗中所用雜交瘤上清液未被稀釋。組織染色所有染色均如上述步驟進行，只有肝切片的染色按以下方式。丙酮固定之后，切片在室溫下，于1％H2O2和1％疊氮鈉的PBS溶液中淬滅15分鐘。第一抗體染色之后，加入直接結合到過氧化物酶的兔抗小鼠抗體，于室溫下保持30分鐘。玻片在TBS緩沖液中洗3次。直接結合到過氧化物酶的豬抗兔抗體在室溫下溫孵30分鐘以檢測第二抗體。玻片在TBS緩沖液中洗3次，加入AEC底物(Vector Labs)以進行顏色反應在脫水和計數前，用Hematoxylin Gill’s No.2(Sigma)復染玻片，然后在水中潤洗。
在脾切片中，多數表達位于脾紅髓質的經形態學鑒定為粒細胞和巨噬細胞的細胞上。大量粒細胞被染色，而僅有一部分巨噬細胞給出信號。在白髓質中的小量葉狀樹狀細胞亦被αd抗體輕微染色。在紅和白髓質中均檢測到CD11a和CD18染色。在脾白髓質和白髓質周圍的邊緣區，被推測為巨噬細胞的大細胞中，CD11c染色更明顯。亦注意到在紅髓質中，彌散的染色。看來CD11b在紅髓質中的分布與αd重疊但不相同，但不在白髓質中分布。
比較了整聯蛋白在正常和(類風濕)關節炎滑膜組織中的表達。注意到在正常組織中用所有抗-整聯蛋白抗體(包括與CD11a，CD11b，CD11c，CD18和αd特異性免疫反應的抗體)得到最低量的染色，而在棲息細胞(推斷為巨噬細胞)中有廣泛分布。在炎性滑膜中，所有整聯蛋白的表達更多地位于簇集在淋巴管周圍的細胞。雖然αd和CD11b表達模式是相似的，CD11c看來不同樣強烈地表達，且局限于白細胞的亞群中。
在狗的肝巨噬細胞或Kuppfer細胞中觀察到了CD11b的表達，但未觀察到αd的表達。正常人肝切片的染色(如先前描述的對于狗肝切片的染色，見上文)證實了這樣染色圖樣在人體中的保守性。另外，探測到低水平的CD11c。在肝炎病人切片中，所有的自細胞整聯蛋白染色高于在正常肝中觀察到的，而在這些樣品中的巨噬細胞和粒細胞檢測到了αd表達。
用抗αd抗體觀察到了正常人結腸切片的最小量的染色，觀察到了微弱的平滑肌染色和白細胞染色。在Crohn氏病患者的切片中檢測到高水平的白細胞整聯蛋白。
正常肺顯示了有限數量的微弱的αd陽性細胞，這些細胞經形態鑒定為巨噬細胞和嗜中性粒細胞。在肺氣腫患者的肺組織中，觀察到嗜中性粒細胞和巨噬細胞上的αd染色，其中巨噬細胞含有血鐵黃素，這是含有鐵離子的色素，表明這些細胞吞噬了紅細胞。
檢查正常腦和多發性硬化患者的空斑損傷切片的整聯蛋白表達。在正常腦組織中，αd染色弱于CD11a，CD11b和CD11c染色，且局限于形態分類為微膠質細胞和CD68染色的細胞。CD11b陽性細胞位于血管周圍且遍布組織。CD11c+細胞看來位于血管內，而αd+細胞圍繞血管。在MS組織切片中，在微膠質細胞和非巨噬細胞白細胞亞群上發現αd表達；αd+細胞位于空斑損傷內，且遍布皮質，αd信號的強度與CD11c相同，但低于CD11b。
用抗白細胞整聯蛋白和抗-CAM抗體分析PDAY(青年動脈粥樣硬化病理生物學決定簇，LSU醫藥中心)組織樣品的胸主動脈和腹主動脈切片。檢查到的損傷與主動脈脂肪層一致，該脂肪層由大的泡沫組織(多數是具有消化的脂肪的巨噬細胞)的內膜下聚集體和小的白細胞的浸潤物組成。用αd和其他β2整聯蛋白α鏈(CD11a，CD11b和CD11c)特異性抗體進行單標記研究，再加上巨噬細胞標記(CD68)揭示多數載脂巨噬細胞表達中等水平的αd和CD18，而分別以微弱或微弱至中等水平表達CD11a和CD11c。CD11b被微弱表達，且此時僅被巨噬細胞亞群表達。
進行雙標記研究以確定αd和ICAM-R在主動脈切片中的相對位置。因為在這些切片中，泡沫細胞被巨噬細胞特異性標志抗體Ham 56染色，而不被平滑肌肌動蛋白抗體染色，因而確定泡沫細胞不衍生于內膜下平滑肌細胞。表達αd的CD68陽性巨噬細胞被小ICAM-R陽性白細胞環繞且穿插。看來有有限數量的CD68陰性小白細胞，但被αd和ICAM-R抗體染色。
看來αd在正常組織中分布在棲息的白細胞上，其分布方式與CD11b和CD11c的分布方式重疊但不相同，CD11b和CD11c是兩種其他的白細胞整聯蛋白α鏈，先前被表征具有限制性的白細胞分布。細胞形態學表明αd染色被大量地局限在巨噬細胞和粒細胞上，且有有限的淋巴細胞染色。一般看來，組織炎癥升高在特定組織中觀察到的白細胞的數目和種類，伴隨增加的白細胞整聯蛋白包括αd的染色。因為白細胞整聯蛋白在病理組織中的細胞和空間分布不同，可以推論在具體環境中，每一家族成員，包括αd具有性質不同的作用和配體。
令人感興趣地，與CD11a，CD11b，CD11c相比，αd表達在早期動脈粥樣硬化損傷中看來更為顯著，提示αd可能在這些損傷中起中心作用。αd和ICAM-R陽性細胞的apposed分布被提示在αd和ICAM-R之間相互作用的事實支持，提示αd可能參與這些損傷的早期的白細胞募集或激活。細胞系和外周血白細胞染色抗體169A和169B通過FACS染色前髓單核細胞系HL60。在這些細胞中αd表面表達被PMA刺激負面影響，但不受DMSO影響，其中PMA刺激被報道誘導沿巨噬細胞途徑分化，而DMSO誘導粒細胞分化〔Collins，等，血液，701233-1244(1987)〕。使用PMA刺激的169A和169B的FACS分布形式(profile)與那些用抗-CD11b和抗CD11c單克隆抗體觀察到的分布形式正相反。另外外周血白細胞的淋巴細胞和單核細胞gate的細胞亞群是FACS弱陽性的。外周血單核細胞亞群用169A和169B微弱染色，而B淋巴細胞無αd表面表達。T淋巴細胞的CD8+亞群是αd+。另外，抗體169A和169B不能探測B細胞系的JY，Ramos，嗜堿性細胞系KU812，和T細胞系Jurkat SKW和Molt 16上的抗原。
考慮到HL60細胞的結果，通過聚蔗糖/hypalque梯度離心然后裂解紅細胞而從外周血中分離粒細胞。通過在乙酸中進行核形態學觀察發現所有制備物＞90％PMN。用50ng/ml PMA或10-8M甲基肽刺激分離的類群30分鐘以釋放潛在的細胞內整聯蛋白貯存。未刺激的類群展示了高出IgG1對照的低的但是明顯的169A和169B抗原表達，當受到刺激時觀察到可測的升高。在PMN中，αd和CD11c表面表達水平與在HL60細胞中觀察結果相比更具有相似性。抗體169B被隨后用于從生物素化PMN的去垢劑溶胞物中沉淀異二聚體分子，其亞基的大小分別是大約150和95kD，對于αd和CD18是合適的。
αd在PMN上的出現不能由已知關于犬αd表達的信息預測。犬嗜中性粒細胞不同于其人對應物，它表達T助細胞標志CD4和整聯蛋白VLA4，因而在狗中可能具有不同于人中的配體和功能。PBL亞群染色進行本研究以確定該β2整聯蛋白在人外周血白細胞中的分布。另外，比較了αd相對于其它β2整聯蛋白的細胞表面密度。最后，評價了αd表達在純化的人嗜曙紅細胞中的急性調節。
人外周血白細胞通過密度梯度離心分離成單核細胞級分(含有單核細胞，淋巴細胞和嗜堿性細胞)和粒細胞級分(嗜中性粒細胞和嗜曙紅細胞)〔Warner等，J.Immunol Meth，105107-110(1987)〕。就一些實驗而言，使用CD16免疫磁性選擇純化嗜曙紅細胞，純度大于95％〔Hansel等，J.Immunol Meth 12297-103(1989)〕。如上所述從人皮膚酶促分散皮膚肥大細胞并富集〔Lawrence等，J.Immunol，1393062-3069(1987)〕。
用特異于CD11a(MHM24)，CD11b(H5A4)，CD11c(BU-15D)或αd(169A)的單克隆抗體的合適的稀釋液標記細胞。還采用了對照鼠IgG1。洗滌細胞然后與藻紅蛋白結合羊抗小鼠IgG溫孵。在一些實驗中，細胞與過量的特異于一種特定細胞的鼠IgG和FITC-標記鼠單克隆抗體或羊多克隆抗體溫孵(如，對于T細胞是CD3，CD4或CD8)；就NK細胞是CD16+淋巴細胞，就嗜堿性細胞是抗IgE〔Bochner等，J.Immunol Meth，125265-271(1989)〕。然后用流式細胞計量術(Coulter EPICS Profile)檢查樣品，用合適的閘門(gating)以鑒定細胞亞群。
為了用其中αd表達的急性上調已被研究的人嗜曙紅細胞進行研究，用佛波酯(10ng/ml)，RANTES(100ng/ml)〔Shall，細胞因子3165-183(1991)〕，或IL-5(10ng/ml)在如上用多種單克隆抗體標記之前，于37℃刺激細胞15分鐘。
結果表明αd出現在所有外周血嗜曙紅細胞，嗜堿性細胞，嗜中性粒細胞，單核細胞和NK細胞。CD8+淋巴細胞的小的亞群(大約30％)被發現表達αd。皮膚肥大細胞和CD4+淋巴細胞不表達αd。一般地，CD11a和CD11b以較高密度出現在白細胞上，而αd與CD11c相似，以較低水平表達。在白細胞單核細胞和CD8+細胞具有最高密度的αd，而嗜曙紅細胞具有最低水平的αd表達。在嗜中性，嗜堿性細胞，和NK細胞中的表達是中等水平。
用CC化學因子(chemokine)RANTES刺激外周嗜曙紅細胞不引起任何β2整聯蛋白的表達的改變。然而，用佛波酯處理引起CD11b和αd表達的2至3倍的升高，但不影響CD11a或CD11c的表達。IL-5處理引起了CD11b表達的選擇性上調而不影響其它整聯蛋白亞基的水平。
綜合而言，這些結果指明在外周血白細胞中，αd一般以可比于CD11c的水平表達。發現最高水平在單核細胞和CD8+淋巴細胞亞群上。人皮膚肥大細胞不表達αd。純化的嗜曙紅細胞看來具有一個預先形成的CD11b和αd的胞質內貯庫。然而，IL-5相對于PMA顯示出的有差別的上調提示這些貯庫是彼此分開的。
如上所述，將閘門和表面標志結合使用，用流式細胞計量術確定外周血白細胞(PBL)亞群的染色圖樣，試圖更精確地限定169A/B陰性淋巴細胞群。PBL如上所述在Ficoll上分離，且用169A，169B以及抗CD14(單核/巨噬細胞標志)，CD20(B細胞)，CD56(NK細胞)，T細胞受體α/β(T細胞)，CD16(嗜中性粒細胞，NK細胞)，和α4(嗜中性粒細胞的陰性標記)的單克隆抗體。閘門由大小和標記分布決定。
結果表明在CD14+單核細胞閘門的細胞展示了低水平的169A和169B染色。在早期實驗中，在淋巴細胞閘門觀察到的雙重方式的表達方式，通過升高向前的散射而解決。混合的TCR+/CD20+細胞群似乎具有低的，但是均一水平的160A/B表達，但是被定位于輕微較高側旁散射(細胞復雜性)的細胞群，其大約50％為CD56染色陽性，看來具有明確的169A/B陰性群。陰性群亦不被TCR，CD20，CD14或CD16抗體識別。αd的滑膜分布為了確定αd，其它β2整聯蛋白和它們在炎性和非炎性滑膜中的對應物的細胞分布，對于不同β2整聯蛋白和免疫球蛋白超基因家族的單克隆抗體被用于免疫組織學研究。在正常的，骨關節炎和類風濕滑膜組織樣品中確定蛋白質表達。
結果表明滑膜襯細胞層表達了高水平的VCAM-1，CD11b/CD18和αd/CD18。在這些細胞中，CD11c/CD18表達是受限制的，一般檢測不到CD11a/CD18。在風濕性關節炎滑膜中，在滑膜細胞層中β2整聯蛋白的表達與增生的程度成比例增加。表達CD11c的細胞比例明顯升高，接近表達CD11b和αd的細胞比例，但CD11a表達沒有升高。
在組織的sablining區域，CD3/CD11a/ICAM-R+淋巴細胞的聚集物和彌散的浸潤物散布在CD68/CD11b/αd+巨噬細胞之間。大量的聚集物證實了強烈的αd染色，特別是在T細胞豐富區。
伴隨最低的CAM-R的表達跡象，滑膜內皮可變地表達ICAM-1和ICAM-2。
綜合起來，這些結果表明滑膜巨噬細胞和巨噬細胞樣滑膜細胞組成型地高水平表達β2整聯蛋白CD11b和αd。在滑膜中，這一細胞亞群在lining和sublining區域部有擴展，伴隨明顯的CD11c表達升高。類風濕滑膜T淋巴細胞的特異細胞群，除表達CD11a和ICAM-R之外，還高水平表達αd，上文還表述αd分子被外周血淋巴細胞低水平表達。
實施例17大鼠cDNA克隆的分離考慮到在犬和人中均存在αd亞基，試圖在其他物種包括大鼠(該實施例)和小鼠(實施例17，見上)中法律同源基因。
從大鼠脾λgt10文庫(Clontech)中獲得了與人αd基因具有同源性的大鼠cDNA部分序列。該文庫以2×104pfu/板在150mm LBM/瓊脂板上平板接種。將文庫插在Hyboxd膜上(Amersham)，按標準方案所述(Sambrook等分子克隆實驗室手冊，p2.110)，變性3分鐘，中和3分鐘，用緩沖液洗5分鐘。立即將膜放入Stratalinker(Stratagene)使用自動交聯設備交聯DNA。膜在低和高嚴格度條件下，分別在30％和50％甲酰胺中預雜交和雜交，膜最初用對應于克隆19A2(SEQ IDNO1)的500至2100堿基的，由人αdcDNA產生的32P標記探針篩選。探針按制造商的說明用Boehringer Mannheim隨機引物試劑盒標記。濾膜于55℃用2×SSC洗2遍。
兩個被命名為684.3和705.1的克隆，被鑒定為人αd，人CD11b，和人CD11c同源序列。兩個克隆均排列在人αd基因的3′區域，克隆684.3從堿基1871開始延伸至堿基3012，而克隆705.1從堿基1551開始延伸至殘基3367。
為了分離更復雜的包含5′區域的大鼠序列，采用與首輪篩選相同的方法，但采用從克隆A1160(見實施例17，見下)產生的小鼠探針再次篩選同一文庫。從第二輪篩選中選擇出單個的分離的噬斑，作為單克隆保存在LBM/瓊脂平板上。測序引物434FL和434FR(分別是SEQ IDNO34和35)被用于標準PCR方案以產生用于測序的DNA。
5′-TATAGACTGCTGGGTAGTCCCCAC-3′(SEQ ID NO34)5′-TGAAGATTGGGGGTAAATAACAGA-3′(SEQ ID NO35)按制造商方案使用Quick Spin Column(Qiagen)純化該PCR的DNA。
兩個克隆被命名為741.4和741.11，被鑒定為覆蓋克隆684.3和705.1。在SEQ ID NO36中給出了與人αd基因具有同源性的復合大鼠基因，在SEQ ID NO37中給出了預測的氨基酸序列。克隆大鼠αd的5′末端按制造商的方案，采用Clonetech大鼠脾RACE克隆試劑盒獲得了大鼠αd基因的5′cDNA片段。使用的基因特異寡核苷酸被稱為741.11#2R和741.2 # 1R(分別是SEQ ID NO59和58)。
5′-CCAAAGCTGGCTGCATCCTCTC-3′ (SEQ ID NO59)5′-GGCCTTGCAGCTGGACAATG-3′ (SEQ ID NO58)寡聚741.11#2R以相反的取向包含SEQ ID NO36的131-152位堿基，741.2# 1R亦以相反取向包含SEQ ID NO36的696-715位殘基。使用最3′的寡聚物741.2#1R進行首輪PCR。然后使用寡聚物741.11 # 2R和首輪反應產生的DNA進行第二輪PCR。在1％瓊脂糖凝膠上探測到了大約300個堿基的帶。
按制造商的說明，第二輪PCR產物連接到質粒pCRTAII(Invitrogen)。挑取白色(陽性)菌落并加到盛有100μl LBM的圓底96孔組織培養板的單個樣品孔中，其中，LBM含有1ml 50mg/ml的羧芐青霉素貯液和1μl M13 K07噬菌體培養物。混合物于37℃溫孵30分鐘至1小時。在最初的溫孵期之后，加入100μl LBM(含有1μl50mg/ml羧芐青霉素和1∶250稀釋度的10mg/ml卡那霉素貯液)，于37℃，繼續溫孵過夜。
使用無菌96孔金屬轉移吸頭，將來自96孔板的上清液轉移到4張Amersham Hybond尼龍濾膜上。用標準方法將濾膜變性，中和，和交聯，濾膜于50℃在2ml預雜交緩沖液(5×SSPE；5×Denhardts；1％SDS；50μg/ml變性鮭精DNA)中振蕩預雜交數小時。
寡聚探針741.11 # 1和741.11 # 1R(分別是SEQ ID NO56和57)分別在正向和反向包含堿基對86-105(SEQ ID NO36)如下標記。
5-CCTGTCATGGGTCTAACCTG-3′ (SEQ ID NO56)5′-AGGTTAGACCCATGACAGG-3′ (SEQ ID NO57)大約65ng溶于12ml dH2O的寡DNA加熱至65℃，2分鐘。3μl的10mCi/mlγ-32P-ATP與4μl 5×激酶緩沖液(Gibco)和1μl T4DNA激酶(Gibco)一起加入管中，混合物于37℃，溫孵30分。溫孵后，16μl的每一種標記的寡核苷酸探針被加至預雜交緩沖液和濾膜中，于42℃繼續雜交過夜。濾膜于室溫在5×SSPE，0.1％SDS洗滌3遍，每次洗滌5分鐘、放射自顯影6小時。擴增陽性克隆并按制造商說明用Magic Mini Prep kit(Promega)純化DNA。選擇克隆2F7用于測序，在重疊區，顯示了與克隆741.11 100％的同源性。在SEQ ID NO54中給出了完整的大鼠αd核酸序列，在SEQ ID NO55中給出了氨基酸序列。大鼠cDNA和氨基酸序列的表征先前未報道大鼠β2整聯蛋白中α亞基的核酸或氨基酸序列。然而與報道的人β2整聯蛋白α亞基相比，其序列比較提示分離的大鼠克隆及其氨基酸序列與αd核苷酸和氨基酸序列最密切相關。
在核酸水平，分離的大鼠cDNA克隆顯示了與人αdcDNA相比80％同一性，與人CD11b相比68％同一性，與人CD11c相比70％同一性，與鼠CD11b相比65％的同一性。沒有發現與人CD11a和小鼠CD11a相比明顯的同一性。
在氨基酸水平，由分離的cDNA編碼的大鼠多肽與人αd多肽相比具有70％同一性，與人CD11a相比有28％同一性，與人CD11b相比有58％同一性，與人CD11c相比有61％同一性；與小鼠CD11a相比有28％同一性；與小鼠CD11b相比有55％同一性。
實施例18嚙齒類αd特異抗體的產生和表征A.抗大鼠αdI結構域/人IgG4融合蛋白抗體考慮到人β2整聯蛋白I結構域被證明參與配體結合這一事實，推測大鼠αd蛋白亦是此種情況。因而大鼠αdI結構域的免疫特異性單克隆抗體可用于人疾病狀態的大鼠模型，其中αd結合參與了該種疾病。
寡聚“大鼠α-DI5”(SEQ ID NO87)和“大鼠α-ID3(SEQID NO88)從大鼠αd序列產生，分別對應于SEQ ID NO54的堿基對469-493和堿基對1101-1125(以相反取向)。該寡聚物用于標準PCR反應以產生含有跨越SEQ ID NO54的堿基對459-1125的I結構域的大鼠αdDNA片段。按制造商的說明，將PCR產物連接到載體pCRTAII(Invitrogen)中。選擇并擴增陽性克隆。按制造商的說明使用Qiagen(Chatwoth，GA)Midi Prep試劑盒純化DNA，以標準限制性酶切方案用XhoI和BglII酶切DNA，將一個600堿基對的帶凝膠純化，隨后連接到pDCS1/HuIgG4表達載體中。選擇并擴增陽性克隆，用Quiagen Maxi Prep Kit純化DNA。
COS細胞以半數匯合的量接種100mm培養皿于37℃在7％CO2生長過夜。細胞用5ml DMEM潤洗一次。向5ml DMEM，50μl DEAE-Dextran，2ml Chloroquine中，加入上述15μg大鼠αdI結構域/HuIgG4 DNA。混合物加到COS細胞中，于37℃溫孵3小時。棄去培養基加入含10％DMSO的5ml CMF-PBS、恰好1分鐘。細胞用DMEM溫和洗滌一次。加入含10％FBS的10ml DMEM，于37℃，7％CO2中持續溫孵過夜。次日，用新鮮培養基代替培養基持續溫孵另外3天，收集培養基，將新鮮培養基加入平板。3天之后，再次收集培養基棄去平板。重復以上步驟，直到收集到2升上清液。
如上收集的上清液上樣于Prosep-A柱(Bioprocessing Limited)如下純化蛋白質。
最初以15倍柱體積的Wash Buffer洗柱，其中含有35mM Tris和150mM NaCl，pH7.5。上清液以大約低于約每小時60倍柱體積的緩慢速度上樣。上柱之后，用15倍柱體積的Wash buffer，15倍柱體積的0.55M二乙醇胺pH8.5，15倍柱體積的50mM檸檬酸，pH5.0洗柱。用50mM檸檬酸，pH3.0洗脫蛋白質。用1.0M Tris，pH8.0中和蛋白質，并在無菌PBS中透析。
如實施例14中所述分析大鼠αd結構域蛋白。探測到的蛋白質以從人I結構域蛋白所觀察到的同樣方式遷移。B.大鼠αdI結構域/HuIgG4融合蛋白的單克隆抗體的產生用預先乳化到等體積弗氏完全佐劑(FCA)(Sigma)中的50μg純化大鼠αdI結構域/HuIgG4融合蛋白單獨免疫小鼠。在每只小鼠的背側和肋側的4個位點注射大約200μl抗原/佐劑制備物。兩周之后，注射預先乳化在等體積弗氏不完全佐劑(FIA)中的100μl大鼠αdI結構域/HuIgG4抗原而加強免疫。再過兩周之后，小鼠用在200μl PBS中的50μg抗原進行靜脈注射而加強免疫。
為評價免疫接種小鼠中的血清滴度，在第三次免疫接種之后10天對動物進行retro-orbital取血。讓血凝結，離心分離血清，血清用于生物素化(BIP)大鼠脾細胞免疫沉淀。來自每只小鼠的血清免疫沉淀預期是大鼠αd和大鼠CD18的蛋白帶。一只小鼠被選擇用于融合，并如上文中第三次加強免疫所述步驟進行第四次加強免疫。
如下描述，通過抗體俘獲而篩選雜交瘤上清液。于4℃用50μl以1∶5000稀釋于50mM碳酸鹽緩沖液，pH9.6中的羊抗小鼠IgA、IgG或IgM Corganon Takrikan/孔包被Immulon 4平板用3x含0.05％吐溫20的PBS(PBST)洗板，并加入50μl培養上清液37℃溫孵30分鐘，并如上述洗滌之后，加入50μl以1∶3500稀釋在PBST中的辣根過氧化物酶結合的羊抗小鼠IgG9(Fc)(Jackson Immuno Research，WestGrove，Pennsylvania)。加入含有溶于100mM檸檬酸鹽，pH4.5中的1mg/ml鄰苯二胺(Sigma)和0.1μl/ml 30％H2O2的100底物。5分鐘后加入50μl 15％H2SO4中止顏色反應。在Dynatech板讀數儀上讀出490nm的吸光率。
還用固定化大鼠αdI結構域/HuIgG4融合蛋白采用ELISA分析來自含有抗體的樣品孔的上清液。用HuIgG4抗體包被的平板進行的ELISA被用作針對IgG融合伙伴的反應性的對照。使用如下描述的技術，選擇陽性樣品孔用于用BIP對大鼠脾細胞溶胞物進一步篩選。C. 抗大鼠αdI結構域/HuIg4融合蛋白的多克隆血清的產生在用100μg純化大鼠αdI結構域/HuIg4融合蛋白(在完全弗氏佐劑中)免疫接種之前，將兩只兔預先采血。每三周以配制于不完全弗氏佐劑的同樣劑量重復注射。注射三次之后，測試兔血樣，將收集的兔血清用于大鼠脾細胞溶胞物的標準免疫沉淀。已經確信，來自于兩只兔的血清都與大鼠αd免疫反應。用100μg IFA中的抗原再次加強免疫兔，收集的血清通過免疫沉淀分析其與大鼠αd的增加的免疫反應性。將大鼠進行最后一次加強免疫，10天之后，采血并收集血清。大鼠αd組織學產生用于抗大鼠αd“I”結構域的大鼠多克隆血清被用于用實施例16所述標準技術免疫組織化學染色大鼠組織切片。在冷凍的和石蠟包埋的大鼠脾切片上探測到的染色圖樣與用抗人αd抗體染色所觀察的結果基本相同，染色的單個細胞遍布于紅髓質。染色圖樣不同于用抗大鼠CD11a，CD11b和CD18的單克隆抗體所觀察到的。另外，在胸腺中，在皮質各處的單個細胞上，可見陽性染色圖樣。用兔免疫前血清染色時，這些組織無一給出信號。D.抗體特異性分析通過吸入CO2而處死大鼠，用標準外科手術方法取脾。用3cc注射針管輕推脾通過篩網收集懸于20ml RPMI的脾細胞。細胞收集到50ml尖底管中，在合適的緩沖液中洗滌。
細胞在冷D-PBS中洗三次，并以108至109細胞的密度懸浮于40mlPBS中。向細胞懸液加入4mg NHS-Biotin(Pierce)，并使反應在室溫下準確進行15分鐘。沉淀細胞并在冷D-PBS中洗3遍。
細胞以108細胞/ml的密度重懸于冷溶胞緩沖液(1％NP40；50mMTris-HCl，pH8.0；50mM NaCl；2mM CaCl2；2mM MgCl2；在加入細胞之前加入的pepstain leupeptine，和aprotinin 1∶100稀釋液；在加入細胞之前加入的0.0001g PMSF晶體)。溶胞物劇烈振搖大約30秒，于室溫下溫孵5分鐘，再冰浴15分鐘。溶胞物于10,000×g離心10分鐘以沉淀不溶物質。將上清收集于一新管中貯于4℃至-20℃之間。
通過與200μl蛋白質A瓊脂糖砂漿(slurry)(Zymed)于4℃溫孵過夜而預澄清1ml細胞溶胞物。預澄清的溶胞物從50μl/管分裝于Enppendarf管中，以用于每一待測的抗體。25μl多克隆血清或100至500μl單克隆抗體上清液加入預澄清的溶胞物中，形成的混合物于4℃振蕩保溫2小時。然后加入100μl結合在蛋白質A瓊脂糖珠上的兔抗小鼠IgG(Jackson)PBS砂漿于室溫持續振蕩溫孵30分鐘。溫和離心以沉淀小珠，用冷Wash Buffer(10mM HEPES；0.2M NaCl；1％Triton X-100)洗三遍。吸走上清液，加入含有10％β-巰基乙醇的20μl 2×SDS樣品緩沖液。樣品在水浴中煮沸2分鐘，將樣品上樣于5％SDS PAGE膠。分離之后，蛋白質必在穩定電流之下，過夜轉移到硝酸纖維素膜上。硝酸纖維素膜用TBS-T中的3％BSA于室溫下封閉1小時，去除封閉緩沖液。加入在0.1％BSA TBS-T中的1∶6000稀釋度的鏈霉抗生物素蛋白-HRP結合物(Jackson)，于室溫持續保溫30分鐘，濾膜用TBS-1洗滌3遍，每次15分鐘，按制造商提供的方案用Amersham’s ECL試劑盒放射自顯影。E.抗全長大鼠αd蛋白質的單克隆抗體的產生大鼠αd蛋白質的純化從大鼠脾細胞中純化大鼠αd以制備免疫原用于產生抗大鼠αd單克隆抗體。收集來自大約50只12-20周齡的雌性Lewis大鼠，迫使其通過細篩網而從組織中制備單細胞懸液。通過在含有150mM NH4Cl，10mM KHCO3，0.1mM EDTA，pH 7.4的緩沖液中裂解而除去紅細胞，存留的白細胞用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次。離心沉淀脾細胞，在含有50mM Tris，150mM NaCl，2mM CaCl2，2mM MgCl2，10mM PMSF，leupeptin，胃蛋白酶抑制劑和Triton X-100的緩沖液中裂解。脾細胞的溶胞在冰上進行30分鐘，每5×108脾細胞加入1ml溶胞緩沖液。不可溶物質離心除去。
如下通過免疫沉淀從脾細胞溶胞物中除去CD11a，CD11b和CD11c。750μl體積的蛋白質A-瓊脂糖砂漿與2mg兔抗小鼠免疫球蛋白于4℃溫孵30分鐘。用溶胞緩沖液將兔抗小鼠-蛋白質A-瓊脂糖洗滌3遍，懸浮于1.5ml溶胞緩沖液的終體積中。大約200μg每一種大鼠β2整聯蛋白特異性單克隆抗體，515F(特異于大鼠CD11a)，OX42(特異于大鼠CD11b)和100g(特異于大鼠CD11a)各自加入到50ml大鼠脾溶胞物中。于4℃溫孵30分鐘后，向脾溶胞物加入500ml兔抗小鼠蛋白質A-瓊脂糖，并于4℃end-over-end振蕩30分鐘而混合。溶胞物于2500×g離心10分鐘以沉淀與兔抗小鼠-蛋白質A-瓊脂糖結合CD11a，CD11b和CD11c，上清液轉移到清潔的50ml離心管中。用抗體515F，OX-42和100g重復免疫沉淀兩次以保證完全除去CD11a，CD11b和CD11c。
使用親和純化分離存留于溶胞物中的β2整聯蛋白。向溶胞物加入250μl結合在CNBr-瓊脂糖上的抗大鼠CD18單克隆抗體20C5B砂漿，并于4℃end-over-end振蕩30分鐘。于2500×g離心10分鐘沉淀抗體/抗原復合物，在貯存于4℃前，用溶胞緩沖液洗滌沉淀3次。Armenian倉鼠免疫接種6至8周齡的Armenian倉鼠用大約50μg乳化于完全弗氏佐劑的重組蛋白質起始免疫，其中重組蛋白質由融合到人IgG4重鏈的大鼠αdI結構域組成。初次免疫接種之后，在14、33，95天用乳化在不完全弗氏佐劑的大鼠αdI結構域/HuIgG4繼發免疫接種。兩個不同的被稱為197和199的融合隨后進行。
在融合197前4天(306天)，將一只倉鼠給藥由脾細胞純化的大鼠αd蛋白質和用大鼠αd轉染的CHO細胞的組合物。在用純化的大鼠αd蛋白質和αd轉染CHO細胞融合之前3天(307天)，給予融合加強免疫。大鼠αd轉染CHO細胞如下制備。
編碼全長大鼠αd蛋白質的基因片段被插入到pDC1載體并與人CD18pRC構建物一起通過電穿孔轉染CHO細胞。轉染細胞在次黃嘌呤的出現下生長以選擇用pRC構建物成功轉染的細胞，在g418出現下生長以選擇用pDC1構建物成功轉染的細胞。三周之后，用大鼠αd特異性兔多克隆抗血清染色細胞，并用FACS分類。選擇小百分比的表達表面αd最高水平的細胞(大約總數的3％)并且進一步擴增。重復數次FACS選擇，以提供具有高水平αd表面表達的細胞群。
使用大鼠αd特異性多克隆血清和人CD18特異性單克隆抗體TS1.18.1通過流式細胞計量術表征αd轉染細胞。結合表明轉染的CHO細胞表達了高水平的大鼠αd和人CD18。
最后，用免疫沉淀評價了細胞中αd和CD18的表達。發現大鼠αd特異性兔多克隆血清免疫沉淀兩種分子量不同的蛋白質高分子量蛋白是170kD，低分子量蛋白是95kD。這些發現同在轉染CHO細胞表面上大鼠αd/人CD18異二聚體復合物的表達相一致。
在融合的當天，取脾臟，并且通過浸沒在補充了2mM L谷氨酸，1mM丙酮酸100單位/ml青霉素，和100μg/ml鏈霉素的無血清RPMI(Gibco，Canada)中，將組織在兩片玻璃顯微載玻片的冷凍末端之間研磨而形成單細胞懸浮液，細胞懸液通過一個無菌70目Nitex細胞滲濾器(Becton Dickinson Parsippany New Jersey)，濾液于200g離心5分鐘洗兩遍。生成的沉淀重懸于20ml無血清RPMI。以同樣方式制備來自于三只初次進行實驗的Balb/c小鼠的胸腺細胞，于對數期保藏在補充了10％Fetalclone血清(FBS)(Hyclone Laboratories，Inc，Logan，Utah)的RPMI中，在融合前保藏了3天的NS-1骨髓病細胞，于200g離心5分鐘而沉淀，如前述洗滌兩次。大約1.15×108脾細胞與5.8×107NS-1細胞合并，沉淀。并通過抽吸棄去上清。敲擊離心管，使細胞沉淀脫離原有的位置，在1分鐘的過程中，振搖加入2ml于75mM Hepes(pH8.0，37℃) (Boehringer Mannheim)中的50％PEG 1500，在隨后的7分鐘內加入另外14ml不含血清的RPMI，然后隨即加入14mlRPMI。生成的混合物于200g離心10分鐘并棄去上清。沉淀重懸于含有15％FBS，100mM次黃嘌呤鈉，0.4mM氨基蝶呤，16mM胸苷(HAT)(Gibco)，25單位/ml IL-6(Boehringer Mannheim)和1.5×106胸腺細胞/ml的200ml RPMI，以200μl/孔分裝到10只96孔平底組織培養板(Corning United Kingdom)。在融合后4，5，6和7天用18G針頭(Becton Dickinson)從每個孔中吸取100μl，然后加入除了含有10單位/ml IL-6和缺乏胸腺細胞外，與上述相同的培養基，加入量為100μl/孔，以飼養細胞。
在第10天，用流式細胞計量術就其對于大鼠αd/人CD18轉染CHO細胞的反應性篩選來自融合樣品孔的上清液。大約5×105大鼠αd轉染CHO細胞懸浮于50μl含有2.0％FBS和0.05％疊氮鈉的RPMI中，并加到盛在96孔圓底板的大約100μl雜交瘤培養物上清液中。染色的陽性對照包括兔抗αd多克隆血清和TS1/18(抗人CD18)。細胞冰浴30分鐘，在FACS緩沖液(RPMI，2.0FBS，0.05％疊氮鈉)中洗3次，并與以1∶200最終稀釋度稀釋于FACS緩沖液中的FITC結合的羊抗倉鼠抗體(Jackson Immuno Research Labs)冰浴30分鐘。細胞用FACS緩沖液洗3次并重懸于200ml FACS緩沖液。用Becton DickinsonFACsan分析儀分析樣品，為保證陽性克隆樣品孔是大鼠αd特異性的，該篩選用非轉染CHO細胞重復。克隆符合與大鼠αdCH轉染子但不與未轉染CHO細胞反應的標準的樣品孔。
首輪篩選之后，來自于陽性樣品孔的細胞通過在RPMI，15％FBS100mM次黃嘌呤鈉鹽，16mM胸腺嘧啶，和10單位IL-6/ml中最初雙倍稀釋，然后有限稀釋而克隆。在有限稀釋步驟中，顯示出生長的樣品孔的百分比被確定，使用泊松分布分析預測克隆性(clonality)。1012天之后，用FACS分析顯示生長的樣品孔。最終克隆之后，陽性樣品孔在含有11％FBS的RPMI中擴增。克隆產生了確定是這些指標陽性的培養物，從此擴增了四個獨立的亞克隆，命名為197A-1，197A-2，197A-3和197A-4。
融合199之前，第二只倉鼠在307天用2.3×106大鼠αd轉染CHO細胞加強免疫。在融合之前4天(334天)和融合之前3天(335天)給予兩次最終免疫接種。334天的加強免疫由腹膜內注射2×106大鼠αd轉染CHO細胞和200μl純化的結合到Sepharose(上面已敘述)上的大鼠αd組成。335天加強免疫由腹膜內給藥5×106大鼠αd轉染CHO細胞組成。融合199的融合和篩選步驟與融合197相同。鑒定并克隆了三株雜交瘤，稱為199A，199H，199M，其上清液與大鼠αd有反應性。雜交瘤199M于1996年3月1日保藏于美國典型培養物保藏中心12301Parklawn Drive，Rockville，Maryland 20852，保藏號為HB-12058。大鼠αd單克隆抗體的表征為表征抗大鼠αd抗體，如實施例18第4部分制備生物素標記脾溶胞物。在用于免疫沉淀前預澄清溶胞物。最初，將50μg/ml正常鼠免疫球蛋白加入溶胞物，于4℃形成的溶液用end-over-end振蕩30分鐘。加入用兔抗小鼠免疫球蛋白包被的75μl蛋白質A-瓊脂糖砂漿，繼續end-over-end振蕩30分鐘。在臺式離心機上，將兔抗小鼠包被的蛋白質A小珠于15,000rpm，于4℃離心5分鐘而沉淀，收集上清液，棄去沉淀物。
就每種克隆的雜交瘤而言，大約300μl上清液被置于Eppendorf小離心管中，向其加入30μl 10％Triton X-100，30μl 100X胃蛋白酶抑制劑，leupeptin和aprotinin貯液，100μg PMSF晶體，和50μl預澄清的生物素化大鼠脾溶胞物。樣品溫和振蕩于4℃，置于end-overend rotator上3分鐘。通過向50μl大鼠脾溶胞物加入10mg/ml兔抗大鼠αd特異性多克隆抗體而制備對照樣品。
溫孵30分鐘之后，向每一樣品加入75μl在PBS中的蛋白質A-瓊脂糖小珠砂漿，于4℃end-over-end振蕩30分鐘。于4℃，在臺式離心機上離心5分鐘以沉淀蛋白質A偶聯小珠并收集上清液。沉淀小珠順次以1ml去垢劑系列洗滌緩沖液1含有10mM Tris，400mMNaCl，1.0％Triton X-100，pH8.0；緩沖液2含有10mM Tris，400mM NaCl，0.5％Triton X-100，pH8.0；緩沖液3含有10mMTris，400mM NaCl，1.0％Triton X-100，pH8.0 0.1％脫氧膽酸，緩沖液4含有10mM Tris，400mM NaCl，0.5M LiCl2，pH8.0，用洗滌緩沖液1進行最終洗滌。每次洗滌之間溫和振蕩珠子，用臺式離心機沉淀。用轉移吸管移去上清，末次洗滌之后，所有留存的緩沖液用Hamilton注射器從小珠上移去。向每一份沉淀加入50μl SDS樣品緩沖液，其中含有溴酚藍和派洛寧Y染料和終濃度是10％的β巰基乙醇。混合物劇烈振蕩1-2分鐘，于室溫下保溫5-10分鐘。樣品于4℃，在臺式離心機于15,000rpm離心5分鐘，收集釋放出的蛋白質，轉移到新管中。每一樣品等份于水浴中煮沸4分鐘，然后上樣于7.5％SDS-PAGE膠。PAGE分離之后，將蛋白質于200mAmp轉移到硝酸纖維素膜上，濾膜在3.0％BSA/TBS-T溶液中于4℃封閉過夜。向每一濾膜加入含有鏈霉抗生物素蛋白-OPD的1∶6000稀釋液的0.1％BSA-TBS-T溶液，繼續于室溫溫孵1小時。濾膜在TBS0-T中洗滌5次，每次10分鐘。按制造商說明用Amersham’s ECL試劑盒顯色。
發現克隆199M免疫沉淀異二聚體蛋白。較大蛋白亞基的分子量大約是170-175kD，與被兔抗大鼠αd多克隆對照免疫沉淀的蛋白的大小一致。第二個蛋白質亦被沉淀，其分子量大約是95kD與CD18的分子量一致。
實施例19小鼠cDNA克隆的分離試圖分離小鼠αd同系物使用兩種PCR產生探針進行種間雜交來自人克隆19A2(SEQ IDNO1)的對應于522至2047堿基的1.5kb片段，和對應于人克隆19A2(SEQ ID NO1)的1900至2900堿基的1.0kb大鼠片段。使用分別在SEQ ID NO38和39給出的稱為ATM-2和9-10.1的引物對。經PCR反應產生人探針，使用分別在SEQ ID NO34和35中給出的引物對434L和434R產生鼠探針。樣品于94℃保溫4分鐘，經30個循環的溫度步驟序列94℃，1分鐘；50℃2分鐘；72℃，4分鐘。
5′-GTCCAAGCTGTCATGGGCCAG-3′ (SEQ ID NO38)5′-GTCCAGCAGACTGAAGAGCACGG-3′ (SEQ ID NO39)按制造商的說明，使用Qiagen Qaick SPin試劑盒純化PCR產物，按制造商的說明，使用Boehrinager Mannheim隨機引物試劑盒用200μCi〔32P〕-dCTP標記大約180ng DNA。按制造商說明，用Centri-sepSpm Column(Princeton Separations，Adelphia，NJ)去除未參入的同位素。在使用前，探針用0.2N NaOH變性，用0.4M Tris-HCl，pH8.0中和。
一個克隆在λZAPII(Stratagene)的小鼠胸腺寡聚dT-引物cDNA文庫以每15em平板30,000噬斑平板接種。在含有30％甲酰胺的預雜交溶液(8ml/拓片)中，在硝酸纖維素濾膜(Schleicher和Schuell，Keene，NH)上的噬斑拓片于50℃振蕩1小時，標記的人和大鼠探針被加至預雜交溶液中，繼續于50℃溫孵過夜。濾膜在室溫下于2×SSC/0.1％SDS中洗2次，37℃于2×SSC/0.1％SDS洗一次。42℃于2×SSC/0.1％SDS洗一次。借助于增感屏、于-80℃濾膜曝光Kodak X-OmatAR軟片27小時。
在一式兩份拓片上給出陽性信號的4個噬斑在含有鎂鹽(LBM)/羧芐青霉素(100mg/ml)的LB培養基上重新劃線。用Hybond濾膜(Amersham)拓取噬斑，如首輪篩選進行探測，借助于增感屏，于-80℃曝光Kodak X-Omat AR軟片24小時。
給出陽性信號的12個噬斑轉移到含有10mM Tris-HCl和1mMMgCl2的低Mg++噬菌體稀釋液中。使用T3和T7引物(SEQ ID NO13和14)和下列反應條件進行PCR擴增而確定插入大小，樣品于94℃溫孵4分鐘，并經溫度步驟序列的30個循環94℃，15秒，50℃，30秒，72℃，1分鐘。
6個樣品產生了不同的條帶，其大小從300堿基到1kb不等。通過與助噬菌體共感染而釋放噬菌體質粒嵌合體，重新環化產生Bluescript SK(Stratagene)。生成的菌落在LBM/羧芐青霉素(100mg/ml)上培養過夜。按制造商的說明，用Promaga .Wizard小量制備試劑盒(Madison，WI)分離DNA。純化DNA的EcoRI限制性分析證實了用PCR探測的分子量。插入DNA用分別在SEQ ID NO40和41中給出的M13和M13反向1引物測序。
5′-TGTAAAACGACGGCCAGT-3′ (SEQ ID NO40)5′-GGAAACAGCTATGACCATG-3′(SEQ ID NO41)如實施例4所述進行測序。
6個克隆中，只有2個被稱為10.3.1和10.5-2的提供了序列信息，是相同的600bp片段。該600bp序列與人αd的相應區有68％的一致性，與人CD11a有40％一致性，與人CD11c有58％的一致性，與小鼠CD11b有54％一致性。該600bp片段被用于分離一個更完整的編碼推測的小鼠αd同系物的cDNA。
克隆在λZapII(Stratagene)上的小鼠脾細胞cDNA文庫(寡聚dT-和隨機引物)以2.5×104噬菌體/15cm LBM平板進行平板接種。噬斑拓印在Hybond尼龍轉移膜上(Amersham)，用0.5M NaOH/1.5MNaCl變性，用0.5M Tris Base/1.5M NaCl/11.6HCl中和，在2×SSC中洗滌。經紫外輻射將DNA交聯于濾膜上。
采用如上描述預先標記的10.3-1和10.5-2探針篩選大約500,000個噬斑。探針加入預雜交液中，于50℃溫孵過夜。濾膜于室溫下在2×SSC/0.1％SDS中洗兩遍，于37℃在2×SSC/0.1％SDS中洗一遍，于42℃在2×SSC/0.1％SDS中洗一遍。借助于增感屏，濾膜于-80℃曝光Kodek X-Omat AR軟片24小時。在一式兩份的拓片上給出陽性信號的14個噬斑經受第二輪篩選，第二輪篩選除下述的另外的最終高嚴格度洗滌之外，其他與第一輪篩選一致于50℃，在2×SSC/0.1％SDS，于50℃，在0.5×SSC/0.1％SDS，和于55℃，在0.2×SSC/0.1％SDS中洗滌。借助于增感屏，濾膜于-80℃曝光Kodak X-Omat AR軟片13小時。
18個陽性噬斑轉移到低Mg++噬菌體稀釋度，通過如上所述PCR擴增確定插入片段的大小。7個樣品給出了單一條帶。其大小在600bp至4kb之間變動。純化DNA的EcoRI酶切分析證實了PCR觀察的大小，用引物M13和M13反向1(分別是SEQ ID NO40和41)測序DNA。
克隆B3000含有4kb的插入片段，其對應于人αd19A2的5′末端的200殘基下游區，且包括3′非翻譯區的553個堿基。克隆B3800顯示了與人αd對應區的77％的一致性，與人CD11a對應區的44％的一致性，與人CD11c對應區的59％的一致性，與小鼠CD11b對應區的51％的一致性。第二個克隆A1160是1.2kb的插入片段，其排列在人αd編碼區的5′末端，大約起始蛋氨酸下游的12個核苷酸處。克隆A1160顯示了與αd對應區的75％的一致性，與人CD11a對應區的46％的一致性，與人CD11c對應區的62％的一致性，與小鼠CD11b對應區的66％的一致性，克隆A1160是一更靠近人克隆19A2的5′末端的片段，長度為1160個堿基，與克隆B3800共享開始于堿基205延續至堿基1134的重疊區。克隆A1160具有一個110堿基插入(A1160的704-814片段)，其不出現在克隆B3800的重疊區。該插入發生在可能的外顯子一內含子邊界〔Fleming等，J.Immunol，150480-490(1993)〕在隨后的克隆A1160和B3800連接之前去除。推測的小鼠αd克隆的5′cDNA末端的快速擴增采用RACE PCR〔Frohman“RACE快速擴增cDNA末端”在PCR方案方法及應用指南Innis等人(編)pp28-38，學術出版社紐約(1990)〕以獲得推測小鼠αd克隆的丟失5′序列，包括5′非翻譯序列和起始蛋氨酸。按制造商的方案，使用小鼠脾RACE-Ready試劑盒(Clontech，Palo Alto，CA)。設計了兩個反義的，基因特異的引物，A1160 RACE1-初始和A1160 RACE2-嵌套(SEQ ID NO42和43)以進行初始和嵌套PCR。
5′AGTTACGGATCCGGCACCATGAC--CTTCGGCACTGTGATCCTCCTGTGTG-3′ (SEQ ID NO47)5′-GCTGGACGATGGCATCCAC-3′ (SEQ ID NO48)引物SEQ ID NO42和43分別對應于5′末端的開始于302和247堿基區域。采用5′錨著引物(SEQ ID NO44)和試劑盒中供給的小鼠脾cDNA如上述步驟進行PCR反應。
5′-GTAGAGTTACGGATCCGGCACCAT-3′ (SEQ ID NO49)PCR產物電泳顯示了大小大約是280bp的條帶，按制造商的方案使用TA克隆試劑盒(Invitrogen)將該條帶亞克隆。培養生成的10個菌落，分離并測序DNA。該方法鑒定了另外的5′序列的60個堿基，其對應于SEQID NO45的1至60位堿基。
小鼠cDNA和預測氨基酸序列的表征在SEQ ID NO45中給出了編碼推測的人αd同系物的小鼠cDNA的復合序列。雖然人與小鼠克隆的外結構域之間同源性很高，胞質結構域之間的同源性只有30％，觀察到的這個變化可能表明人和小鼠蛋白質之間C末端功能的不同。或者是，胞質域的變化由剪接的變化引起，或者表明一個另外的β2整聯蛋白基因的存在。
在氨基酸水平上，小鼠cDNA預測一個蛋白質(SEQ ID NO46)與小鼠CD11a有28％一致性；與小鼠CD11b有53％一致性，與人CD11a有28％一致性，與人CD11b有55％一致性，與人CD11c有59％一致性，與人αd有70％一致性。人αd的胞質域和推測小鼠同系物的氨基酸序列的比較指明，區域只有同樣長度，但具有不同的一級結構。這些區域的相似序列長度提示是種間變異而不是剪接變體形式。當與實施例10中(上文)預測的大鼠多肽相比時，小鼠和大鼠胞質域顯示出大于60％的同源性。
實施例20用于序列鑒定的小鼠αdcDNA克隆的分離為了鑒定實施例19中所述的小鼠αd的核酸和氨基酸序列，分離了另外的小鼠序列用于確證。
使用了克隆在λZAPII中的小鼠脾隨機引物文庫和寡聚dT-引物cDNA文庫(Strategene)，通過用2個同源αd探針(3′和5′)雜交而分離小鼠cDNA。文庫以5×105噬菌體/15cm LBM平板進行平板接種噬斑拓印于Hybond尼龍膜(Amersham)，將膜變性(0.5M NaOH/1.5MNaCl)，中和(0.5M Tris Base/1.5M NaCl/11.6M HCl)和洗滌(2×SSC鹽溶液)。DNA經紫外輻射交聯。
使用如下描述的引物在下述條件下進行的PCR反應中產生探針。樣品于94℃保持4分鐘，然后經溫度步驟順序的30個循環(94℃，15秒；50℃，30秒；72℃，1分鐘，在Perkin-Elmer 9600熱循環儀中)。
3′探針大約900堿基長，跨越核苷酸2752至3651(在SEQ ID NO1)(5′-3′)區域，用分別顯示于SEQ ID NO69和74的引物11.b-1/2FOR11和11.b-1/2REV2產生。該探針用于第一套拓片。
5′探針大約800堿基長，跨越核苷酸149至946(在SEQ ID NO1)(5′-3′)區域，用分別顯示于SEQ ID NO50和85的引物11.b-1/2FOR1和11.a-1/1REV1產生。該探針用于第二套拓片。
在第三套拓片中，上述的兩個探針共同用于同一平板。
使用上述兩個探針大約篩選了500,000個噬斑，探針用與實施例17之所述同樣的方法標記。標記的探針加入含有45％甲酰胺的預雜交溶液中，于50℃溫孵過夜。濾膜于室溫(22℃)在2×SSC/0.1％SDS中洗2次。于50℃在2×SSC/0.1％SDS中最終洗滌。借助于增感屏，于-80℃在Kodak X-Omat AR軟片上放射自顯影19小時。
在至少一式兩份的拓片上給出陽性信號的13個噬斑經受第二輪篩選，如首輪篩選而進行，除了3′和5′探針均用于雜交，且引入另外的最終洗滌采用2×SSC/0.1％SDS于65℃進行。如上所述進行放射自顯影2.5小時。
給出陽性信號的13個噬斑(稱為MS2P1至MS2P13)被轉移到低Mg++噬菌體稀釋液。采用T3和T7引物用PCR擴增(Pekin-Elmer9600熱循環儀)確定插入片段的大小，在上述的同樣條件下，該片段被退火到在ZAPII(先前已描述其序列中的Bluescript噬菌體質粒嵌合體上。條帶大小在500至4kb之間變動。分離并制備噬菌體質粒嵌合體，用M13和M13反向.1引物(分別是SEQ ID NO40和41)測序。測序了13個克隆中的5個；MS2P-3，MS2P-6，MS2P-9，MS2P-這2，MS2P-13，它們共同呈遞了一個區域，大約從5′末端的200位堿基開始，到3′末端大約越過第一個終止密碼子300個堿基結束。
首先使用M13和M13反向.1引物(SEQ ID NO40和41)如實施例14所述進行自動測序，以測序每一克隆的末端以及確定其相對于構建物#17(SEQ ID NO45)的位置。然后就具體區域，每一克隆使用合適的引物(見下表)完全測序。將序列編輯，排列并與先前分離的小鼠αd序列(構建物#17，SEQ ID NO45)相比較。11.b-1/2FOR1 5′-GCAGCCAGCTTCGGACAGAC-3′(SEQ ID NO50)11.a-1/1FOP2 5′-CCGCCTGCCACTGGCGTGTGC-3′ (SEQ ID NO60)11.a-1/1FOR3 5′-CCCAGATGAAGGACTTCGTCAA-3′ (SEQ ID NO61)11.b-1/2FOR4 5 ′-GCTGGGATCATTCGCTATGC-3′ (SEQ ID NO62)11.b-1/2FOP5 5 ′-CAATGGATGGACCAGTTCTGG-3′ (SEQ ID NO63)11.b-1/2FOR6 5′-CAGATCGGCTCCTACTTTGG-3′(SEQ ID NO64)11.b-1/2FOR7 5′-CATGGAGCCTCGAGACAGG-3′ (SEQ ID NO65)11.b-1/2FOR8 5′-CCACTGTCCTCGAAGCTGGAG-3′ (SEQ ID NO66)11.b-1/2FOR9 5 ′-CTTCGTCCTGTGCTGGCTGTGGGCTC-3(SEQ ID NO67)11.b-1/2FOR10 5′-CGCCTGGCATGTGAGGCTGAG-3′ (SEQ ID NO68)11.b-1/2FOR11 5′-CCGTGATCAGTAGGCAGGAAG-3′ (SEQ ID NO69)11.b-1/2FOR12 5′-GTCACAGAGGGAACCTCC-3′ (SEQ ID NO70)11.b-1/2FOR13 5′-GCTCCTGAGTGAGGCTGAAATCA-3′ (SEQ ID NO71)11.b-1/2FOR14 5′-GAGATGCTGGATCTACCATCTGC-3′ (SEQ ID NO72)11.b-1/2FOR15 5′-CTGAGCTGGGAGATTTTTATGG-3′ (SEQ ID NO73)11.b-1/2REV2 5′-GTGGATCAGCACTGAAATCTG-3′ (SEQ ID NO74)11.b-1/2REV3 5′-CGTTTGAAGAAGCCAAGCTTG-3′ (SEQ ID NO75)11.b-1/2REV4 5′-CACAGCGGAGGTGCAGGCAG-3′(SEQ ID NO76)11.b-1/2REV5 5′-CTCACTGCTTGCGCTGGC-3′ (SEQ ID NO77)11.b-1/2REV6 5′-CGGTAAGATAGCTCTGCTGG-3 ′ (SEQ ID NO78)11.b-1/2REV7 5′-GAGCCCACAGCCAGCACAGG-3′(SEQ ID NO79)11.b-1/2REV8 5′-GATCCAACGCCAGATCATACC-3′ (SEQ ID NO80)11.b-1/2REV9 5′-CACGGCCAGGTCCACCAGGC-3′(SEQ ID NO81)11.b-1/2REV10 5′-CACGTCCCCTAGCACTGTCAG-3′ (SEQ ID NO82)11.b-1/2REV11 5′-CCATGTCCACAGAACAGAGAG-3′ (SEQ ID NO51)11.b-1/2REV12 5′-TTGACGAAGTCCTTCATCTGGG-3′ (SEQ ID NO83)11.b-1/2REV13 5′-GAACTGCAAGCTGGAGCCCAG-3′ (SEQ ID NO84)11.a-1/1REV1 5′-CTGGATGCTGCGAAGTGCTAC-3′ (SEQ ID NO85)11.a-1/1REV2 5′-GCCTTGGAGCTGGACGATGGC-3′ (SEQ ID NO86)
新序列的排列表明在構建物#17中開始于2308位核苷酸的18個堿基的缺失，該缺失不引起閱讀框的移動。發現該缺失發生于包括該區的50％大鼠克隆中，但在大鼠或人αd克隆中未檢測到。該18個堿基的缺失被12個堿基的回文序列所表征AAGCAGGAGCTCCTGTGT(SEQID NO91)在核酸序列中的這種倒轉重復是自身互補的，可能形成一個突出的環，在反轉錄時引起酶切。包括附加的18個堿基的小鼠αd序列在SEQ ID NO52中給出，推導的氨基酸序列在SEQ ID NO53中給出。
實施例21小鼠原位雜交確定小鼠αd的組織分布，以提供與實施例6描述的人αd的組織分布的比較。
從DNA模板制備單鏈200bp mRNA探針，對應于鼠cDNA的胞質尾端區域的3460至3707位核苷酸，通過例外RNA轉錄參入35S-UTP(Amersham)。
完整小鼠胚(在受精后11-18天獲取)和各種小鼠組織，包括脾、腎、肝、小腸和胸腺，均用放射性標記單鏈mRNA探針進行原位雜交。
組織切6μm厚的切片，附著到Vectabond(Vector Laboratories，Inc．Burlingame，CA)包被的玻片上，貯于-70℃。用前，玻片于-70℃中取出，置于50℃5分鐘。切片于4℃在4％聚甲醛中固定20分鐘。于4℃于每一濃度用增加的乙醇梯度(70-95-100％)脫水，1分鐘，于室溫下空氣干燥。切片于70℃在70％甲酰胺/2×SSC中變性2分鐘，在2×SSC中潤洗2遍，用上述乙醇梯度脫水，空氣干燥30分鐘。雜交在一含有35S-標記探針(劑量為6×105cpm/切片)，和焦碳酸二乙酯(DEPC)處理水的，其中終濃度是50％甲酰胺，0.3M NaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5，10％葡聚糖硫酸鹽，1×Denhardt氏溶液，100mM二硫蘇糖醇(DTT)和5mM EDTA的溶液中于55℃進行過夜(12-16hr)。雜交后，切片于室溫下在4×SSC/10mM·DTT中洗滌1小時，于60℃在50％甲酰胺/2×SSC/10mM DTT中洗滌40分鐘。于室溫在2×SSC中洗滌30分鐘。于室溫在0.1×SSC中洗滌30分鐘。切片脫水，空氣干燥2小時，用Kodak NTB2照相乳膜包覆，空氣干燥2小時，顯影(完全黑暗中于4℃貯存后)，用蘇木精/曙紅復染。
脾組織主要在紅髓質顯示出強烈的信號。該圖樣與在脾中，組織巨噬細胞分布圖樣相一致，但不排除其他細胞類型。
實施例22小鼠表達構建物的產生為構建包括展現了與人αd同源性的小鼠cDNA序列的表達質粒，連接來自于克隆A1160和B3800的插入片段。然而在連接之前，包括一個起始蛋氨酸的5′引導序列被加到克隆A1160上。設計了一個被稱為“5′PCR引導”(SEQ ID NO47)的引物，它含有(1)在1-6位的相同的非特異性堿基，以用于酶切；(2)7-12位的BamHI位點(SEQ ID NO47中下劃線的)以便利亞克隆到表達載體上；(3)從13-18位的共有Kozak序列，(4)包括起始蛋氨酸密碼子(SEQ IDNO47中大寫的)的信號序列，和(5)特異性重疊了克隆A1160 5′序列的另外3′個堿基，以允許退火。第二個引物被稱為“3′末端片段”(SEQ ID NO48)，與“5′PCT引物”共同使用以從克隆A1160中擴增插入片段。
5′-GGACATGTTCACTGCCTCTAGG-3′ (SEQ ID NO42)5′-GGCGGACAGTCAGACGACTGTCCTG-3′(SEQ ID NO43)生成的PCR產物不能被BamHI酶切，提示在限制性位點之前沒有足夠數目的堿基，妨礙了酶的識別。增加5′引物(SEQ ID NO47)上BamHI位點之前“尾”序列的長度，在第一輪PCR的擴增產物上重復PCR。設計了一個5′引物，被稱為mAd.5′.2(SEQ ID NO49)，在1-4位有附加的非特異性堿基，還有附加的20個堿基，其特異性重疊了先前用作“5′PCR引導序列”引物序列。
5′-CTGGTTCGGCCCACCTCTGAAGGTTCCAGAATCGATAG-3′(SQ ID NO44)引物“mAD.5′.2”和“3′末端片段”共同用于PCR，來自于首次擴增的產物作模板。按制造商的說明，生成的第二輪PCR產物亞克隆到質粒pCRtmII(Invitrogene)中，并轉化到感受態One shet細胞中(Invitrogene)。使用BamHI和EcoRI進行限制性酶分析以鑒定含有PCR產物的一個克隆，并測序。證實了序列之后，用BamHI和EcoRI酶切插入片段，并經凝膠純化。
通過EcoRI和NotI酶切而分離來自克隆B3800的插入片段，并凝膠純化。加入到包含擴增的A1160 BamHI/EcoRI片段的連接反應中。連接在14℃進行14個小時。用BamHI和NotI消化載體pcDNA.3(Invitrogene)，加入到加有連接酶的連接反應中，反應再進行12小時。一份反應混合物轉化到感受態E.coli細胞中，培養生成的菌落，用引物11.b-1/2FOR1和11.b-1/2REV11(分別是SEQ ID NO50和51)進行PCR，鑒定了一個陽性克隆。這些引物在A1160和B3800之間架起了橋梁，因而擴增產物的探測表明，這兩個片段已連接起來。用SEQ IDNO50和51中給出的引物證實了陽性克隆的序列，它是從起始蛋氨酸后100至1405位堿基擴增的。
實施例23剔除小鼠的構建為更準確地分析由推定的小鼠αdcDNA編碼的蛋白質的免疫學功能，設計了一個“剔除”小鼠，其中編碼推測的αd同系物的基因組DNA序列被同源重組破裂。由破裂的基因編碼的蛋白質的意義被編碼蛋白質的缺如(absence)評價。鄧等人，Mol.Cell.Biol.132134-2140(1993)描述了“剔除”小鼠的產生。
這一小鼠的設計開始于含有通過同源重組事件而“剔除”序列的質粒的構建。一個小鼠cDNA的750堿基對片段(對應于SEQ ID NO45的1985至2733位)被用于從λFIXII基因組文庫中鑒定編碼推定的小鼠αd同系物的小鼠基因組序列。首輪篩選生成了14個陽性噬斑，其中7個被第二輪篩選所證實。從噬斑中的兩個獲得的液體溶胞物給出最強烈的信號，用傳統方法分離λDNA。限制性圖譜和Southern分析證實了一個克隆的真實性，被稱為14-1，用NotI酶切而分離插入DNA。該片段被克隆到Bluescript SKII+中。
為鑒定一個大約9-14kb-一個被報道為具有同源重組事件的最大可能性的長度的限制性片段，用750bp cDNA探針進行Southern雜交。雜交前，構建克隆14-1的限制性圖譜。一個12kb的片段被鑒定為可能的候選者，并且被亞克隆到pBluescript SKII+的一個位點上，在此位點上，小鼠DNA的側翼是胸腺嘧啶激酶編碼盒。用I結構域探針(對應于SEQ ID N05的454-1064位核苷酸)進一步分析該克隆表明該克隆不含有I結構域編碼序列。
使用同一I結構域探針，再次篩選λFIXII基因組文庫。最初，探測到6個陽性克隆，其中之一在第二輪篩選中仍保持陽性。從該克隆中分離的DNA在Southern分析中與I結構域探針強烈反應。然而使用最初的750bp探針檢測不到反應性，表明該克隆包括位于SEQ ID NO45的1985至2773位核苷酸的5′的區域。
或者是，缺乏對750bp探針的雜交可能提示，該克隆是整聯蛋白家族的另一成員。為了確定該解釋是否可信，將13kb插入片段亞克隆到pBluescript SKII+。使用對應于在SEQ ID NO52中的αdI結構域核酸序列441-461，591-612，717-739和反向898-918的引物測序純化DNA。僅在使用第一個4441-4461引物時獲得序列信息，且只有I結構域的最5′的外顯子被充分擴增。I結構域的其余部分未被擴增。因而生成的克隆含有小鼠αd基因的外顯子6，和連接到該外顯子3′和5′末端的內含的序列。該克隆中不出現外顯子7。測序之后，構建了含有新霉素抗性和胸腺激酶基因的構建物。
新霉素抗性(neor)一種打破小鼠基因組DNA蛋白質編碼序列的方式插入到生成的質粒之中。因而生成的質粒含有一個位于小鼠基因組DNA序列之中的neor基因，而這一切又位于胸腺嘧啶激酶編碼區之內。如此方式的質粒構建物是同源重組勝于隨機重組的需要〔Chisaka，等，自然355516-520(1992)〕。
實施例24兔αd的克隆-兔cDNA文庫的構建和篩選在大鼠和小鼠中人αd同系物的鑒定導致了兔同系物之存在的研究，該同系物將有用于下面討論的人疾病狀態的兔模型。
按制造商的說明和試劑盒里供給的試劑，使用Invitrogen FastTrach試劑盒(San Diego，CA)從完整的兔脾制備poly A+RNA。從1.65g組織中，分離了73μg poly A+RNA。使用購自Stratagene(LaJolla，CA)的試劑盒將兔脾RNA用于構建ZAP表達cDNA文庫。生成的cDNA定向地克隆到pBk-CMV噬菌體質粒嵌合體載體的λ臂的EcoRI和XhoI位點上。GigapackII Gold(Stratagene)用于將λ臂包裝到噬菌體顆粒中。生成文庫的滴度大約在8×105顆粒，平均插入片段大小為1.2kb。
通過對匯合的噬斑生長物平板接種將文庫擴增一次，且收集細胞溶胞物。擴增的文庫以大約30,000噬斑形成單位(pfu)/150mm生長E.coli的平板進行平板接種，生成的混合物于37℃溫孵12-16小時使噬斑形成。噬菌體DNA轉移到Hybond N+尼龍膜(Amersham，ArlingtonHeights，Illinois)。該膜用兩種隨機引物標記小鼠αdPCR DNA探針雜交。第一個探針由跨越SEQ ID NO52的149-946位核苷酸的PCR產物產生。第二個探針由跨越SEQ ID NO52的2752-3651位核苷酸的PCR產物產生。探針用隨機引物標記(BoehringerMannheim隨機引物DNA標記試劑盒)，將反應混合物過-Sephadex G-50柱以除去未參入核苷酸。雜交液由5×SSPE，5×Denhardtis，1％SDS，40％甲酰胺組成，標記探針是1×106dpm/ml。雜交在42℃進行16-18小時。濾膜在2×SSPE/0.1％SDS中于室溫充分洗滌，曝光X-光軟片，使任何雜交噬斑可視化。
鑒定了兩個與人αd具有明顯序列同源性的克隆。克隆#2大約800bp長，定位在人αd的5′末端。克隆#2包括起始蛋氨酸和完整的引導序列克隆#7大約1.5kb長且包括起始蛋氨酸。克隆#7的5′末端重疊了克隆#2的5′末端，而其3′序列終止于I結構域序列之外的點上。通過引物漫步(walking)方法將克隆#7完全測序。克隆#7的核苷酸和氨基酸序列在SEQ ID NO100和101中給出。
如從克隆#2和#7鑒定的兔αd的預測N末端氨基酸序列表明了一種蛋白質其與人αd有73％的一致性，與小鼠αd有65％的一致性，與小鼠CD11b，人CD11b和人CD11c有58％的一致性。克隆2的核酸序列在SEQ ID NO92中給出；預測的氨基酸序列在SEQ ID NO93中給出。
試圖使用標記的兔克隆#7和重新篩選該片段從其中衍生的cDNA文庫而分離全長兔αdcDNA。鑒定了25個克隆，其中一個被命名為克隆49的是最大的。使用嵌套缺失技術完全測序克隆49。克隆49的核苷酸和氨基酸序列分別在SEQ ID NO102和103中給出。因為克隆#7和#49不重疊，寡核苷酸被設計用作引物，用于以兔脾cDNA的第一條鏈進行的PCR，以分離丟失的序列。
表1描述了這兩種部分克隆的推測的氨基酸序列和其他白細胞整聯蛋白氨基酸序列的關系表1β2整聯蛋白家族成員在氨基酸水平上的一致性百分比人αd兔#7免#49人αd100 74 80小鼠αd70 67 74大鼠αd70 66 73小鼠CD11a 隨機*28 28小鼠CD11b55 59 53人CD11a 36 28 28人CD11b 60 58 55人CD11c 66 59 62*如果＜25％一致性，僅是一種隨機排列，且無意義。
兔αd克隆的分離使蛋白質在轉染子表面或以可溶的全長或截短形式進行表達成為可能。該蛋白被用作免疫原用于生產單克隆抗體，用于人疾病狀態的兔模型。
實施例25用于確定αd治療實用性的動物模型狗的免疫組織學資料和大鼠和小鼠的原位雜交確定在脾中，αd主要由出現在紅髓質中和淋巴結中的巨噬細胞表達，αd發現于髓索和竇中。其表達的方式與報道的兩種鼠抗原的表達方式十分地相似，其中該抗原被單克隆抗體F4/80和SK39所限定。而這些鼠抗原的生物化學特征已證實它們不同于αd。十分可能地，αd同鼠Z4/80和SK39抗原一樣限定同樣的巨噬細胞亞群。
在小鼠中，SK39-陽性巨噬細胞被鑒定位于脾紅髓質中，它們可能參預外來物質從循環中以及淋巴結髓質中清除，〔Jutila等，J.LeukocyteBiol 5430-39(1993)〕。已報道SK39陽性巨噬細胞出現在急性和慢性炎癥位點。而且募集到巰基乙酸鹽炎性腹股溝的單核細胞亦表達SK39抗原。總之，這些發現表明如果SK39+細胞亦是αd+，那么這些細胞將負責外來物質在脾中的清除，和參預炎癥，在這些過程中，巨噬細胞起重要作用。
αd功能尚不清楚，而其它更好表征的β2整聯蛋白已被表明參預多種粘著事件，其便利細胞遷移，提高細胞吞噬，促進細胞-細胞相互作用，以及所有導致炎性過程上調事件。因而，十分可信地，干擾正常的αd功能可能干擾炎癥，在炎癥中巨噬細胞起重要作用。這一抗炎作用可能由以下因素引起i)阻止巨噬細胞向炎癥位點募集，ii)阻止在炎癥位點巨噬細胞的激活或iii)干擾巨噬細胞效應物功能，其通過特異性自身免疫應答或作為旁觀者細胞損傷的結果而損傷正常宿主細胞。
有證據證實巨噬細胞在疾病過程中起重要作用的疾病狀態包括多發性硬化，關節炎，移植性動脈粥樣硬化，一些類型的糖尿病以及腸疾病。以下討論的動物模型顯示出再現這些人類疾病的許多方面。αd功能的抑制劑在這些模型中被測試，以確定是否潛在著治療相應人類疾病的能力。A.移植性動脈粥樣硬化目前心臟移植術是某些瀕危(end-state)心臟疾病的可接受的治療手段。當環孢菌素A的使用將一年存活率提高到80％時，進行性移植性動脈粥樣硬化作為心臟移植存活第一年之后的主要死因出現了。最近研究表明在心臟移植之后3年，明顯的移植性動脈粥樣硬化的發生幾率是36-44％〔Adams等，移植531115-1119(1992)；Adams等，移植56794-799(1993)〕。
移植性動脈粥樣硬化一般地由影響整個冠血管壁的彌散的、阻塞的，內壁的損傷組成，經常伴有脂質沉積。當移植性動脈粥樣硬化的病因仍不明了時，假設與供體和受體間組織相容性差異相關，是一種天然的免疫。組織學上，內壁增厚區域主要由巨噬細胞組成，雖然偶而可見T細胞。因而，表達αd的巨噬細胞可能在移植性動脈粥樣硬化的誘導和發生中起重要作用。在這種情形之下，單克隆抗體或αd功能的小分子抑制劑(如，可溶性ICAM-R)可以預防性地給藥接受了心臟移植并有發生移植性動脈粥樣硬化的風險的個體。
雖然在心臟移植中動脈粥樣硬化呈現出對于生命最大威脅，移植性動脈粥樣硬化亦發現于其他實體器官移植，包括腎和肝。αd阻斷劑(blocking agent)的治療用途可以在其他器官移植中，防止移植性動脈粥樣硬化并減弱由移植失敗引起的并發癥。
大鼠中，一種移植性動脈硬化的模型是跨越微弱組織相容性障礙的異位心臟同種移植。當Lewis心臟同種移植物被移植到MHCI型和II型相容性F-344受體時，80％的同種移植鼠存活3周，25％的移植鼠無限地存活。在這種低級的移植排斥中，在供體心臟中形成動脈硬化損傷。在120天齡的同種移植者中的動脈損傷一般具有彌散的纖維內壁增厚，在外觀上有別于發現于排斥性人心臟同種移植者的移植性動脈硬化。
用微弱組織相容性抗原失配的心臟移植大鼠，例如將Lewis移植給F-344。大鼠αd特異性單克隆抗體或αd的小分子抑制物間歇性給藥移植受體。預期治療在非排斥供體心臟中減低移植性動脈硬化。用αd單克隆抗體或小分子抑制劑治療大鼠可能不局限于預防性治療。阻斷αd功能亦被期望減弱巨噬細胞介導的炎癥并允許在移植中動脈損傷的復原。B.飼食膽固醇的兔的動脈粥樣硬化飼食含有膽固醇添加劑的致動脈粥樣硬化(atherogenic)食料大約12-16周的大鼠發生了內壁損傷，該損傷覆蓋了升主動脈的大部分腔表面〔Rosenfeld等，動脈硬化79-23(1987)；Rosenfeld等動脈硬化724-34(1987)〕在這些兔中所見的動脈粥樣硬化損傷和人類中的很相似。損傷含有大量T細胞，其中多數表達CD45RO，這是一個與記憶T細胞相關的標志。大約半數的浸潤T細胞亦表達MHCII類抗原。有一些表達IL-2受體，提示許多細胞是處于激活狀態。
在膽固醇飼食兔中發現，但在嚙齒類模型中明顯不發生的動脈粥樣硬化的特點是泡沫細胞-豐富的損傷的積累。泡沫細胞巨噬細胞據信由特異受體吸收氧化低密度脂蛋白引起。氧化LDL顆粒被發現對某些細胞類型包括內皮細胞和平滑肌細胞有毒性。巨噬細胞吸收潛在毒性的，氧化的LDL顆粒作為一種刺激物驅使巨噬細胞激活，造成了與動脈粥樣硬化相關的炎癥。
一旦產生了抗兔αd的單克隆抗體，便可治療膽固醇飼食的兔。治療包括預防性給藥αd單克隆抗體或小分子抑制劑，以證明αd+巨噬細胞參預了疾病過程。另外的研究證實αd單克隆抗體或小分子抑制劑能夠修復在飼食致動脈粥樣硬化食料的兔中發現的血管損傷。C.依賴于胰島素的糖尿病BB大鼠于70-150天齡自發地發生依賴于胰島素的糖尿病。采用免疫組織化學，可以探知MHCII+，ED1+巨噬細胞在疾病早期浸潤胰島。多數巨噬細胞看來從事細胞碎片或正常細胞的細胞吞噬。當疾病發展時，發現大量巨噬細胞浸潤胰島，雖然明顯數量的T細胞，和晚期B細胞，亦募集于該部位〔Hanenherg等，糖尿病32126-134(1989)〕。
BB大鼠糖尿病的發生看來依賴于早期巨噬細胞的浸潤和隨后T細胞的募集。用對巨噬細胞有毒的硅膠粒治療BB大鼠能有效地阻止在胰島的早期巨噬細胞浸潤。早期巨噬細胞浸潤不出現的情況下，不發生隨后的自身攻擊性淋巴細胞群造成的組織損傷。施用阻斷該疾病T細胞相關期的單克隆抗體OX19(大鼠CD5特異性)和OX-8(大鼠CD8特異性)亦有效抑制糖尿病發生。
在該模型病理學中巨噬細胞的中心作用，使得測試αd功能抑制劑頗具吸引力。用αd單克隆抗體或小分子抑制劑治療從遺傳學上易患依賴于胰島素的糖尿病的大鼠，并評價疾病的發展。阻止或延緩臨床開始都是αd在巨噬細胞損傷胰島細胞中起中心作用的證據。D.炎性腸疾病(Crohn’s病，潰瘍性結腸炎)在炎性腸疾病研究中所用動物模型通常由直腸給藥毒性刺激物(如乙酸或三硝基苯磺酸/乙醇)。這些化學劑誘導引起的結腸炎癥是化學或代謝損傷，缺乏與人IBD相關的慢性和自發性復發炎癥。最近描述了一種，使用漿膜下注射來自A群或D鏈球菌的純化肽聚糖-多糖(PGPS)多聚物的模型，看來與人IBD更為生理相關。〔Yamada等，胃腸學104759-771(1993)〕。
在此模型中PG-PS注射到遠側結腸漿膜層下。引起的炎性反應是兩期的，注射之后，有起始3天的急性癥狀，三至四周之后，隨之而來的是自發的慢性期。后期反應是天然肉芽腫，且導致結腸增厚、粘連、結腸結節和粘膜損傷。除粘膜損傷之外，PG-PS結腸炎經常引起關節炎性貧血和肉芽腫肝炎。該疾病的腸以外的癥狀使得該模型就研究Crohn’s結腸炎而言很有吸引力，因為明顯數量的活性Crohn’s病患者患有關節病和肝膽炎癥。
肉芽腫損傷是慢性炎癥的結果，慢性炎癥導致單核細胞/巨噬細胞系的募集和隨后的活化。Crohn’s病中肉芽腫損傷的出現和上述動物模型使得αd單克隆抗體或其他αd功能抑制劑成為富有吸引力的臨床靶點。期望αd功能抑制劑阻斷與IBD相關損傷的形成，甚至修復在此疾病中所見的組織損傷。E.關節炎關節炎看來是多因子疾病過程，涉及包括嗜中性粒細胞，T淋巴細胞和吞噬的巨噬細胞的多種炎性細胞類型。雖然存在各種關節炎模型，鏈球菌細胞壁蛋白聚糖制備物產生的疾病最近似人疾病。
在大鼠中，鏈球菌細胞壁誘導外周關節炎癥。特征在于，伴有緩解的疾病進行的癥狀重復出現，在數月后最終導致關節損傷。〔Cromartie，等，J.Exp.Med.1461585-1602(1977)；Swab等，Infection andImmunity 594436-4442(1991)〕。在疾病的慢性期，單核巨噬細胞和巨噬細胞據信在破壞滑膜中起重要作用。此外，抑制巨噬細胞募集到滑膜中的化學劑有效地減輕關節炎的炎癥和病理特性。
巨噬細胞在導致關節炎的滑膜損傷的中心作用預言了αd單克隆抗體或αd功能抑制劑在治療這些疾病中可能具有治療潛能。正如在前述其它模型中，預防性給藥αd單克隆抗體或小分子抑制劑被期望能阻斷或減弱關節炎癥和防止滑膜破壞。干擾αd功能的試劑可能通過阻止多余巨噬細胞向關節的募集或阻斷巨噬細胞激活而減輕正在發生的炎癥。凈效應應是恢復關節的繼續的損傷，且便利組織修復。F.多發性硬化雖然多發性硬化病因不明，通常認為該疾病由CD4+T細胞介導，CD4+T細胞識別中樞神經系統中的自身抗原且引發炎性級聯事件。造成的免疫反應導致了多余的炎性細胞，包括引起該疾病的激活的巨噬細胞的募集。實驗性自身免疫腦脊髓炎是一種再現MS某些方面的動物模型。最近，與出現在炎性巨噬細胞的CD11b/CD18反應的單克隆抗體顯示了阻斷臨床和組織學疾病。該結果提示αd的單克隆抗體或小分子抑制物似乎有效地阻斷EAE中的炎性反應。這樣的化學劑在治療MS中亦有重要的治療用途。G.免疫復合物小泡炎巨噬細胞位于小泡管、氣道、結締組織和肺的胸膜表面，代表針對吸入環境因子的肺的第一道防線。在應答化學劑包括細菌衍生的LPS，IFN-γ和免疫復合物的刺激時，小泡巨噬細胞釋放多種強炎性介質，包括高反應性氧自由基和氮中間體。雖然超氧化物陰離子，過氧化氫和氧化-氮(NO.)在根除病原體和溶胞腫瘤靶物中起重要作用，這些化學劑對正常組織有損傷作用。
在免疫復合物小泡炎，大鼠模型中，表明從小泡巨噬細胞中釋放的NO.介導大量肺損傷〔Mulligan等，美國國立科學院院報88638-6342(1991)〕。NO.亦作為介質參預了由其它他免疫復合物介導的損傷，包括皮膚脈管炎，〔Mulligan等，見上〕并可能在例如腎小球性腎炎的疾病中起重要作用。
NO.介導組織損傷不限于涉及免疫復合物的炎癥。例如，由化學劑如PMA、LPS或IFN-γ刺激的微膠原細胞產生了能夠殺死少突神經膠質細胞水平的NO.〔Merrill等，Immunol，1512132(1993)〕。亦發生胰島細胞對NO.敏感，且該介質釋放的巨噬細胞卷入了導致糖尿病的組織損傷〔Kroncke等BBRC 175752-758(1991)〕。最近總結性地證明了NO.釋放在內毒性休克中起重要作用〔MacMicking等，細胞81641-650(1995)〕。當給藥脂多糖時(LPS)，正常的野生型小鼠經歷嚴重的，進行性動脈壓下降，這可導致死亡。然而可誘導一氧化一氮缺陷型大鼠，在應答LPS時，經歷了輕微得多的動脈壓下降。在治療中均存活下來。
體外測試表明αd的阻斷有效地阻斷巨噬細胞激活的某種方面(或表達αd的白細胞，一般說來)，包括NO.釋放。現已發現在抗αd多克隆抗血清(在兔中，針對大鼠αdI結構域多肽而產生)存在的條件下，用IFN-γ刺激小泡巨噬細胞，產生的NO.的亞硝酸鹽/硝酸鹽斷裂產物明顯低于用對照抗血清處理的巨噬細胞。這一發現表明，抗αd，特別是抗I結構域的單克隆抗體可能是強抗炎劑，在MS、糖尿病、肺炎和內毒性休克中有潛在的用途。而且與影響多種白細胞類型的CD18形成對照，αd的有限的分布使其在阻止巨噬細胞(或表達αd的白細胞，一般說來)激活中，較之CD18，是更具吸引力的靶點。
大鼠IgG免疫復合物誘導的小泡炎在理解急性肺損傷中是更廣泛應用的實驗模型。這種損傷是由通過氣管導管插入術將抗牛血清白蛋白(BSA)抗體灌注到肺，然后靜脈注射BSA而引起。在肺的微脈管系統中免疫復合物的形成導致補體激活，并將嗜中性粒細胞募集到肺中。可以推測，隨著白細胞從血液中外滲在肺中形成免疫復合物，然后白細胞移動穿越肺表皮。然后，從參予疾病發展的激活的內皮細胞，嗜中性粒細胞和巨噬細胞釋向放介質，包括自由基，TNF-α和氧化-氮(NO.)。這些疾病的病理特點包括增加的血管通透性，這導致水腫，以及出現在小泡空間的大量紅細胞和PMNs的出現。
在免疫復合物誘導小泡炎大鼠模型中測驗αdI結構域特異性多克隆抗血清。通過氣管導管術施用抗αd多克隆血清，同時將抗-BSA導入肺。隨后通過靜脈給藥BSA以及痕量125I標記BSA(大約800,000cpm)引發肺損傷，定量測試由肺損傷引起的水腫。肺損傷進行4小時，采用肺通透性值來評價該損傷，定義為肺中125I-標記BSA與1.0ml血中出現的標記的量相比的比率。一般地，陽性對照的肺通透性值的比率在0.6和0.8之間，而陰性對照(未接受BSA的大鼠)的通透性指示值(indexvalue)在0.1-0.2之間。
最初的研究表明用抗αd多克隆抗血清降低肺通透性值多于50％，表示肺損傷的極大的減輕，組織學上，用抗-CD18治療亦降低通透性值60％。這些發現表明在急性肺損傷過程中，αd可能是最重要的β2整聯蛋白，然而不能準確地確定抗血清的作用是否抑制了白細胞從血液中外滲，或者穿過肺表皮而移動。
αd輕傷肺損傷的另一證據是，評價了支氣管灌洗液中TNF-α水平。發現用抗αd抗血清進行的治療大約降低TNF-α水平的4倍。長期以來TNF-α被視為急性肺炎的主要介導物，而且造成炎性細胞向炎癥位點的募集，細胞激活和組織損傷。可以推測，在免疫復合物性小泡炎形成的過程中，抗αd抗血清阻止了停留的小泡巨噬細胞的激活，因而減輕了TNF-α和NO.的釋放，降低了隨之而來的由這些化學劑引起的損傷和嗜中性粒細胞的募集。
實施例26αd在臨床前模型的表達為了評價在不同疾病狀態下αd的不同表達，用如上所述方法(見實施例18)制備的抗αd多克隆血清染色來自動物疾病模型的組織切片。正常和患病大鼠組織制成6μm厚的切片，于室溫下，在Superfrost Plus(VWR Scientific)載玻片上干燥過夜。干燥后切片貯存于-70℃直至使用。使用前，玻片從-70℃取出，置于50℃大約5分鐘。切片在冷丙酮(4℃)(Stephens Scientific)于室溫固定10分鐘，并于室溫干燥。每一玻片用150μl在1×TBS中的含30％正常大鼠血清(HarlanBioproducts)，5％正常羊血清(Vector Laboratories)和1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma化學公司)溶液中于室溫封閉30分鐘，在此之后將溶液小心地從切片上吸去。蛋白質濃度為34μg/ml的兔多克隆血清，和蛋白質濃度為38.5μg/ml的同一只兔的免疫前血清，稀釋在封閉液里，于37℃，將其100μl分別加入每一組織切片30分鐘。血清溶液從切片上吸去，在1×TBS中洗滌三次，每次5分鐘移去未結合的抗體。在最后一次洗滌后吸去過量的TBS。按制造商的說明，從Elite RabbitIgG Vectastain ABC試劑盒(Vector)制備生物素化羊抗兔抗體，100Ml如此生成的溶液加到每一切片上，于37℃保溫5分鐘。玻片在1×TBS中洗兩遍，每次5分鐘，此后100μl以1∶100稀釋于5％正常大鼠血清和1％BSA的鏈霉抗生物素蛋白-金結合物(GoldmarkBiologicals)于室溫下加至每一切片上1小時。玻片在TBS中洗三次，每次5分鐘，100μl在TBS緩沖液中的1％戊二醛在室溫下，加至切片5分鐘。玻片再次在TBS中洗三次，每次5分鐘，在滅菌無離子水中洗五次。每次3分鐘。從每一玻片上吸去過量液體。將兩滴溶液分別是銀增強和引發溶液(Goldmark Biologicals)加至每一切片上。反應在室溫下進行20-30分鐘，此后切片在無菌無離子水中徹底沖洗，室溫下空氣干燥過夜，用Cytoseal 60(VWR)計數。作為對照，在同一實驗中，用同樣方法將組織切片用識別CD11a，CD11b，CD11c和CD18的單克隆抗體標記。
用αd多克隆血清和CD11a，CD11b，CD11c和CD18的單克隆抗體標記，揭示了αd的染色圖樣不同于其他α亞基的染色圖樣。
在正常肺組織中，在支氣管的呼吸上皮(但不是小泡空間的上皮)，和在airspace內的看來是小泡巨噬細胞的個別細胞上檢測到αd表達。用多克隆血清觀察到的信號明顯高于用免疫前血清對照觀察到的本底信號。在肺肉芽腫組織中，施用多糖24和96小時之后，用αd染色整個小泡區域的呼吸上皮獲得一個不同的信號，而且在整個氣道中看來是小泡巨噬細胞上探測到一個強烈的信號。在來自被推測是從疾病中復原的動物肺組織(給藥多糖16天后處死)，用αd抗體來觀察到信號。在這些組織的每一個中，用免疫前血清觀察到非常低的本底。
使用來自抗原誘導哮喘模型的肺組織，在支氣管和小泡空間的呼吸上皮用αd抗體探測到非常強烈的信號。信號明顯高于免疫前血清對照的本底信號水平。
可期望本領域技術人員會如上面說明性實施例所提出的，在對本發明中作出多種改進和變化。因而只有如在所附權利要求書中出現的限制會被施加于本發明。
序列表(1)一般信息(i)申請人Gallatin，W.MichaelVan der Vieren，Monica(ii)發明名稱人β-2整聯蛋白α亞基(iii)序列數103(iv)通訊地址(A)地址Marshall，O’Toole，Gerstein，Murray&Borum(B)街道233 South Wacker Drive，6300 Sear Tower(C)城市Chicago(D)州Illinois(E)國家United States(F)郵編60606-6402(v)計算機可讀形式(A)媒體類型Floppy盤(B)計算機IBM PC兼容機(C)操作系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，Version#1.25(vi)目前申請資料(A)申請號(B)提交日(C)分類(vii)先有申請資料(A)申請號US 08/173,497(B)提交日1993.12.23(vii)先有申請資料(A)申請號US 08/286,889(B)提交日1994.8.5(vii)先有申請資料(A)申請號US 08/362,652(B)提交日1994.12.21
(viii)律師/代理人資料(A)姓名Williams Jr，Joseph A.
(B)注冊號38,659(C)查詢/案號27866/32684(ix)電訊資料(A)電話312-474-6300(B)電傳312-474-0448(C)電報25-3856(2)SEQ ID NO1信息(i)序列特征(A)長度3726個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置3..3485(xi)SEQ ID NO1序列描述TG ACC TTC GGC ACT GTG CTT CTT CTG AGT GTC CTG GCT TCT TAT CAT47Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His1 5 10 15GGA TTC AAC CTG GAT GTG GAG GAG CCT ACG ATC TTC CAG GAG GAT GCA 95Gly Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala20 25 30GGC GGC TTT GGG CAG AGC GTG GTG CAG TTC GGT GGA TCT CGA CTC GTG 143Gly Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val35 40 45GTG GGA GCA CCC CTG GAG GTG GTG GCG GCC AAC CAG ACG GGA CGG CTG 191Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu50 55 60TAT GAC TGC GCA GCT GCC ACC GGC ATG TGC CAG CCC ATC CCG CTG CAC 239Tyr Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His65 70 75ATC CGC CCT GAG GCC GTG AAC ATG TCC TTG GGC CTG ACC CTG GCA GCC 287Ile Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala80 85 90 95TCC ACC AAC GGC TCC CGG CTC CTG GCC TGT GGC CCG ACC CTG CAC AGA 335Ser Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg100 105 110GTC TGT GGG GAG AAC TCA TAC TCA AAG GGT TCC TGC CTC CTG CTG GGC383Val Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly115 120 125TCG CGC TGG GAG ATC ATC CAG ACA GTC CCC GAC GCC ACG CCA GAG TGT431Ser Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys130 135 140CCA CAT CAA GAG ATG GAC ATC GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT GGA AGC479Pro His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser145 150 155ATT GAC CAA AAT GAC TTT AAC CAG ATG AAG GGC TTT GTC CAA GCT GTC527Ile Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val160 165 170 175ATG GGC CAG TTT GAG GGC ACT GAC ACC CTG TTT GCA CTG ATG CAG TAC575Met Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr180 185 190TCA AAC CTC CTG AAG ATC CAC TTC ACC TTC ACC CAA TTC CGG ACC AGC623Ser Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser195 200 205CCG AGC CAG CAG AGC CTG GTG GAT CCC ATC GTC CAA CTG AAA GGC CTG671Pro Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu210 215 220ACG TTC ACG GCC ACG GGC ATC CTG ACA GTG GTG ACA CAG CTA TTT CAT719Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His225 230 235CAT AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATT GTC ATC767His Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile240 245 250 255ACA GAT GGG CAG AAG TAC AAA GAC CCC CTG GAA TAC AGT GAT GTC ATC815Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile260 265 270CCC CAG GCA GAG AAG GCT GGC ATC ATC CGC TAC GCT ATC GGG GTG GGA863Pro Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly275 280 285CAC GCT TTC CAG GGA CCC ACT GCC AGG CAG GAG CTG AAT ACC ATC AGC911His Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser290 295 300TCA GCG CCT CCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GAC AAC TTT GCA GCC959Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala305 310 315CTT GGC AGC ATC CAG AAG CAG CTG CAG GAG AAG ATC TAT GCA GTT GAG 1007Leu Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu320 325 330 335GGA ACC GAG TCC AGG GCA AGC AGC TCC TTC CAG GAC GAG ATG TCC CAA 1055Gly Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln340 345 350GAA GGC TTC AGC ACA GCC CTC ACA ATG GAT GGC CTC TTC CTG GGG GCT 1103Glu Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala355 360 365GTG GGG AGC TTT AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC CTG TAT CCC CCA AAT 1151Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn370 375 380ATG AGC CCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGG1199Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg385 390 395GAC TCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GAG CTA GCC CTG TGG AAG GGG GTA1247Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val400 405 410 415CAG AAC CTG GTC CTG GGG GCC CCC CGC TAC CAG CAT ACC GGG AAG GCT1295Gln Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala420 425 430GTC ATC TTC ACC CAG GTG TCC AGG CAA TGG AGG AAG AAG GCC GAA GTC1343Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val435 440 445ACA GGG ACG CAG ATC GGC TCC TAC TTC GGG GCC TCC CTC TGC TCC GTG1391Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val450 455 460GAT GTG GAC AGC GAT GGC AGC ACC GAC CTG ATC CTC ATT GGG GCC CCC1439Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro465 470 475CAT TAC TAT GAG CAG ACC CGA GGG GGC CAG GTG TCC GTG TGT CCC TTG1487His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu480 485 490 495CCT AGG GGG CAG AGG GTG CAG TGG CAG TGT GAC GCT GTT CTC CGT GGT1535Pro Arg Gly Gln Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly500 505 510GAG CAG GGC CAC CCC TGG GGC CGC TTT GGG GCA GCC CTG ACA GTG TTG1583Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu515 520 525GGG GAT GTG AAT GAG GAC AAG CTG ATA GAC GTG GCC ATT GGG GCC CCG1631Gly Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro530 535 540GGA GAG CAG GAG AAC CGG GGT GCT GTC TAC CTG TTT CAC GGA GCC TCA1679Gly Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser545 550 555GAA TCC GGC ATC AGC CCC TCC CAC AGC CAG CGG ATT GCC AGC TCC CAG1727Glu Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln560 565 570 575CTC TCC CCC AGG CTG CAG TAT TTT GGG CAG GCG CTG AGT GGG GGT CAG1775Leu Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln580 585 590GAC CTC ACC CAG GAT GGA CTG ATG GAC CTG GCC GTG GGG GCC CGG GGC1823Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly595 600 605CAG GTG CTC CTG CTC AGG AGT CTG CCG GTG CTG AAA GTG GGG GTG GCC1871Gln Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala610 615 620ATG AGA TTC AGC CCT GTG GAG GTG GCC AAG GCT GTG TAC CGG TGC TGG1919Met Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp625 630 635GAA GAG AAG CCC AGT GCC CTG GAA GCT GGG GAC GCC ACC GTC TGT CTC 1967Glu Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu640 645 650 655ACC ATC CAG AAA AGC TCA CTG GAC CAG CTA GGT GAC ATC CAA AGC TCT 2015Thr Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser660 665 670GTC AGG TTT GAT CTG GCA CTG GAC CCA GGT CGT CTG ACT TCT CGT GCC 2063Val Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala675 680 685ATT TTC AAT GAA ACC AAG AAC CCC ACT TTG ACT CGA AGA AAA ACC CTG 2111Ile Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu690 695 700GGA CTG GGG ATT CAC TGT GAA ACC CTG AAG CTG CTT TTG CCA GAT TGT 2159Gly Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys705 710 715GTG GAG GAT GTG GTG AGC CCC ATC ATT CTG CAC CTC AAC TTC TCA CTG 2207Val Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu720 725 730 735GTG AGA GAG CCC ATC CCC TCC CCC CAG AAC CTG CGT CCT GTG CTG GCC 2255Val Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala740 745 750GTG GGC TCA CAA GAC CTC TTC ACT GCT TCT CTC CCC TTC GAG AAG AAC 2303Val Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn755 760 765TGT GGG CAA GAT GGC CTC TGT GAA GGG GAC CTG GGT GTC ACC CTC AGC 2351Cys Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser770 775 780TTC TCA GGC CTG CAG ACC CTG ACC GTG GGG AGC TCC CTG GAG CTC AAC 2399Phe Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn785 790 795GTG ATT GTG ACT GTG TGG AAC GCA GGT GAG GAT TCC TAC GGA ACC GTG 2447Val Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val800 805 810 815GTC AGC CTC TAC TAT CCA GCA GGG CTG TCG CAC CGA CGG GTG TCA GGA 2495Val Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly820 825 830GCC CAG AAG CAG CCC CAT CAG AGT GCC CTG CGC CTG GCA TGT GAG ACA 2543Ala Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr835 840 845GTG CCC ACT GAG GAT GAG GGC CTA AGA AGC AGC CGC TGC AGT GTC AAC 2591Val Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn850 855 860CAC CCC ATC TTC CAT GAG GGC TCT AAC GGC ACC TTC ATA GTC ACA TTC 2639His Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe865 870 875GAT GTC TCC TAC AAG GCC ACC CTG GGA GAC AGG ATG CTT ATG AGG GCC 2687Asp Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala880 885 890 895AGT GCA AGC AGT GAG AAC AAT AAG GCT TCA AGC AGC AAG GCC ACC TTC2735Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe900 905 910CAG CTG GAG CTC CCG GTG AAG TAT GCA GTC TAC ACC ATG ATC AGC AGG2783Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg915 920 925CAG GAA GAA TCC ACC AAG TAC TTC AAC TTT GCA ACC TCC GAT GAG AAG2831Gln Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys930 935 940AAA ATG AAA GAG GCT GAG CAT CGA TAC CGT GTG AAT AAC CTC AGC CAG2879Lys Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn ASn Leu Ser Gln945 950 955CGA GAT CTG GCC ATC AGC ATT AAC TTC TGG GTT CCT GTC CTG CTG AAC2927Arg Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn960 965 970 975GGG GTG GCT GTG TGG GAT GTG GTC ATG GAG GCC CCA TCT CAG AGT CTC2975Gly Val Ala Val Trp Asp Val Val Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu980 985 990CCC TGT GTT TCA GAG AGA AAA CCT CCC CAG CAT TCT GAC TTC CTG ACC3023Pro Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr995 10001005CAG ATT TCA AGA AGT CCC ATG CTG GAC TGC TCC ATT GCT GAC TGC CTG3071Gln Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu0CAG TTC CGC TGT GAC GTC CCC TCC TTC AGC GTC CAG GAG GAG CTG GAT3119Gln Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp5TTC ACC CTG AAG GGC AAT CTC AGT TTC GGC TGG GTC CGC GAG ACA TTG3167Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu01055CAG AAG AAG GTG TTG GTC GTG AGT GTG GCT GAA ATT ACG TTC GAC ACA3215Gln Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr0TCC GTG TAC TCC CAG CTT CCA GGA CAG GAG GCA TTT ATG AGA GCT CAG3263Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln5ATG GAG ATG GTG CTA GAA GAA GAC GAG GTC TAC AAT GCC ATT CCC ATC3311Met Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile0ATC ATG GGC AGC TCT GTG GGG GCT CTG CTA CTG CTG GCG CTC ATC ACA3359Ile Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr5GCC ACA CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAA CGC CAC TAC AAG GAA ATG3407Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met01135CTG GAG GAC AAG CCT GAA GAC ACT GCC ACA TTC AGT GGG GAC GAT TTC3455Leu Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe0AGC TGT GTG GCC CCA AAT GTG CCT TTG TCC TAATAATCCA CTTTCCTGTT 3505Ser Cys Val Ala Pro Asn Val Pro Leu Ser11551160TATCTCTACC ACTGTGGGCT GGACTTGCTT GCAACCATAA ATCAACTTAC ATGGAAACAA3566CTTCTGCATA GATCTGCACT GGCCTAAGCA ACCTACCAGG TGCTAAGCAC CTTCTCGGAG3625AGATAGAGAT TGTAATGTTT TTACATATCT GTCCATCTTT TTCAGCAATG ACCCACTTTT3685TACAGAAGCA GGCATGGTGC CAGCATAAAT TTTCATATGC T3726(2)SEQ ID NO2信息(i)序列特征(A)長度1161個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO2序列描述Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His Gly1 5 10 15Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala Gly20 25 30Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val35 40 45Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr50 55 60Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His Ile65 70 75 80Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala Ser85 90 95Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg Val100 105 110Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser115 120 125Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys Pro130 135 140His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile145 150 155 160Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val Met165 170 175Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr Ser180 185 190Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser Pro195 200 205Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu Thr210 215 220Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His His225 230 235 240Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr245 250 255Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro260 265 270Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly His275 280 285Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser Ser290 295 300Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala Leu305 310 315 320Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu Gly325 330 335Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu340 345 350Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala Val355 360 365Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Met370 375 380Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp385 390 395 400Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val Gln405 410 415Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala Val420 425 430Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val Thr435 440 445Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp450 455 460Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro His465 470 475 480Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu Pro485 490 495Arg Gly Gln Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly Glu500 505 510Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly515 520 525Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly530 535 540Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser Glu545 550 555 560Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln Leu565 570 575Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln Asp580 585 590Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly Gln595 600 605Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala Met610 615 620Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp Glu625 630 635 640Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu Thr645 650 655Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser Val660 665 670Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala Ile675 680 685Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly690 695 700Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val705 710 715 720Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu Val725 730 735Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val740 745 750Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys755 760 765Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser Phe770 775 780Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn Val785 790 795 800Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val Val805 810 815Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly Ala820 825 830Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr Val835 840 845Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn His850 855 860Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe Asp865 870 875 880Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala Ser885 890 895Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe Gln900 905 910Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg Gln915 920 925Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys Lys930 935 940Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Gln Arg945 950 955 960Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly965 970 975Val Ala Val Trp Asp Val Vai Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu Pro980 985 990Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr Gln995 10001005Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu Gln0Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp Phe51040Thr Leu Lys Gly ASn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu Gln5Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser0Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln Met5Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile Ile0Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Ala51120Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met Leu5Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe Ser0Cys Val Ala Pro Asn Val Pro Lys Ser11551160(2)SEQ ID NO3信息(i)序列特征(A)長度1153個氨基酸(B)類型氨基酸
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO3序列描述Met Ala Leu Arg Val Leu Leu Leu Thr Ala Leu Thr Leu Cys His Gly1 5 10 15Phe Asn Leu Asp Thr Glu Asn Ala Met Thr Phe Gln Glu Asn Ala Arg20 25 30Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Leu Gln Gly Ser Arg Val Val Val35 40 45Gly Ala Pro Gln Glu Ile Val Ala Ala Asn Gln Arg Gly Ser Leu Tyr50 55 60Gln Cys Asp Tyr Ser Thr Gly Ser Cys Glu Pro Ile Arg Leu Gln Val65 70 75 80Pro Val Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Thr85 90 95Thr Ser Pro Pro Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Gln Thr100 105 110Cys Ser Glu Asn Thr Tyr Val Lys Gly Leu Cys Phe Leu Phe Gly Ser115 120 125Asn Leu Arg Gln Gln Pro Gln Lys Phe Pro Glu Ala Leu Arg Gly Cys130 135 140Pro Gln Glu Asp Ser Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser145 150 155 160Ile Ile Pro His Asp Phe Arg Arg Met Lys Glu Phe Val Ser Thr Val165 170 175Met Glu Gln Leu Lys Lys Ser Lys Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr180 185 190Ser Glu Glu Phe Arg Ile His Phe Thr Phe Lys Glu Phe Gln Asn Asn195 200 205Pro Asn Pro Arg Ser Leu Val Lys Pro Ile Thr Gln Leu Leu Gly Arg210 215 220Thr His Thr Ala Thr Gly Ile Arg Lys Val Val Arg Glu Leu Phe Asn225 230 235 240Ile Thr Asn Gly Ala Arg Lys Asn Ala Phe Lys Ile Leu Val Val Ile245 250 255Thr Asp Gly Glu Lys Phe Gly Asp Pro Leu Gly Tyr Glu Asp Val Ile260 265 270Pro Glu Ala Asp Arg Glu Gly Val Ile Arg Tyr Val Ile Gly Val Gly275 280 285Asp Ala Phe Arg Ser Glu Lys Ser Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ala290 295 300Ser Lys Pro Pro Arg Asp His Val Phe Gln Val Asn Asn Phe Glu Ala305 310 315 320Leu Lys Thr Ile Gln Asn Gln Leu Arg Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu325 330 335Gly Thr Gln Thr Gly Ser Ser Ser Ser Phe Glu His Glu Met Ser Gln340 345 350Glu Gly Phe Ser Ala Ala Ile Thr Ser Asn Gly Pro Leu Leu Ser Thr355 360 365Val Gly Ser Tyr Asp Trp Ala Gly Gly Val Phe Leu Tyr Thr Ser Lys370 375 380Glu Lys Ser Thr Phe Ile Asn Met Thr Arg Val Asp Ser Asp Met Asn385 390 395 400Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ala Ala Ala Ile Ile Leu Arg Asn Arg Val405 410 415Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Ile Gly Leu Val420 425 430Ala Met Phe Arg Gln Asn Thr Gly Met Trp Glu Ser Asn Ala Asn Val435 440 445Lys Gly Thr Gln Ile Gly Ala Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val450 455 460Asp Val Asp Ser Asn Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro465 470 475 480His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu485 490 495Pro Arg Gly Gln Arg Ala Arg Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Tyr Gly500 505 510Glu Gln Gly Gln Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu515 520 525Gly Asp Val Asn Gly Asp Lys Leu Thr Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro530 535 540Gly Glu Glu Asp Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Thr Ser545 550 555 560Gly Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Gly Ser Lys565 570 575Leu Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln580 585 590Asp Leu Thr Met Asp Gly Leu Val Asp Leu Thr Val Gly Ala Gln Gly595 600 605His Val Leu Leu Leu Arg Ser Gln Pro Val Leu Arg Val Lys Ala Ile610 615 620Met Glu Phe Asn Pro Arg Glu Val Ala Arg Asn Val Phe Glu Cys Asn625 630 635 640Asp Gln Val Val Lys Gly Lys Glu Ala Gly Glu Val Arg Val Cys Leu645 650 655His Val Gln Lys Ser Thr Arg Asp Arg Leu Arg Glu Gly Gln Ile Gln660 665 670Ser Val Val Thr Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Ser Gly Arg Pro His Ser675 680 685Arg Ala Val Phe Asn Glu Thr Lys Asn Ser Thr Arg Arg Gln Thr Gln690 695 700Val Leu Gly Leu Thr Gln Thr Cys Glu Thr Leu Lys Leu Gln Leu Pro705 710 715 720Asn Cys Ile Glu Asp Pro Val Ser Pro Ile Val Leu Arg Leu Asn Phe725 730 735Ser Leu Val Gly Thr Pro Leu Ser Ala Phe Gly Asn Leu Arg Pro Val740 745 750Leu Ala Glu Asp Ala Gln Arg Leu Phe Thr Ala Leu Phe Pro Phe Glu755 760 765Lys Asn Cys Gly Asn Asp Asn Ile Cys Gln Asp Asp Leu Ser Ile Thr770 775 780Phe Ser Phe Met Ser Leu Asp Cys Leu Val Val Gly Gly Pro Arg Glu785 790 795 800Phe Asn Val Thr Val Thr Val Arg Asn Asp Gly Glu Asp Ser Tyr Arg805 810 815Thr Gln Val Thr Phe Phe Phe Pro Leu Asp Leu Ser Tyr Arg Lys Val820 825 830Ser Thr Leu Gln Asn Gln Arg Ser Gln Arg Ser Trp Arg Leu Ala Cys835 840 845Glu Ser Ala Ser Ser Thr Glu Val Ser Gly Ala Leu Lys Ser Thr Ser850 855 860Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Pro Glu Asn Ser Glu Val Thr Phe865 870 875 880Asn Ile Thr Phe Asp Val Asp Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asn Lys Leu885 890 895Leu Leu Lys Ala Asn Val Thr Ser Glu Asn Asn Met Pro Arg Thr Asn900 905 910Lys Thr Glu Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met915 920 925Val Val Thr Ser His Gly Val Ser Thr Lys Tyr Leu Ash Phe Thr Ala930 935 940Ser Glu Asn Thr Ser Arg Val Met Gln His Gln Tyr Gln Val Ser Asn945 950 955 960Leu Gly Gln Arg Ser Leu Pro Ile Ser Leu Val Phe Leu Val Pro Val965 970 975Arg Leu Asn Gln Thr Val Ile Trp Asp Arg Pro Gln Val Thr Phe Ser980 985 990Glu Asn Leu Ser Ser Thr Cys His Thr Lys Glu Arg Leu Pro Ser His995 10001005Ser Asp Phe Leu Ala Glu Leu Arg Lys Ala Pro Val Val Asn Cys Ser0Ile Ala Val Cys Gln Arg Ile Gln Cys Asp Ile Pro Phe Phe Gly Ile51040Gln Glu Glu Phe Asn Ala Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Asp Trp5Tyr Ile Lys Thr Ser His Asn His Leu Leu Ile Val Ser Thr Ala Glu0Ile Leu Phe Asn Asp Ser Val Phe Thr Leu Leu Pro Gly Gln Gly Ala5Phe Val Arg Ser Gln Thr Glu Thr Lys Val Glu Pro Phe Glu Val Pro0Asn Pro Leu Pro Leu Ile Val Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu51120Leu Ala Leu Ile Thr Ala Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg5Gln Tyr Lys Asp Met Met Ser Glu Gly Gly Pro Pro Gly Ala Glu Pro0Gln(2)SEQ ID NO4信息(i)序列特征(A)長度1163個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO4序列描述Met Thr Arg Thr Arg Ala Ala Leu Leu Leu Phe Thr Ala Leu Ala Thr1 5 10 15Ser Leu Gly Phe Asn Leu Asp Thr Glu Glu Leu Thr Ala Phe Arg Val20 25 30Asp Ser Ala Gly Phe Gly Asp Ser Val Val Gln Tyr Ala Asn Ser Trp35 40 45Val Val Val Gly Ala Pro Gln Lys Ile Ile Ala Ala Asn Gln Ile Gly50 55 60Gly Leu Tyr Gln Cys Gly Tyr Ser Thr Gly Ala Cys Glu Pro Ile Gly65 70 75 80Leu Gln Val Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu85 90 95Ala Ser Thr Thr Ser Pro Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val100 105 110His His Glu Cys Gly Arg Asn Met Tyr Leu Thr Gly Leu Cys Phe Leu115 120 125Leu Gly Pro Thr Gln Leu Thr Gln Arg Leu Pro Val Ser Arg Gln Glu130 135 140Cys Pro Arg Gln Glu Gln Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly145 150 155 160Ser Ile Ser Ser Arg Asn Phe Ala Thr Met Met Asn Phe Val Arg Ala165 170 175Val Ile Ser Gln Phe Gln Arg Pro Ser Thr Gln Phe Ser Leu Met Glnl80 185 190Phe Ser Asn Lys Phe Gln Thr His Phe Thr Phe Glu Glu Phe Arg Arg195 200 205Thr Ser Asn Pro Leu Ser Leu Leu Ala Ser Val His Gln Leu Gln Gly210 215 220Phe Thr Tyr Thr Ala Thr Ala Ile Gln Asn Val Val His Arg Leu Phe225 230 235 240His Ala Ser Tyr Gly Ala Arg Arg Asp Ala Ile Lys Ile Leu Ile Val245 250 255Ile Thr Asp Gly Lys Lys Glu Gly Asp Ser Leu Asp Tyr Lys Asp Val260 265 270Ile Pro Met Ala Asp Ala Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val275 280 285Gly Leu Ala Phe Gln Asn Arg Asn Ser Trp Lys Glu Leu Asn Asp Ile290 295 300Ala Ser Lys Pro Ser Gln Glu His Ile Phe Lys Val Glu Asp Phe Asp305 310 315 320Ala Leu Lys Asp Ile Gln Asn Gln Leu Lys Glu Lys Ile Phe Ala Ile325 330 335Glu Gly Thr Glu Thr Ile Ser Ser Ser Ser Phe Glu Leu Glu Met Ala340 345 350Gln Glu Gly Phe Ser Ala Val Phe Thr Pro Asp Gly Pro Val Leu Gly355 360 365Ala Val Gly Ser Phe Thr Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro370 375 380Asn Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met385 390 395 400Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly405 410 415Val Gln Ser Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Ile Gly Lys420 425 430Ala Val Ile Phe Ile Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Met Lys Ala Glu435 440 445Val Ile Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser450 455 460Val Asp Val Asp Thr Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala465 470 475 480Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro485 490 495Leu Pro Arg Gly Trp Arg Arg Trp Trp Cys Asp Ala Val Leu Tyr Gly500 505 510Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu515 520 525Gly Asp Val Asn Gly Asp Lys Leu Thr Asp Val Val Ile Gly Ala Pro530 535 540Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Val Leu545 550 555 560Gly Pro Ser Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Gly Ser Gln565 570 575Leu Ser Ser Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln580 585 590Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly595 600 605Gln Val Leu Leu Leu Arg Thr Arg Pro Val Leu Trp Val Gly Val Ser610 615 620Met Gln Phe Ile Pro Ala Glu Ile Pro Arg Ser Ala Phe Glu Cys Arg625 630 635 640Glu Gln Val Val Ser Glu Gln Thr Leu Val Gln Ser Asn Ile Cys Leu645 650 655Tyr Ile Asp Lys Arg Ser Lys Asn Leu Leu Gly Ser Arg Asp Leu Gln660 665 670Ser Ser Val Thr Leu Asp Leu Ala Leu Ala Pro Gly Arg Leu Ser Pro675 680 685Arg Ala Ile Phe Gln Glu Thr Lys Asn Arg Ser Leu Ser Arg Val Arg690 695 700Val Leu Gly Leu Lys Ala His Cys Glu Asn Phe Asn Leu Leu Leu Pro705 710 715 720Ser Cys Val Glu Asp Ser Val Ile Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Phe725 730 735Thr Leu Val Gly Lys Pro Leu Leu Ala Phe Arg Asn Leu Arg Pro Met740 745 750Leu Ala Ala Leu Ala Gln Arg Tyr Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu755 760 765Lys Asn Cys Gly Ala Asp His Ile Cys Gln Asp Asn Leu Gly Ile Ser770 775 780Phe Ser Phe Pro Gly Leu Lys Ser Leu Leu Val Gly Ser Asn Leu Glu785 790 795 800Leu Asn Ala Glu Val Met Val Trp Asn Asp Gly Glu Asp Ser Tyr Gly905 810 815Thr Thr Ile Thr Phe Ser His Pro Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Tyr Val820 825 830Ala Glu Gly Gln Lys Gln Gly Gln Leu Arg Ser Leu His Leu Thr Cys835 840 845Cys Ser Ala Pro Val Gly Ser Gln Gly Thr Trp Ser Thr Ser Cys Arg850 855 860Ile Asn His Leu Ile Phe Arg Gly Gly Ala Gln Ile Thr Phe Leu Ala865 870 875 880Thr PAe Asp Val Ser Pro Lys Ala Val Gly Leu Asp Arg Leu Leu Leu885 890 895Ile Ala Asn Val Ser Ser Glu Asn Asn Ile Pro Arg Thr Ser Lys Thr900 905 910Ile Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Ile Val Val915 920 925Ser Ser His Glu Gln Phe Thr Lys Tyr Leu Asn Phe Ser Glu Ser Glu930 935 940Glu Lys Glu Ser His Val Ala Met His Arg Tyr Gln Val Asn Asn Leu945 950 955 960Gly Gln Arg Asp Leu Pro Val Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Glu965 970 975Leu Asn Gln Glu Ala Val Trp Met Asp Val Glu Val Ser His Pro Gln980 985 990Asn Pro Ser Leu Arg Cys Ser Ser Glu Lys Ile Ala Pro Pro Ala Ser995 10001005Asp Phe Leu Ala His Ile Gln Lys Asn Pro Val Leu Asp Cys Ser Ile0Ala Gly Cys Leu Arg Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln51040Glu Glu Leu Asp Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val5Arg Gln Ile Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile0Ile Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe5Met Arg Ala Gln Thr Ile Thr Val Leu Glu Lys Tyr Lys Val His Asn0Pro Ile Pro Leu Ile Val Gly Ser Ser Ile Gly Gly Leu Leu Leu Leu51120Ala Leu Ile Thr Ala Val Leu Tyr Lys Val Gly Phe Phe Lys Arg Gln5Tyr Lys Glu Met Met Glu Glu Ala Asn Gly Gln Ile Ala Pro Glu Asn0Gly Thr Gln Thr Pro Ser Pro Pro Ser Glu Lys11551160(2)SEQ ID NO5信息(i)序列特征(A)長度12個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO5序列描述Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Met Val Phe Gln1 510(2)SEQ ID NO6信息(i)序列特征(A)長度35個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型 DNA
(xi)SEQ ID NO6序列描述TTYAAYYTGG AYGTNGARGA RCCNATGGTN TTYCA 35(2)SEQ ID NO7信息(i)序列特征(A)長度36個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO7序列描述TTCAACCTGG ACGTGGAGGA GCCCATGGTG TTCCAA 36(2)SEQ ID NO8信息(i)序列特征(A)長度36個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO8序列描述TTCAACCTGG ACGTNGAASA NCCCATGGTC TTCCAA 36(2)SEQ ID NO9信息(i)序列特征(A)長度23個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO9序列描述TTYAAYYTNG AYGTNGARGA RCC 23(2)SEQ ID NO10信息(i)序列特征(A)長度20個堿基
(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO10序列描述TTYAAYYTGG ACGTNGAAGA 20(2)SEQ ID NO11信息(i)序列特征(A)長度17個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO11序列描述TGRAANACCA TNGGYTC 17(2)SEQ ID NO12信息(i)序列特征(A)長度18個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO12序列描述TTGGAAGACC ATNGGYTC 18(2)SEQ ID NO13信息(i)序列特征(A)長度17個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO13序列描述ATTAACCCTC ACTAAAG 17(2)SEQ ID NO14信息(i)序列特征(A)長度17個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO14序列描述AATACGACTC ACTATAG 17(2)SEQ ID NO15信息(i)序列特征(A)長度11個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO15序列描述Val Phe Gln Glu Xaa Gly Ala Gly Phe Gly Gln1 5 10(2)SEQ ID NO16信息(i)序列特征(A)長度14個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO16序列描述Leu Tyr Asp Xaa Val Ala Ala Thr Gly Leu Xaa Gln Pro Ile1 5 10(2)SEQ ID NO17信息(i)序列特征(A)長度12個氨基酸(B)類型氨基酸
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO17序列描述Pro Leu Glu Tyr Xaa Asp Val Ile Pro Gln Ala Glu1 5 10(2)SEQ ID NO18信息(i)序列特征(A)長度10個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO18序列描述Phe Gln Glu Gly Phe Ser Xaa Val Leu Xaa1 5 10(2)SEQ ID NO19信息(i)序列特征(A)長度14個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO19序列描述Thr Ser Pro Thr Phe Ile Xaa Met Ser Gln Glu Asn Val Asp1 5 10(2)SEQ ID NO20信息(i)序列特征(A)長度17個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO20序列描述Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Val Xaa Gln Thr Gly Arg1 5 10 15(2)SEQ ID NO21信息(i)序列特征(A)長度9個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO21序列描述Leu Asp Xaa Lys Pro Xaa Asp Thr Ala1 5(2)SEQ ID NO22信息(i)序列特征(A)長度7個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO22序列描述Phr Gly Glu Gln Phe Ser Glu1 5(2)SEQ ID NO23信息(i)序列特征(A)長度21個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型肽(xi)SEQ ID NO23序列描述RAANCCYTCY TGRAAACTYT C 21(2)SEQ ID NO24信息(i)序列特征(A)長度1006個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性
(ii)分子類型 cDNA(xi)SEQ ID NO24序列描述TTCAACCTGG ACGTGGAGGA GCCCATGGTG TTCAAGAGGA TGGAGCTGGC TTTGGACAGA 60GCGTGGCCCA GCTTGGCGGA TCTAGACTCG TGGTGGGAGC CCCCCTGGAG GTGGTGGCGG 120TCAACCAAAC AGGAAGGTTG TATGACTGTG TGGCTGCCAC TGGCCTTGTC AACCCATACC 180CCTGCACACA CCCCCAGATG CTGTGAACAT GTCCCTGGGT CTGTCCCTGT CAGCCGCCGC 240CAGTCGCCCC TGGCTGCTGG CCTGTGGCCC AACCATGCAC AGAGCCTGTG GGGAGAATAT 300GTATGCAGAA GGCTTTTGCC TCCTGTTGGA CTCCCATCTG CAGACCATTT GGACAGTACC 360TGCTGCCCTA CCAGAGTGTC CAAGTCAAGA GATGGACATT GTCTTCCTGA TTGATGGTTC 420TGGCAGTATG AGCAAAGTGA CTTTAAACAA ATGAAGGATT TGTGAGAGCT GTGATGGGAC 480AGTTTGAGGG CACCCAAACC CTGTTCTCAC TGATACAGTA TCCCACCTCC CTGAAGATCC 540ACTTCACCTT CACGCAATTC CAGAGCAGCT GGAACCCTCT GAGCCTGGTG GATCCCATTG 600TCCAACTGGA CGGCCTGACA TATACAGCCA CGGGCATCCG GAAAGTGGTG GAGGAACTGT 660TTCATAGTAA GAATGGGGCC CGTAAAAGTG CCAAGAAGAT CCTCATTGTC ATCACAGATG 720GCAAAAATAC AAAGACCCCC TGGAGTACGA GGACGTATCC CCAGGCAGAG AGAGCGGATC 780ATCCGCTATG CCATTGGGGT GGGAGATGCT TTCTGGAAAC CCAGTGCCAA GCAGGAGCTG 840GACAACATTG GCTCAGAGCC GGCTCAGGAC CATGTGTTCA GGGTGGACAA CTTTGCAGCA 900CTCAGCAGCA TCCAGGAGCA GCTGCAGGAG AAGATCTTTG CACTCGAAGG AACCCAGTCG 960ACGACAAGTA GCTCTTTCCA ACATGAGATG TTCCAAGAAG GGTTCA1006(2)SEQ ID NO25信息(i)序列特征(A)長度17個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO25序列描述GTNTTYCARG ARGAYGG 17(2)SEQ ID NO26信息(i)序列特征(A)長度20個堿基
(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO26序列描述CCACTGTCAG GATGCCCGTG 20(2)SEQ ID NO27信息(i)序列特征(A)長度42個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO27序列描述AGTTACGAAT TCGCCACCAT GGCTCTACGG GTGCTTCTTC TG42(2)SEQ ID NO28信息(i)序列特征(A)長度42個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO28序列描述AGTTACGAAT TCGCCACCAT GACTCGGACT GTGCTTCTTC TG42(2)SEQ ID NO29信息(i)序列特征(A)長度36個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO29序列描述AGTTACGAAT TCGCCACCAT GACCTTCGGC ACTGTG 36(2)SEQ ID NO30信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO30序列描述TTGCTGACTG CCTGCAGTTC 20(2)SEQ ID NO31信息(i)序列特征(A)長度36個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型 DNA(xi)SEQ ID NO31序列描述GTTCTGACGC GTAATGGCAT TGTAGACCTC GTCTTC 36(2)SEQ ID NO32信息(i)序列特征(A)長度36個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO32序列描述ACGTATGCAG GATCCCATCA AGAGATGGAC ATCGCT 36(2)SEQ ID NO33信息(i)序列特征(A)長度37個堿基
(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO33序列描述ACTGCATGTC TCGAGGCTGA AGCCTTCTTG GGACATC37(2)SEQ ID NO34信息(i)序列特征(A)長度24個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO34序列描述TATAGACTGC TGGGTAGTCC CCAC 24(2)SEQ ID NO35信息(i)序列特征(A)長度24個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO35序列描述TGAAGATTGG GGGTAAATAA CAGA 24(2)SEQ ID NO36信息(i)序列特征(A)長度3528個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征
(A)名稱/鍵CDS(B)位置3..3456(xi)SEQ ID NO36序列描述GGC TGG GCC CTG GCT TCC TGT CAT GGG TCT AAC CTG GAT GTG GAG GAA 48Gly Trp Ala Leu Ala Ser Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Glu1 5 10 15CCC ATC GTG TTC AGA GAG GAT GCA GCC AGC TTT GGA CAG ACT GTG GTG 96Pro Ile Val Phe Arg Glu Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val20 25 30CAG TTT GGT GGA TCT CGA CTC GTG GTG GGA GCC CCT CTG GAG GCG GTG 144Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val35 40 45GCA GTC AAC CAA ACA GGA CGG TTG TAT GAC TGT GCA CCT GCC ACT GGC 192Ala Val Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr Asp Cys Ala Pro Ala Thr Gly50 55 60ATG TGC CAG CCC ATC GTA CTG CGC AGT CCC CTA GAG GCA GTG AAC ATG 240Met Cys Gln Pro Ile Val Leu Arg Ser Pro Leu Glu Ala Val Asn Met65 70 75 80TCC CTG GGC CTG TCT CTG GTG ACT GCC ACC AAT AAC GCC CAG TTG CTG 288Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Thr Ala Thr Asn Asn Ala Gln Leu Leu85 90 95GCT TGT GGT CCA ACT GCA CAG AGA GCT TGT GTG AAG AAC ATG TAT GCG 336Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg Ala Cys Val Lys Asn Met Tyr Ala100 105 110AAA GGT TCC TGC CTC CTT CTC GGC TCC AGC TTG CAG TTC ATC CAG GCA 384Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala115 120 125GTC CCT GCC TCC ATG CCA GAG TGT CCA AGA CAA GAG ATG GAC ATT GCT 432Val Pro Ala Ser Met Pro Glu Cys Pro Arg Gln Glu Met Asp Ile Ala130 135 140TTC CTG ATT GAT GGT TCT GGC AGC ATT AAC CAA AGG GAC TTT GCC CAG 480Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Asn Gln Arg Asp Phe Ala Gln145 150 155 160ATG AAG GAC TTT GTC AAA GCT TTG ATG GGA GAG TTT GCG AGC ACC AGC 528Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu Met Gly Glu Phe Ala Ser Thr Ser165 170 175ACC TTG TTC TCC CTG ATG CAA TAC TCG AAC ATC CTG AAG ACC CAT TTT 576Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe180 185 190ACC TTC ACT GAA TTC AAG AAC ATC CTG GAC CCT CAG AGC CTG GTG GAT 624Thr Phe Thr Glu Phe Lys Asn Ile Leu Asp Pro Gln Ser Leu Val Asp195 200 205CCC ATT GTC CAG CTG CAA GGC CTG ACC TAC ACA GCC ACA GGC ATC CGG 672Pro Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Ile Arg210 215 220ACA GTG ATG GAA GAG CTA TTT CAT AGC AAG AAT GGG TCC CGT AAA AGT 720Thr Val Met Glu Glu Leu Phe His Ser Lys Asn Gly Ser Arg Lys Ser225 230 235 240GCC AAG AAG ATC CTC CTT GTC ATC ACA GAT GGG CAG AAA TAC AGA GAC 768Ala Lys Lys Ile Leu Leu Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Arg Asp245 250 255CCC CTG GAG TAT AGT GAT GTC ATT CCC GCC GCA GAC AAA GCT GGC ATC 816Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Ala Gly Ile260 265 270ATT CGT TAT GCT ATT GGG GTG GGA GAT GCC TTC CAG GAG CCC ACT GCC 864Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe Gln Glu Pro Thr Ala275 280 285CTG AAG GAG CTG AAC ACC ATT GGC TCA GCT CCC CCA CAG GAC CAC GTG 912Leu Lys Glu Leu Asn Thr Ile Gly Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val290 295 300TTC AAG GTA GGC AAC TTT GCA GCA CTT CGC AGC ATC CAG AGG CAA CTT 960Phe Lys Val Gly Asn Phe Ala Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Leu305 310 315 320CAG GAG AAA ATC TTC GCC ATT GAG GGA ACT CAA TCA AGG TCA AGT AGT1008Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu Gly Thr Gln Ser Arg Ser Ser Ser325 330 335TCC TTT CAG CAC GAG ATG TCA CAA GAA GGT TTC AGT TCA GCT CTC ACA1056Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Thr340 345 350TCG GAT GGA CCC GTT CTG GGG GCC GYG GGA AGC TTC AGC TGG TCC GGA1104Ser Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala Xaa Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly355 360 365GGT GCC TTC TTA TAT CCC CCA AAT ACG AGA CCC ACC TTT ATC AAC ATG1152Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Thr Arg Pro Thr Phe Ile Asn Met370 375 380TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGA GAC TCC TAC CTG GGT TAC TCC ACC 1200Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr385 390 395 400GCA GTG GCC TTT TGG AAG GGG GTT CAC AGC CTG ATC CTG GGG GCC CCG 1248Ala Val Ala Phe Trp Lys Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro405 410 415CGT CAC CAG CAC ACG GGG AAG GTT GTC ATC TTT ACC CAG GAA GCC AGG 1296Arg His Gln His Thr Gly Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ala Arg420 425 430CAT TGG AGG CCC AAG TCT GAA GTC AGA GGG ACA CAG ATC GGC TCC TAC 1344His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr435 440 445TTC GGG GCC TCT CTC TGT TCT GTG GAC GTG GAT AGA GAT GGC AGC ACY 1392Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp Val Asp Arg Asp Gly Ser Xaa450 455 460GAC CTG GTC CTG ATC GGA GCC CCC CAT TAC TAT GAG CAG ACC CGA GGG 1440Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly465 470 475 480GGG CAG GTC TCA GTG TKC CCC GTG CCC GGT GTG AGG GGC AGG TGG CAG 1488Gly Gln Val Ser Val Xaa Pro Val Pro Gly Val Arg Gly Arg Trp Gln485 490 495TGT GAG GCC ACC CTC CAC GGG GAG CAG GRC CAT CCT TGG GGC CGC TTT 1536Cys Glu Ala Thr Leu His Gly Glu Gln Xaa His Pro Trp Gly Arg Phe500 505 510GGG GTG GCT CTG ACA GTG CTG GGG GAC GTA AAC GGG GAC AAT CTG GCA 1584Gly Val Ala Leu Thr Val Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Asn Leu Ala515 520 525GAC GTG GCT ATT GGT GCC CCT GGA GAG GAG GAG AGC AGA GGT GCT GTC 1632Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly Glu Glu Glu Ser Arg Gly Ala Val530 535 540TAC ATA TTT CAT GGA GCC TCG AGA CTG GAG ATC ATG CCC TCA CCC AGC 1680Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ile Met Pro Ser Pro Ser545 550 555 560CAG CGG GTC ACT GGC TCC CAG CTC TCC CTG AGA CTG CAG TAT TTT GGG 1728Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly565 570 575CAG TCA TTG AGT GGG GGT CAG GAC CTT ACA CAG GAT GGC CTG GTG GAC 1776Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp580 585 590CTG GCC GTG GGA GCC CAG GGG CAC GTA CTG CTG CTC AGG AGT CTG CCT 1824Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro595 600 605CTG CTG AAA GTG GAG CTC TCC ATA AGA TTC GCC CCC ATG GAG GTG GCA 1872Leu Leu Lys Val Glu Leu Ser Ile Arg Phe Ala Pro Met Glu Val Ala610 615 620AAG GCT GTG TAC CAG TGC TGG GAA AGG ACT CCC ACT GTC CTC GAA GCT1920Lys Ala Val Tyr Gln Cys Trp Glu Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala625 630 635 640GGA GAG GCC ACT GTC TGT CTC ACT GTC CAC AAA GGC TCA CCT GAC CTG1968Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr Val His Lys Gly Ser Pro Asp Leu645 650 655TTA GGT AAT GTC CAA GGC TCT GTC AGG TAT GAT CTG GCG TTA GAT CCG2016Leu Gly Asn Val Gln Gly Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro660 665 670GGC CGC CTG ATT TCT CGT GCC ATT TTT GAT GAG ACT AAG AAC TGC ACT2064Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr675 680 685TTG ACG GGA AGG AAG ACT CTG GGG CTT GGT GAT CAC TGC GAA ACA GTG2112Leu Thr Gly Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Val690 695 700AAG CTG CTT TTG CCG GAC TGT GTG GAA GAT GCA GTG AGC CCT ATC ATC2160Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Ala Val Ser Pro Ile Ile705 710 715 720CTG CGC CTC AAC TTT TCC CTG GTG AGA GAC TCT GCT TCA CCC AGG AAC2208Leu Arg Leu Ash Phe Ser Leu Val Arg Asp Ser Ala Ser Pro Arg Asn725 730 735CTG CAT CCT GTG CTG GCT GTG GGC TCA CAA GAC CAC ATA ACT GCT TCT2256Leu His Pro Val Leu Ala Val Gly Ser Gln Asp His Ile Thr Ala Ser740 745 750CTG CCG TTT GAG AAG AAC TGT AAG CAA GAA CTC CTG TGT GAG GGG GAC2304Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asp755 760 765CTG GGC ATC AGC TTT AAC TTC TCA GGC CTG CAG GTC TTG GTG GTG GGA2352Leu Gly Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Val Val Gly770 775 780GGC TCC CCA GAG CTC ACT GTG ACA GTC ACT GTG TGG AAT GAG GGT GAG2400Gly Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu785 790 795 800GAC AGC TAT GGA ACT TTA GTC AAG TTC TAC TAC CCA GCA GGG CTA TCT2448Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Val Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser805 810 815TAC CGA CGG GTA ACA GGG ACT CAG CAA CCT CAT CAG TAC CCA CTA CGC2496Tyr Arg Arg Val Thr Gly Thr Gln Gln Pro His Gln Tyr Pro Leu Arg820 825 830TTG GCC TGT GAG GCT GAG CCC GCT GCC CAG GAG GAC CTG AGG AGC AGC2544Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Ala Ala Gln Glu Asp Leu Arg Ser Ser835 840 845AGC TGT AGC ATT AAT CAC CCC ATC TTC CGA GAA GGT GCA AAG ACC ACC2592Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Thr Thr850 855 860TTC ATG ATC ACA TTC GAT GTC TCC TAC AAG GCC TTC CTA GGA GAC AGG 2640Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg865 870 875 880TTG CTT CTG AGG GCC AAA GCC AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT GAT ACC 2688Leu Leu Leu Arg Ala Lys Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Asp Thr885 890 895AAC AAG ACT GCC TTC CAG CTG GAG CTC CCA GTG AAG TAC ACC GTC TAT 2736Asn Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr900 905 910ACC CTG ATC AGT AGG CAA GAA GAT TCC ACC AAC CAT GTC AAC TTT TCA 2784Thr Leu Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Asn His Val Asn Phe Ser915 920 925TCT TCC CAC GGG GGG AGA AGG CAA GAA GCC GCA CAT CGC TAT CGT GTG 2832Ser Ser His Gly Gly Arg Arg Gln Glu Ala Ala His Arg Tyr Arg Val930 935 940AAT AAC CTG AGT CCA CTG AAG CTG GCC GTC AGA GTT AAC TTC TGG GTC 2860Asn Asn Leu Ser Pro Leu Lys Leu Ala Val Arg Val Asn Phe Trp Val945 950 955 960CCT GTC CTT CTG AAC GGT GTG GCT GTG TGG GAC GTG ACT CTG AGC AGC 2928Pro Val Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Ser Ser965 970 975CCA GCA CAG GGT GTC TCC TGC GTG TCC CAG ATG AAA CCT CCT CAG AAT 2976Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Met Lys Pro Pro Gln Asn980 985 990CCC GAC TTT CTG ACC CAG ATT CAG AGA CGT TCT GTG CTG GAC TGC TCC 3024Pro Asp Phe Leu Thr Gln Ile Gln Arg Arg Ser Val Leu Asp Cys Ser995 10001005ATT GCT GAC TGC CTG CAC TCC CGC TGT GAC ATC CCC TCC TTG GAC ATC 3072Ile Ala Asp Cys Leu His Ser Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Asp Ile0CAG GAT GAA CTT GAC TTC ATT CTG AGG GGC AAC CTC AGC TTC GGC TGG 3120Gln Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Arg Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp51040GTC AGT CAG ACA TTG CAG GAA AAG GTG TTG CTT GTG AGT GAG GCT GAA 3168Val Ser Gln Thr Leu Gln Glu Lys Val Leu Leu Val Ser Glu Ala Glu5ATC ACT TTC GAC ACA TCT GTG TAC TCC CAG CTG CCA GGA CAG GAG GCA 3216Ile Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala0TTT CTG AGA GCC CAG GTG GAG ACA ACG TTA GAA GAA TAC GTG GTC TAT 3264Phe Leu Arg Ala Gln Val Glu Thr Thr Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr5GAG CCC ATC TTC CTC GTG GCG GGC AGC TCG GTG GGA GGT CTG CTG TTA 3312Glu Pro Ile Phe Leu Val Ala Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu0CTG GCT CTC ATC ACA GTG GTA CTG TAC AAG CTT GGC TYC TYC AAA CGT3360Leu Ala Leu Ile Thr Val Val Leu Tyr Lys Leu Gly Xaa Xaa Lys Arg51120CAG TAC AAA GAA ATG CTG GAC GGC AAG GCT GCA GAT CCT GTC ACA GCC3408Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Gly Lys Ala Ala Asp Pro Val Thr Ala5GGC CAG GCA GAT TTC GGC TGT GAG ACT CCT CCA TAT CTC GTG AGC TAGGAATCCA 3463Gly Gln Ala Asp Phe Gly Cys Glu Thr Pro Pro Tyr Leu Val Ser0CTCTCCTGCC TATCTCTGNA ATGAAGATTG GTCCTGCCTA TGAGTCTACT GGCATGGGAA 3523CGAGT 3528(2)SEQ ID NO37資料(i)序列特征(A)長度1151個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO37序列描述Gly Trp Ala Leu Ala Ser Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Glu1 5 10 15Pro Ile Val Phe Arg Glu Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val20 25 30Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val35 40 45Ala Val Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr Asp Cys Ala Pro Ala Thr Gly50 55 60Met Cys Gln Pro Ile Val Leu Arg Ser Pro Leu Glu Ala Val Asn Met65 70 75 80Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Thr Ala Thr Asn Asn Ala Gln Leu Leu85 90 95Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg Ala Cys Val Lys Asn Met Tyr Ala100 105 110Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala115 120 125Val Pro Ala Ser Met Pro Glu Cys Pro Arg Gln Glu Met Asp Ile Ala130 135 140Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Asn Gln Arg Asp Phe Ala Gln145 150 155 160Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu Met Gly Glu Phe Ala Ser Thr Ser165 170 175Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe180 185 190Thr Phe Thr Glu Phe Lys Asn Ile Leu Asp Pro Gln Ser Leu Val Asp195 200 205Pro Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Ile Arg210 215 220Thr Val Met Glu Glu Leu Phe His Ser Lys Asn Gly Ser Arg Lys Ser225 230 235 240Ala Lys Lys Ile Leu Leu Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Arg Asp245 250 255Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Ala Gly Ile260 265 270Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe Gln Glu Pro Thr Ala275 280 285Leu Lys Glu Leu Asn Thr Ile Gly Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val290 295 300Phe Lys Val Gly Asn Phe Ala Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Leu305 310 315 320Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu Gly Thr Gln Ser Arg Ser Ser Ser325 330 335Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Thr340 345 350Ser Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala Xaa Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly355 360 365Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Thr Arg Pro Thr Phe Ile Asn Met370 375 380Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr385 390 395 400Ala Val Ala Phe Trp Lys Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro405 410 415Arg His Gln His Thr Gly Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ala Arg420 425 430His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr435 440 445Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp Val Asp Arg Asp Gly Ser Xaa450 455 460Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly465 470 475 480Gly Gln Val Ser Val Xaa Pro Val Pro Gly Val Arg Gly Arg Trp Gln485 490 495Cys Glu Ala Thr Leu His Gly Glu Gln Xaa His Pro Trp Gly Arg Phe500 505 510Gly Val Ala Leu Thr Val Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Asn Leu Ala515 520 525Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly Glu Glu Glu Ser Arg Gly Ala Val530 535 540Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ile Met Pro Ser Pro Ser545 550 555 560Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly565 570 575Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp580 585 590Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro595 600 605Leu Leu Lys Val Glu Leu Ser Ile Arg Phe Ala Pro Met Glu Val Ala610 615 620Lys Ala Val Tyr Gln Cys Trp Glu Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala625 630 635 640Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr Val His Lys Gly Ser Pro Asp Leu645 650 655Leu Gly Asn Val Gln Gly Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro660 665 670Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr675 680 685Leu Thr Gly Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Val690 695 700Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Ala Val Ser Pro Ile Ile705 710 715 720Leu Arg Leu Asn Phe Ser Leu Val Arg Asp Ser Ala Ser Pro Arg Asn725 730 735Leu His Pro Val Leu Ala Val Gly Ser Gln Asp His Ile Thr Ala Ser740 745 750Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asp755 760 765Leu Gly Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Val Val Gly770 775 780Gly Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu785 790 795 800Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Val Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser805 810 815Tyr Arg Arg Val Thr Gly Thr Gln Gln Pro His Gln Tyr Pro Leu Arg820 825 830Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Ala Ala Gln Glu Asp Leu Arg Ser Ser835 840 845Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Thr Thr850 855 860Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg865 870 875 880Leu Leu Leu Arg Ala Lys Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Asp Thr885 890 895Asn Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr900 905 910Thr Leu Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Asn His Val Asn Phe Ser915 920 925Ser Ser His Gly Gly Arg Arg Gln Glu Ala Ala His Arg Tyr Arg Val930 935 940Asn Asn Leu Ser Pro Leu Lys Leu Ala Val Arg Val Asn Phe Trp Val945 950 955 960Pro Val Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Ser Ser965 970 975Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Met Lys Pro Pro Gln Asn980 985 990Pro Asp Phe Leu Thr Gln Ile Gln Arg Arg Ser Val Leu Asp Cys Ser995 10001005Ile Ala Asp Cys Leu His Ser Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Asp Ile0Gln Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Arg Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp51040Val Ser Gln Thr Leu Gln Glu Lys Val Leu Leu Val Ser Glu Ala Glu5Ile Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala0Phe Leu Arg Ala Gln Val Glu Thr Thr Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr5Glu Pro Ile Phe Leu Val Ala Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu0Leu Ala Leu Ile Thr Val Val Leu Tyr Lys Leu Gly Xaa Xaa Lys Arg51120Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Gly Lys Ala Ala Asp Pro Val Thr Ala5Gly Gln Ala Asp Phe Gly Cys Glu Thr Pro Pro Tyr Leu Val Ser0(2)SEQ ID NO38信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO38序列描述GTCCAAGCTG TCATGGGCCA G 21(2)SEQ ID NO39信息(i)序列特征(A)長度23個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO39序列描述GTCCAGCAGA CTGAAGAGCA CGG 23(2)SEQ ID NO40信息(i)序列特征(A)長度18個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO40序列描述TGTAAAACGA CGGCCAGT 18(2)SEQ ID NO41信息(i)序列特征(A)長度19個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO41序列描述GGAAACAGCT ATGACCATG19(2)SEQ ID NO42信息(i)序列特征(A)長度22個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO42序列描述GGACATGTTC ACTGCCTCTA GG22(2)SEQ ID NO43信息(i)序列特征(A)長度25個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO43序列描述GGCGGACAGT CAGACGACTG TCCTG 25(2)SEQ ID NO44信息(i)序列特征(A)長度38個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO44序列描述CTGGTTCGGC CCACCTCTGA AGGTTCCAGA ATCGATAG 38(2)SEQ ID NO45信息(i)序列特征(A)長度3519個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置52..3519(xi)SEQ ID NO45序列描述GCTTTCTGAA GGTTCCAGAA TCGATAGTGA ATTCGTGGGC ACTGCTCAGA T ATG GTC 57Met Val1CGT GGA GTT GTG ATC CTC CTG TGT GGC TGG GCC CTG GCT TCC TGT CAT 105Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser Cys His5 10 15GGG TCT AAC CTG GAT GTG GAG AAG CCC GTC GTG TTC AAA GAG GAT GCA 153Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu Asp Ala20 25 30GCC AGC TTC GGA CAG ACT GTG GTG CAG TTT GGT GGA TCT CGA CTC GTG 201Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val35 40 45 50GTG GGA GCC CCT CTG GAG GCG GTG GCA GTC AAC CAA ACA GGA CAG TCG 249Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly Gln Ser55 60 65TCT GAC TGT CCG CCT GCC ACT GGC GTG TGC CAG CCC ATC TTA CTG CAC 297Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu Leu His70 75 80ATT CCC CTA GAG GCA GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCT CTG GTG GCT 345Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Ala85 90 95GAC ACC AAT AAC TCC CAG TTG CTG GCT TGT GGT CCA ACT GCA CAG AGA 393Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg100 105 110GCT TGT GCA AAG AAC ATG TAT GCA AAA GGT TCC TGC CTC CTT CTG GGC 441Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly115 120 125 130TCC AGC TTG CAG TTC ATC CAG GCA ATC CCT GCT ACC ATG CCA GAG TGT 489Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro Glu Cys135 140 145CCA GGA CAA GAG ATG GAC ATT GCT TTC CTG ATT GAT GGC TCC GGC AGC 537Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser150 155 160ATT GAT CAA AGT GAC TTT ACC CAG ATG AAG GAC TTC GTC AAA GCT TTG585Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu165 170 175ATG GGC CAG TTG GCG AGC ACC AGC ACC TCG TTC TCC CTG ATG CAA TAC633Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met Gln Tyr180 185 190TCA AAC ATC CTG AAG ACT CAT TTT ACC TTC ACG GAA TTC AAG AGC AGC681Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys Ser Ser195 200 205 210CTG AGC CCT CAG AGC CTG GTG GAT GCC ATC GTC CAG CTC CAA GGC CTG729Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu215 220 225ACG TAC ACA GCC TCG GGC ATC CAG AAA GTG GTG AAA GAG CTA TTT CAT777Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu Phe His230 235 240AGC AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATA CTA ATT GTC ATC825Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile245 250 255ACA GAT GGG CAG AAA TTC AGA GAC CCC CTG GAG TAT AGA CAT GTC ATC873Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His Val Ile260 265 270CCT GAA GCA GAG AAA GCT GGG ATC ATT CGC TAT GCT ATA GGG GTG GGA921Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly275 280 285 290GAT GCC TTC CGG GAA CCC ACT GCC CTA CAG GAG CTG AAC ACC ATT GGC969Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr Ile Gly295 300 305TCA GCT CCC TCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GGC AAT TTT GTA GCA 1017Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe Val Ala310 315 320CTT CGC AGC ATC CAG CGG CAA ATT CAG GAG AAA ATC TTT GCC ATT GAA 1065Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu325 330 335GGA ACC GAA TCA AGG TCA AGT AGT TCC TTT CAG CAC GAG ATG TCA CAA 1113Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln340 345 350GAA GGT TTC AGC TCA GCT CTC TCA ATG GAT GGA CCA GTT CTG GGG GCT 1161Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala355 360 365 370GTG GGA GGC TTC AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC TTG TAC CCC TCA AAT 1209Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Ser Asn375 380 385ATG AGA TCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAC GAG GAT ATG AGG 1257Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp Met Arg390 395 400GAC GCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GCA CTG GCC TTT TGG AAG GGG GTC 1305Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys Gly Val405 410 415CAC AGC CTG ATC CTG GGG GCC CCT CGC CAC CAG CAC ACG GGG AAG GTT 1353His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly Lys Val420 425 430GTC ATC TTT ACC CAG GAA TCC AGG CAC TGG AGG CCC AAG TCT GAA GTC 1401Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val435 440 445 450AGA GGG ACA CAG ATC GGC TCC TAC TTT GGG GCA TCT CTC TGT TCT GTG 1449Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val455 460 465GAC ATG GAT AGA GAT GGC AGC ACT GAC CTG GTC CTG ATT GGA GTC CCC 1497Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly Val Pro470 475 480CAT TAC TAT GAG CAC ACC CGA GGG GGG CAG GTG TCG GTG TGC CCC ATG 1545His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Met485 490 495CCT GGT GTG AGG AGC AGG TGG CAT TGT GGG ACC ACC CTC CAT GGG GAG 1593Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His Gly Glu500 505 510CAG GGC CAT CCT TGG GGC CGC TTT GGG GCG GCT CTG ACA GTG CTA GGG 1641Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly515 520 525 530GAC GTG AAT GGG GAC AGT CTG GCG GAT GTG GCT ATT GGT GCA CCC GGA 1689Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly535 540 545GAG GAG GAG AAC AGA GGT GCT GTC TAC ATA TTT CAT GGA GCC TCG AGA 1737Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg550 555 560CAG GAC ATC GCT CCC TCG CCT AGC CAG CGG GTC ACT GGC TCC CAG CTC 1785Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu565 570 575TTC CTG AGG CTC CAA TAT TTT GGG CAG TCA TTA AGT GGG GGT CAG GAC 1833Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp580 585 590CTT ACA CAG GAT GGC CTG GTG GAC CTG GCC GTG GGA GCC CAG GGG CAC 1881Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His595 600 605 610GTG CTG CTG CTT AGG AGT CTG CCT TTG CTG AAA GTG GGG ATC TCC ATT 1929Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile Ser Ile615 620 625AGA TTT GCC CCC TCA GAG GTG GCA AAG ACT GTG TAC CAG TGC TGG GGA 1977Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys Trp Gly630 635 640AGG ACT CCC ACT GTC CTC GAA GCT GGA GAG GCC ACC GTC TGT CTC ACT 2025Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr645 650 655GTC CGC AAA GGT TCA CCT GAC CTG TTA GGT GAT GTC CAA AGC TCT GTC 2073Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser Ser Val660 665 670AGG TAT GAT CTG GCG TTG GAT CCG GGC CGT CTG ATT TCT CGT GCC ATT 2121Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile675 680 685 690TTT GAT GAG ACG AAG AAC TGC ACT TTG ACC CGA AGG AAG ACT CTG GGG 2169Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly695 700 705CTT GGT GAT CAC TGC GAA ACA ATG AAG CTG CTT TTG CCA GAC TGT GTG 2217Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val710 715 720GAG GAT GCA GTG ACC CCT ATC ATC CTG CGC CTT AAC TTA TCC CTG GCA 2265Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser Leu Ala725 730 735GGG GAC TCT GCT CCA TCC AGG AAC CTT CGT CCT GTG CTG GCT GTG GGC 2313Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val Gly740 745 750TCA CAA GAC CAT GTA ACA GCT TCT TTC CCG TTT GAG AAG AAC TGT GAG 2361Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn Cys Glu755 760 765 770GGG AAC CTG GGC GTC AGC TTC AAC TTC TCA GGC CTG CAG GTC TTG GAG 2409Gly Ash Leu Gly Val Ser Phe Ash Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Glu775 780 785GTA GGA AGC TCC CCA GAG CTC ACT GTG ACA GTA ACA GTT TGG AAT GAG 2457Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu790 795 800GGT GAG GAC AGC TAT GGA ACC TTA ATC AAG TTC TAC TAC CCA GCA GAG 2505Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Glu805 810 815CTA TCT TAC CGA CGG GTG ACA AGA GCC CAG CAA CCT CAT CCG TAC CCA 2553Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg Ala Gln Gln Pro His Pro Tyr Pro820 825 830CTA CGC CTG GCA TGT GAG GCT GAG CCC ACG GGC CAG GAG AGC CTG AGG 2601Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Thr Gly Gln Glu Ser Leu Arg835 840 845 850AGC AGC AGC TGT AGC ATC AAT CAC CCC ATC TTC CGA GAA GGT GCC AAG 2649Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys855 860 865GCC ACC TTC ATG ATC ACA TTT GAT GTC TCC TAC AAG GCC TTC CTG GGA 2697Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly870 875 880GAC AGG TTG CTT CTG AGG GCC AGC GCA AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT 2745Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro885 890 895GAA ACC AGC AAG ACT GCC TTC CAG CTG GAG CTT CCG GTG AAG TAC ACG 2793Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr900 905 910GTC TAT ACC GTG ATC AGT AGG CAG GAA GAT TCT ACC AAG CAT TTC AAC 2841Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Lys His Phe Asn915 920 925 930TTC TCA TCT TCC CAC GGG GAG AGA CAG AAA GAG GCC GAA CAT CGA TAT 2889Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg Gln Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr935 940 945CGT GTG AAT AAC CTG AGT CCA TTG ACG CTG GCC ATC AGC GTT AAC TTC 2937Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu Thr Leu Ala Ile Ser Val Asn Phe950 955 960TGG GTC CCC ATC CTT CTG AAT GGT GTG GCC GTG TGG GAT GTG ACT CTG 2985Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu965 970 975AGG AGC CCA GCA CAG GGT GTC TCC TGT GTG TCA CAG AGG GAA CCT CCT 3033Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Arg Glu Pro Pro980 985 990CAA CAT TCC GAC CTT CTG ACC CAG ATC CAA GGA CGC TCT GTG CTG GAC 3081Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln Ile Gln Gly Arg Ser Val Leu Asp995 0TGC GCC ATC GCC GAC TGC CTG CAC CTC CGC TGT GAC ATC CCC TCC TTG 3129Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His Leu Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu5GGC ACC CTG GAT GAG CTT GAC TTC ATT CTG AAG GGC AAC CTC AGC TTC 3177Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe0GGC TGG ATC AGT CAG ACA TTG CAG AAA AAG GTG TTG CTC CTG AGT GAG 3225Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln Lys Lys Val Leu Leu Leu Ser Glu5GCT GAA ATC ACA TTC AAC ACA TCT GTG TAT TCC CAG CTG CCG GGA CAG 3273Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln0GAG GCA TTT CTG AGA GCC CAG GTG TCA ACG ATG CTA GAA GAA TAC GTG 3321Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val Ser Thr Met Leu Glu Glu Tyr Val51090GTC TAT GAG CCC GTC TTC CTC ATG GTG TTC AGC TCA GTG GGA GGT CTG 3369Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met Val Phe Ser Ser Val Gly Gly Leu5CTG TTA CTG GCT CTC ATC ACT GTG GCG CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC 3417Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe0AAA CGT CAG TAT AAA GAG ATG CTG GAT CTA CCA TCT GCA GAT CCT GAC 3465Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Leu Pro Ser Ala Asp Pro Asp5CCA GCC GGC CAG GCA GAT TCC AAC CAT GAG ACT CCT CCA CAT CTC ACG 3513Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn His Glu Thr Pro Pro His Leu Thr0TCC TAG 3519Ser1155(2)SEQ ID NO46資料(i)序列特征(A)長度1155個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO46序列描述Met Val Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser1 5 10 15Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu20 25 30Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg35 40 45Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly50 55 60Gln Ser Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu65 70 75 80Leu His Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu85 90 95Val Ala Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala100 105 110Gln Arg Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu115 120 125Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro130 135 140Glu Cys Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser145 150 155 160Gly Ser Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys165 170 175Ala Leu Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met180 185 190Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys195 200 205Ser Ser Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln210 215 220Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu225 230 235 240Phe His Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile245 250 255Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His260 265 270Val Ile Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly275 280 285Val Gly Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr290 295 300Ile Gly Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305 310 315 320Val Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala325 330 335Ile Glu Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met340 345 350Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu355 360 365Gly Ala Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro370 375 380Ser Asn Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp385 390 395 400Met Arg Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys405 410 415Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly420 425 430Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser435 440 445Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys450 455 460Ser Val Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly465 470 475 480Val Pro His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys485 490 495Pro Met Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His500 505 510Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val515 520 525Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala530 535 540Pro Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545 550 555 560Ser Arg Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser565 570 575Gln Leu Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly580 585 590Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln595 600 605Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile610 615 620Ser Ile Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys625 630 635 640Trp Gly Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys645 650 655Leu Thr Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser660 665 670Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg675 680 685Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr690 695 700Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp705 710 715 720Cys Val Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser725 730 735Leu Ala Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala740 745 750Val Gly Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn755 760 765Cys Glu Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln Val770 775 780Leu Glu Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Trp785 790 795 800ASn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro805 810 815Ala Glu Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg Ala Gln Gln Pro His Pro820 825 830Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Thr Gly Gln Glu Ser835 840 845Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser lle Asn His Pro Ile Phe Arg Glu Gly850 855 860Ala Lys Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala Phe865 870 875 880Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn885 890 895Lys Pro Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val Lys900 905 910Tyr Thr Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Lys His915 920 925Phe Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg Gln Lys Glu Ala Glu His930 935 940Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu Thr Leu Ala Ile Ser Val945 950 955 960ASn Phe Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp Val965 970 975Thr Leu Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Arg Glu980 985 990Pro Pro Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln Ile Gln Gly Arg Ser Val995 10001005Leu Asp Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His Leu Arg Cys Asp Ile Pro0Ser Leu Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Lys Gly Asn Leu51040Ser Phe Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln Lys Lys Val Leu Leu Leu5Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu Pro0Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val Ser Thr Met Leu Glu Glu5Tyr Val Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met Val Phe Ser Ser Val Gly0Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val Ala Leu Tyr Lys Leu Gly51120Phe Phe Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Leu Pro Ser Ala Asp5Pro Asp Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn His Glu Thr Pro Pro His0Leu Thr Ser1155(2)SEQ ID NO47信息(i)序列特征(A)長度49個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO47序列描述AGTTACGGAT CCGGCACCAT GACCTTCGGC ACTGTGATCC TCCTGTGTG49(2)SEQ ID NO48信息(i)序列特征
(A)長度19個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO48序列描述GCTGGACGAT GGCATCCAC 19(2)SEQ ID NO49信息(i)序列特征(A)長度24個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO49序列描述GTAGAGTTAC GGATCCGGCA CCAT 24(2)SEQ ID NO50信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO50序列描述GCAGCCAGCT TCGGACAGAC 20(2)SEQ ID NO51信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA
(xi)SEQ ID NO51序列描述CCATGTCCAC AGAACAGAGA G 21(2)SEQ ID NO52信息(i)序列特征(A)長度3803個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置1..3486(xi)SEQ ID NO52序列描述ATG GTC CGT GGA GTT GTG ATC CTC CTG TGT GGC TGG GCC CTG GCT TCC 48Met Val Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser1 5 10 15TGT CAT GGG TCT AAC CTG GAT GTG GAG AAG CCC GTC GTG TTC AAA GAG 96Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu20 25 30GAT GCA GCC AGC TTC GGA CAG ACT GTG GTG CAG TTT GGT GGA TCT CGA144Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg35 40 45CTC GTG GTG GGA GCC CCT CTG GAG GCG GTG GCA GTC AAC CAA ACA GGA192Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly50 55 60CAG TCG TCT GAC TGT CCG CCT GCC ACT GGC GTG TGC CAG CCC ATC TTA240Gln Ser Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu65 70 75 80CTG CAC ATT CCC CTA GAG GCA GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCT CTG288Leu His Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu85 90 95GTG GCT GAC ACC AAT AAC TCC CAG TTG CTG GCT TGT GGT CCA ACT GCA336Val Ala Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala100 105 110CAG AGA GCT TGT GCA AAG AAC ATG TAT GCA AAA GGT TCC TGC CTC CTT384Gln Arg Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu115 120 125CTG GGC TCC AGC TTG CAG TTC ATC CAG GCA ATC CCT GCT ACC ATG CCA432Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro130 135 140GAG TGT CCA GGA CAA GAG ATG GAC ATT GCT TTC CTG ATT GAT GGC TCC 480Glu Cys Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser145 150 155 160GGC AGC ATT GAT CAA AGT GAC TTT ACC CAG ATG AAG GAC TTC GTC AAA 528Gly Ser Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys165 170 175GCT TTG ATG GGC CAG TTG GCG AGC ACC AGC ACC TCG TTC TCC CTG ATG 576Ala Leu Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met180 185 190CAA TAC TCA AAC ATC CTG AAG ACT CAT TTT ACC TTC ACG GAA TTC AAG 624Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys195 200205AGC AGC CTG AGC CCT CAG AGC CTG GTG GAT GCC ATC GTC CAG CTC CAA 672Ser Ser Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln210 215 220GGC CTG ACG TAC ACA GCC TCG GGC ATC CAG AAA GTG GTG AAA GAG CTA 720Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu225 230 235 240TTT CAT AGC AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATA CTA ATT 768Phe His Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile245 250 255GTC ATC ACA GAT GGG CAG AAA TTC AGA GAC CCC CTG GAG TAT AGA CAT 816Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His260 265 270GTC ATC CCT GAA GCA GAG AAA GCT GGG ATC ATT CGC TAT GCT ATA GGG 864Val Ile Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly275 280 285GTG GGA GAT GCC TTC CGG GAA CCC ACT GCC CTA CAG GAG CTG AAC ACC 912Val Gly Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr290 295 300ATT GGC TCA GCT CCC TCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GGC AAT TTT 960Ile Gly Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305 310 315 320GTA GCA CTT CGC AGC ATC CAG CGG CAA ATT CAG GAG AAA ATC TTT GCC 1008Val Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala325 330 335ATT GAA GGA ACC GAA TCA AGG TCA AGT AGT TCC TTT CAG CAC GAG ATG 1056Ile Glu Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met340 345 350TCA CAA GAA GGT TTC AGC TCA GCT CTC TCA ATG GAT GGA CCA GTT CTG 1104Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu355 360 365GGG GCT GTG GGA GGC TTC AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC TTG TAC CCC 1152Gly Ala Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro370 375 380TCA AAT ATG AGA TCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAC GAG GAT 1200Ser Asn Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp385 390 395 400ATG AGG GAC GCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GCA CTG GCC TTT TGG AAG 1248Met Arg Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys405 410 415GGG GTC CAC AGC CTG ATC CTG GGG GCC CCT CGC CAC CAG CAC ACG GGG 1296Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly420 425 430AAG GTT GTC ATC TTT ACC CAG GAA TCC AGG CAC TGG AGG CCC AAG TCT 1344Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser435 440 445GAA GTC AGA GGG ACA CAG ATC GGC TCC TAC TTT GGG GCA TCT CTC TGT 1392Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys450 455 460TCT GTG GAC ATG GAT AGA GAT GGC AGC ACT GAC CTG GTC CTG ATT GGA 1440Ser Val Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly465 470 475 480GTC CCC CAT TAC TAT GAG CAC ACC CGA GGG GGG CAG GTG TCG GTG TGC 1488Val Pro His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys485 490 495CCC ATG CCT GGT GTG AGG AGC AGG TGG CAT TGT GGG ACC ACC CTC CAT 1536Pro Met Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His500 505 510GGG GAG CAG GGC CAT CCT TGG GGC CGC TTT GGG GCG GCT CTG ACA GTG 1584Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val515 520 525CTA GGG GAC GTG AAT GGG GAC AGT CTG GCG GAT GTG GCT ATT GGT GCA 1632Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala530 535 540CCC GGA GAG GAG GAG AAC AGA GGT GCT GTC TAC ATA TTT CAT GGA GCC 1680Pro Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545 550 555 560TCG AGA CAG GAC ATC GCT CCC TCG CCT AGC CAG CGG GTC ACT GGC TCC 1728Ser Arg Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser565 570 575CAG CTC TTC CTG AGG CTC CAA TAT TTT GGG CAG TCA TTA AGT GGG GGT 1776Gln Leu Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly580 585 590CAG GAC CTT ACA CAG GAT GGC CTG GTG GAC CTG GCC GTG GGA GCC CAG 1824Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln595 600 605GGG CAC GTG CTG CTG CTT AGG AGT CTG CCT TTG CTG AAA GTG GGG ATC 1872Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile610 615 620TCC ATT AGA TTT GCC CCC TCA GAG GTG GCA AAG ACT GTG TAC CAG TGC 1920Ser Ila Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys625 630 635 640TGG GGA AGG ACT CCC ACT GTC CTC GAA GCT GGA GAG GCC ACC GTC TGT 1968Trp Gly Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys645 650 655CTC ACT GTC CGC AAA GGT TCA CCT GAC CTG TTA GGT GAT GTC CAA AGC 2016Leu Thr Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser660 665 670TCT GTC AGG TAT GAT CTG GCG TTG GAT CCG GGC CGT CTG ATT TCT CGT 2064Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg675 680 685GCC ATT TTT GAT GAG ACG AAG AAC TGC ACT TTG ACC CGA AGG AAG ACT 2112Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr690 695 700CTG GGG CTT GGT GAT CAC TGC GAA ACA ATG AAG CTG CTT TTG CCA GAC 2160Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp705 710 715 720TGT GTG GAG GAT GCA GTG ACC CCT ATC ATC CTG CGC CTT AAC TTA TCC 2208Cys Val Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser725 730 735CTG GCA GGG GAC TCT GCT CCA TCC AGG AAC CTT CGT CCT GTG CTG GCT 2256Leu Ala Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala740 745 750GTG GGC TCA CAA GAC CAT GTA ACA GCT TCT TTC CCG TTT GAG AAG AAC 2304Val Gly Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn755 760 765TGT AAG CAG GAG CTC CTG TGT GAG GGG AAC CTG GGC GTC AGC TTC AAC 2352Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn770 775 780TTC TCA GGC CTG CAG GTC TTG GAG GTA GGA AGC TCC CCA GAG CTC ACT 2400Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Glu Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr785 790 795 800GTG ACA GTA ACA GTT TGG AAT GAG GGT GAG GAC AGC TAT GGA ACC TTA 2448Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu805 810 815ATC AAG TTC TAC TAC CCA GCA GAG CTA TCT TAC CGA CGG GTG ACA AGA 2496Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Glu Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg820 825 830GCC CAG CAA CCT CAT CCG TAC CCA CTA CGC CTG GCA TGT GAG GCT GAG 2544Ala Gln Gln Pro His Pro Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu835 840 845CCC ACG GGC CAG GAG AGC CTG AGG AGC AGC AGC TGT AGC ATC AAT CAC 2592Pro Thr Gly Gln Glu Ser Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His850 855 860CCC ATC TTC CGA GAA GGT GCC AAG GCC ACC TTC ATG ATC ACA TTT GAT 2640Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp865 870 875 880GTC TCC TAC AAG GCC TTC CTG GGA GAC AGG TTG CTT CTG AGG GCC AGC 2688Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser885 890 895GCA AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT GAA ACC AGC AAG ACT GCC TTC CAG 2736Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lye Pro Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln900 905 910CTG GAG CTT CCG GTG AAG TAC ACG GTC TAT ACC GTG ATC AGT AGG CAG 2784Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln915 920 925GAA GAT TCT ACC AAG CAT TTC AAC TTC TCA TCT TCC CAC GGG GAG AGA 2832Glu Asp Ser Thr Lys His Phe Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg930 935 940CAG AAA GAG GCC GAA CAT CGA TAT CGT GTG AAT AAC CTG AGT CCA TTG 2880Gln Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu945 950 955 960ACG CTG GCC ATC AGC GTT AAC TTC TGG GTC CCC ATC CTT CTG AAT GGT 2928Thr Leu Ala Ile Ser Val Asn Phe Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly965 970 975GTG GCC GTG TGG GAT GTG ACT CTG AGG AGC CCA GCA CAG GGT GTC TCC 2976Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser980 985 990TGT GTG TCA CAG AGG GAA CCT CCT CAA CAT TCC GAC CTT CTG ACC CAG 3024Cys Val Ser Gln Arg Glu Pro Pro Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln995 10001005ATC CAA GGA CGC TCT GTG CTG GAC TGC GCC ATC GCC GAC TGC CTG CAC 3072Ile Gln Gly Arg Ser Val Leu Asp Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His0CTC CGC TGT GAC ATC CCC TCC TTG GGC ACC CTG GAT GAG CTT GAC TTC 3120Leu Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe51040ATT CTG AAG GGC AAC CTC AGC TTC GGC TGG ATC AGT CAG ACA TTG CAG 3168Ile Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln5AAA AAG GTG TTG CTC CTG AGT GAG GCT GAA ATC ACA TTC AAC ACA TCT 3216Lys Lys Val Leu Leu Leu Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser0GTG TAT TCC CAG CTG CCG GGA CAG GAG GCA TTT CTG AGA GCC CAG GTG 3264Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val5TCA ACG ATG CTA GAA GAA TAC GTG GTC TAT GAG CCC GTC TTC CTC ATG 3312Ser Thr Met Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met0GTG TTC AGC TCA GTG GGA GGT CTG CTG TTA CTG GCT CTC ATC ACT GTG 3360Val Phe Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val51120GCG CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAA CGT CAG TAT AAA GAG ATG CTG 3408Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu5GAT CTA CCA TCT GCA GAT CCT GAC CCA GCC GGC CAG GCA GAT TCC AAC 3456Asp Leu Pro Ser Ala Asp Pro Asp Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn0CAT GAG ACT CCT CCA CAT CTC ACG TCC TAGGAATCTA CTTTCCTGTA 3503His Glu Thr Pro Pro His Leu Thr Ser11551160TATCTCCACA ATTACGAGAT TGGTTTTGCT TTTGCCTATG AATCTACTGG CATGGGAACA3563AGTTCTCTTC AGCTCTGGGC TAGCCTGGGA AACTTCCCAG AAATGATGCC CTACCTCCTG3623AGCTGGGAGA TTTTTATGGT TTGCCCATGT GTCAGATTTC AGTGCTGATC CACTTTTTTT3683GCAAGAGCAG GAATGGGGTC AGCATAAATT TACATATGGA TAAGAACTAA CACAAGACTG3743AGTAATATGC TCAATATTCA ATGTATTGCT TGTATAAATT TTTAAAAAAT AAAATGAAAN3803(2)SEQ ID NO53信息(i)序列特征(A)長度1161個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(II)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO53序列描述Met Val Arg Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Ala Leu Ala Ser1 5 10 15Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Lys Pro Val Val Phe Lys Glu20 25 30Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg35 40 45Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly50 55 60Gln Ser Ser Asp Cys Pro Pro Ala Thr Gly Val Cys Gln Pro Ile Leu65 70 75 80Leu His Ile Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu85 90 95Val Ala Asp Thr Asn Asn Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala100 105 110Gln Arg Ala Cys Ala Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu115 120 125Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Ile Pro Ala Thr Met Pro130 135 140Glu Cys Pro Gly Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser145 150 155 160Gly Ser Ile Asp Gln Ser Asp Phe Thr Gln Met Lys Asp Phe Val Lys165 170 175Ala Leu Met Gly Gln Leu Ala Ser Thr Ser Thr Ser Phe Ser Leu Met180 185 190Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lye195 200 205Ser Ser Leu Ser Pro Gln Ser Leu Val Asp Ala Ile Val Gln Leu Gln210 215 220Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Ser Gly Ile Gln Lys Val Val Lys Glu Leu225 230 235 240Phe His Ser Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile245 250 255Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Phe Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Arg His260 265 270Val Ile Pro Glu Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly275 280 285Val Gly Asp Ala Phe Arg Glu Pro Thr Ala Leu Gln Glu Leu Asn Thr290 295 300Ile Gly Ser Ala Pro Ser Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305 310 315 320Val Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Ile Gln Glu Lys Ile Phe Ala325 330 335Ile Glu Gly Thr Glu Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met340 345 350Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Ser Met Asp Gly Pro Val Leu355 360 365Gly Ala Val Gly Gly Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro370 375 380Ser Asn Met Arg Ser Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Glu Asp385 390 395 400Met Arg Asp Ala Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Leu Ala Phe Trp Lys405 410 415Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly420 425 430Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ser Arg His Trp Arg Pro Lys Ser435 440 445Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys450 455 460Ser Val Asp Met Asp Arg Asp Gly Ser Thr Asp Leu Val Leu Ile Gly465 470 475 480Val Pro His Tyr Tyr Glu His Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys485 490 495Pro Met Pro Gly Val Arg Ser Arg Trp His Cys Gly Thr Thr Leu His500 505 510Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val515 520 525Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Ser Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala530 535 540Pro Gly Glu Glu Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545 550 555 560Ser Arg Gln Asp Ile Ala Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser565 570 575Gln Leu Phe Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly580 585 590Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln595 600 605Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Gly Ile610 615 620Ser Ile Arg Phe Ala Pro Ser Glu Val Ala Lys Thr Val Tyr Gln Cys625 630 635 640Trp Gly Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys645 650 655Leu Thr Val Arg Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asp Val Gln Ser660 665 670Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg675 680 685Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr690 695 700Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Met Lys Leu Leu Leu Pro Asp705 710 715 720Cys Val Glu Asp Ala Val Thr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Leu Ser725 730 735Leu Ala Gly Asp Ser Ala Pro Ser Arg Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala740 745 750Val Gly Ser Gln Asp His Val Thr Ala Ser Phe Pro Phe Glu Lys Asn755 760 765Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asn Leu Gly Val Ser Phe Asn770 775 780Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Glu Val Gly Ser Ser Pro Glu Leu Thr785 790 795 800Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu805 810 815Ile Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Glu Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Arg820 825 830Ala Gln Gln Pro His Pro Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu835 840 845Pro Thr Gly Gln Glu Ser Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His850 855 860Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Ala Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp865 870 875 880Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Ser885 890 895Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Glu Thr Ser Lys Thr Ala Phe Gln900 905 910Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Val Ile Ser Arg Gln915 920 925Glu Asp Ser Thr Lys His Phe Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Glu Arg930 935 940Gln Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu945 950 955 960Thr Leu Ala Ile Ser Val Asn Phe Trp Val Pro Ile Leu Leu Asn Gly965 970 975Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Arg Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser980 985 990Cys Val Ser Gln Arg Glu Pro Pro Gln His Ser Asp Leu Leu Thr Gln995 10001005Ile Gln Gly Arg Ser Val Leu Asp Cys Ala Ile Ala Asp Cys Leu His0Leu Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Gly Thr Leu Asp Glu Leu Asp Phe51040Ile Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Ile Ser Gln Thr Leu Gln5Lys Lys Val Leu Leu Leu Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asn Thr Ser0Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val5Ser Thr Met Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Val Phe Leu Met0Val Phe Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val51120Ala Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Mer Leu5Asp Leu Pro Ser Ala Asp Pro Asp Pro Ala Gly Gln Ala Asp Ser Asn0His Glu Thr Pro Pro His Leu Thr Ser11551160(2)SEQ ID NO54信息(i)序列特征(A)長度3597個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性
(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置40..3525(xi)SEQ ID NO54序列描述AGCTTTACAG CTCTCTACTT CTCAGTGCAC TGCTCAGTG ATG GCC GGT GGA GTT 54Met Ala Gly Gly Val1 5GTG ATC CTC CTG TGT GGC TGG GTC CTG GCT TCC TGT CAT GGG TCT AAC102Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Val Leu Ala Ser Cys His Gly Ser Asn10 15 20CTG GAT GTG GAG GAA CCC ATC GTG TTC AGA GAG GAT GCA GCC AGC TTT150Leu Asp Val Glu Glu Pro Ile Val Phe Arg Glu Asp Ala Ala Ser Phe25 30 35GGA CAG ACT GTG GTG CAG TTT GGT GGA TCT CGA CTC GTG GTG GGA GCC198Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala40 45 50CCT CTG GAG GCG GTG GCA GTC AAC CAA ACA GGA CGG TTG TAT GAC TGT246Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly Arg Leu Tyr Asp Cys55 60 65GCA CCT GCC ACT GGC ATG TGC CAG CCC ATC GTA CTG CGC AGT CCC CTA294Ala Pro Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Val Leu Arg Ser Pro Leu70 75 80 85GAG GCA GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCT CTG GTG ACT GCC ACC AAT342Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Val Thr Ala Thr Asn90 95 100AAC GCC CAG TTG CTG GCT TGT GGT CCA ACT GCA CAG AGA GCT TGT GTG390Asn Ala Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala Gln Arg Ala Cys Val105 110 115AAG AAC ATG TAT GCG AAA GGT TCC TGC CTC CTT CTC GGC TCC AGC TTG438Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly Ser Ser Leu120 125 130CAG TTC ATC CAG GCA GTC CCT GCC TCC ATG CCA GAG TGT CCA AGA CAA486Gln Phe Ile Gln Ala Val Pro Ala Ser Met Pro Glu Cys Pro Arg Gln135 140 145GAG ATG GAC ATT GCT TTC CTG ATT GAT GGT TCT GGC AGC ATT AAC CAA534Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Asn Gln150 155 160 165AGG GAC TTT GCC CAG ATG AAG GAC TTT GTC AAA GCT TTG ATG GGA GAG582Arg Asp Phe Ala Gln Met Lys Asp Phe Val Lys Ala Leu Met Gly Glu170 175 180TTT GCG AGC ACC AGC ACC TTG TTC TCC CTG ATG CAA TAC TCG AAC ATC630Phe Ala Ser Thr Ser Thr Leu Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Ile185 190 195CTG AAG ACC CAT TTT ACC TTC ACT GAA TTC AAG AAC ATC CTG GAC CCT 678Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys Asn Ile Leu Asp Pro200 205 210CAG AGC CTG GTG GAT CCC ATT GTC CAG CTG CAA GGC CTG ACC TAC ACA 726Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Gln Gly Leu Thr Tyr Thr215 220 225GCC ACA GGC ATC CGG ACA GTG ATG GAA GAG CTA TTT CAT AGC AAG AAT 774Ala Thr Gly Ile Arg Thr Val Met Glu Glu Leu Phe His Ser Lys Asn230 235 240 245GGG TCC CGT AAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC CTT GTC ATC ACA GAT GGG 822Gly Ser Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Leu Val Ile Thr Asp Gly250 255 260CAG AAA TAC AGA GAC CCC CTG GAG TAT AGT GAT GTC ATT CCC GCC GCA 870Gln Lys Tyr Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile Pro Ala Ala265 270 275GAC AAA GCT GGC ATC ATT CGT TAT GCT ATT GGG GTG GGA GAT GCC TTC 918Asp Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe280 285 290CAG GAG CCC ACT GCC CTG AAG GAG CTG AAC ACC ATT GGC TCA GCT CCC 966Gln Glu Pro Thr Ala Leu Lys Glu Leu Asn Thr Ile Gly Ser Ala Pro295 300 305CCA CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTA GGC AAC TTT GCA GCA CTT CGC AGC 1014Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe Ala Ala Leu Arg Ser310 315 320 325ATC CAG AGG CAA CTT CAG GAG AAA ATC TTC GCC ATT GAG GGA ACT CAA 1062Ile Gln Arg Gln Leu Gln Glu Lys Ile Phe Ala Ile Glu Gly Thr Gln330 335 340TCA AGG TCA AGT AGT TCC TTT CAG CAC GAG ATG TCA CAA GAA GGT TTC 1110Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe345 350 355AGT TCA GCT CTC ACA TCG GAT GGA CCC GTT CTG GGG GCC GTG GGA AGC 1158Ser Ser Ala Leu Thr Ser Asp Gly Pro Val Leu Gly Ala Val Gly Ser360 365 370TTC AGC TGG TCC GGA GGT GCC TTC TTA TAT CCC CCA AAT ACG AGA CCC 1206Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn Thr Arg Pro375 380 385ACC TTT ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGA GAC TCC TAC 1254Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr390 395 400 405CTG GGT TAC TCC ACC GCA GTG GCC TTT TGG AAG GGG GTT CAC AGC CTG 1302Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Val Ala Phe Trp Lys Gly Val His Ser Leu410 415 420ATC CTG GGG GCC CCG CGT CAC CAG CAC ACG GGG AAG GTT GTC ATC TTT 1350Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly Lys Val Val Ile Phe425 430 435ACC CAG GAA GCC AGG CAT TGG AGG CCC AAG TCT GAA GTC AGA GGG ACA 1398Thr Gln Glu Ala Arg His Trp Arg Pro Lys Ser Glu Val Arg Gly Thr440 445 450CAG ATC GGC TCC TAC TTC GGG GCC TCT CTC TGT TCT GTG GAC GTG GAT 1446Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val Asp Val Asp455 460 465AGA GAT GGC AGC ACY GAC CTG GTC CTG ATC GGA GCC CCC CAT TAC TAT 1494Arg Asp Gly Ser Xaa Asp Leu Val Leu Ile Gly Ala Pro His Tyr Tyr470 475 480 485GAG CAG ACC CGA GGG GGG CAG GTC TCA GTG TTC CCC GTG CCC GGT GTG 1542Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Phe Pro Val Pro Gly Val490 495 500AGG GGC AGG TGG CAG TGT GAG GCC ACC CTC CAC GGG GAG CAG GGC CAT 1590Arg Gly Arg Trp Gln Cys Glu Ala Thr Leu His Gly Glu Gln Gly His505 510 515CCT TGG GGC CGC TTT GGG GTG GCT CTG ACA GTG CTG GGG GAC GTA AAC 1638Pro Trp Gly Arg Phe Gly Val Ala Leu Thr Val Leu Gly Asp Val Asn520 525 530GGG GAC AAT CTG GCA GAC GTG GCT ATT GGT GCC CCT GGA GAG GAG GAG 1686Gly Asp Asn Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro G1y Glu Glu Glu535 540 545AGC AGA GGT GCT GTC TAC ATA TTT CAT GGA GCC TCG AGA CTG GAG ATC 1734Ser Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala Ser Arg Leu Glu Ile550 555 560 565ATG CCC TCA CCC AGC CAG CGG GTC ACT GGC TCC CAG CTC TCC CTG AGA 1782Met Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser Gln Leu Ser Leu Arg570 575 580CTG CAG TAT TTT GGG CAG TCA TTG AGT GGG GGT CAG GAC CTT ACA CAG 1830Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly Gln Asp Leu Thr Gln585 590 595GAT GGC CTG GTG GAC CTG GCC GTG GGA GCC CAG GGG CAC GTA CTG CTG 1878Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln Gly His Val Leu Leu600 605 610CTC AGG AGT CTG CCT CTG CTG AAA GTG GAG CTC TCC ATA AGA TTC GCC 1926Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Glu Leu Ser Ile Arg Phe Ala615 620 625CCC ATG GAG GTG GCA AAG GCT GTG TAC CAG TGC TGG GAA AGG ACT CCC 1974Pro Met Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Gln Cys Trp Glu Arg Thr Pro630 635 640 645ACT GTC CTC GAA GCT GGA GAG GCC ACT GTC TGT CTC ACT GTC CAC AAA 2022Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys Leu Thr Val His Lys650 655 660GGC TCA CCT GAC CTG TTA GGT AAT GTC CAA GGC TCT GTC AGG TAT GAT 2070Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asn Val Gln Gly Ser Val Arg Tyr Asp665 670 675CTG GCG TTA GAT CCG GGC CGC CTG ATT TCT CGT GCC ATT TTT GAT GAG2118Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg Ala Ile Phe Asp Glu680 685 690ACT AAG AAC TGC ACT TTG ACG GGA AGG AAG ACT CTG GGG CTT GGT GAT2166Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Gly Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Asp695 700 705CAC TGC GAA ACA GTG AAG CTG CTT TTG CCG GAC TGT GTG GAA GAT GCA2214His Cys Glu Thr Val Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Ala710 715 720 725GTG AGC CCT ATC ATC CTG CGC CTC AAC TTT TCC CTG GTG AGA GAC TCT2262Val Ser Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Phe Ser Leu Val Arg Asp Ser730 735 740GCT TCA CCC AGG AAC CTG CAT CCT GTG CTG GCT GTG GGC TCA CAA GAC2310Ala Ser Pro Arg Asn Leu His Pro Val Leu Ala Val Gly Ser Gln Asp745 750 755CAC ATA ACT GCT TCT CTG CCG TTT GAG AAG AAC TGT AAG CAA GAA CTC2358His Ile Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys Lys Gln Glu Leu760 765 770CTG TGT GAG GGG GAC CTG GGC ATC AGC TTT AAC TTC TCA GGC CTG CAG2406Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Gln775 780 785GTC TTG GTG GTG GGA GGC TCC CCA GAG CTC ACT GTG ACA GTC ACT GTG2454Val Leu Val Val Gly Gly Ser Pro Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val790 795 800 805TGG AAT GAG GGT GAG GAC AGC TAT GGA ACT TTA GTC AAG TTC TAC TAC2502Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu Val Lys Phe Tyr Tyr810 815 820CCA GCA GGG CTA TCT TAC CGA CGG GTA ACA GGG ACT CAG CAA CCT CAT2550Pro Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Gly Thr Gln Gln Pro His825 830 835CAG TAC CCA CTA CGC TTG GCC TGT GAG GCT GAG CCC GCT GCC CAG GAG2598Gln Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu Pro Ala Ala Gln Glu840 845 850GAC CTG AGG AGC AGC AGC TGT AGC ATT AAT CAC CCC ATC TTC CGA GAA2646Asp Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His Pro Ile Phe Arg Glu855 860 865GGT GCA AAG ACC ACC TTC ATG ATC ACA TTC GAT GTC TCC TAC AAG GCC2694Gly Ala Lys Thr Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp Val Ser Tyr Lys Ala870 875 880 885TTC CTA GGA GAC AGG TTG CTT CTG AGG GCC AAA GCC AGC AGT GAG AAT2742Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Lys Ala Ser Ser Glu Asn890 895 900AAT AAG CCT GAT ACC AAC AAG ACT GCC TTC CAG CTG GAG CTC CCA GTG2790Asn Lys Pro Asp Thr Asn Lys Thr Ala Phe Gln Leu Glu Leu Pro Val905 910 915AAG TAC ACC GTC TAT ACC CTG ATC AGT AGG CAA GAA GAT TCC ACC AAC2838Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Leu Ile Ser Arg Gln Glu Asp Ser Thr Asn920 925 930CAT GTC AAC TTT TCA TCT TCC CAC GGG GGG AGA AGG CAA GAA GCC GCA2886His Val Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Gly Arg Arg Gln Glu Ala Ala935 940 945CAT CGC TAT CGT GTG AAT AAC CTG AGT CCA CTG AAG CTG GCC GTC AGA2934His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu Lys Leu Ala Val Arg950 955 960 965GTT AAC TTC TGG GTC CCT GTC CTT CTG AAC GGT GTG GCT GTG TGG GAC2982Val Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly Val Ala Val Trp Asp970 975 980GTG ACT CTG AGC AGC CCA GCA CAG GGT GTC TCC TGC GTG TCC CAG ATG3030Val Thr Leu Ser Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser Cys Val Ser Gln Met985 990 995AAA CCT CCT CAG AAT CCC GAC TTT CTG ACC CAG ATT CAG AGA CGT TCT3078Lys Pro Pro Gln Asn Pro Asp Phe Leu Thr Gln Ile Gln Arg Arg Ser0GTG CTG GAC TGC TCC ATT GCT GAC TGC CTG CAC TTC CGC TGT GAC ATC3126Val Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu His Phe Arg Cys Asp Ile5CCC TCC TTG GAC ATC CAG GAT GAA CTT GAC TTC ATT CTG AGG GGC AAC3174Pro Ser Leu Asp Ile Gln Asp Glu Leu Asp Phe Ile Leu Arg Gly Asn01045CTC AGC TTC GGC TGG GTC AGT CAG ACA TTG CAG GAA AAG GTG TTG CTT3222Leu Ser Phe Gly Trp Val Ser Gln Thr Leu Gln Glu Lys Val Leu Leu0GTG AGT GAG GCT GAA ATC ACT TTC GAC ACA TCT GTG TAC TCC CAG CTG3270Val Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser Val Tyr Ser Gln Leu5CCA GGA CAG GAG GCA TTT CTG AGA GCC CAG GTG GAG ACA ACG TTA GAA3318Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val Glu Thr Thr Leu Glu0GAA TAC GTG GTC TAT GAG CCC ATC TTC CTC GTG GCG GGC AGC TCG GTG3366Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Ile Phe Leu Val Ala Gly Ser Ser Val10951100 1105GGA GGT CTG CTG TTA CTG GCT CTC ATC ACA GTG GTA CTG TAC AAG CTT3414Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val Val Leu Tyr Lys Leu01125GGC TTC TYC AAA CGT CAG TAC AAA GAA ATG CTG GAC GGC AAG GCT GCA3462Gly Phe Xaa Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu Asp Gly Lys Ala Ala0GAT CCT GTC ACA GCC GGC CAG GCA GAT TTC GGC TGT GAG ACT CCT CCA3510Asp Pro Val Thr Ala Gly Gln Ala Asp Phe Gly Cys Glu Thr Pro Pro5TAT CTC GTG AGC TAGGAATCCA CTCTCCTGCC TATCTCTGCA ATGAAGATTG3562Tyr Leu Val Ser1160GTCCTGCCTA TGAGTCTACT GGCATGGGAA CGAGT 3597(2)SEQ ID NO55信息(i)序列特征(A)長度1161個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO55序列描述Met Ala Gly Gly Val Val Ile Leu Leu Cys Gly Trp Val Leu Ala Serl 5 10 15Cys His Gly Ser Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Ile Val Phe Arg Glu20 25 30Asp Ala Ala Ser Phe Gly Gln Thr Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg35 40 45Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Glu Ala Val Ala Val Asn Gln Thr Gly50 55 60Arg Leu Tyr Asp Cys Ala Pro Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Val65 70 75 80Leu Arg Ser Pro Leu Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu85 90 95Val Thr Ala Thr Asn Asn Ala Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Ala100 105 110Gln Arg Ala Cys Val Lys Asn Met Tyr Ala Lys Gly Ser Cys Leu Leu115 120 125Leu Gly Ser Ser Leu Gln Phe Ile Gln Ala Val Pro Ala Ser Met Pro130 135 140Glu Cys Pro Arg Gln Glu Met Asp Ile Ala Phe Leu Ile Asp Gly Ser145 150 155 160Gly Ser Ile Asn Gln Arg Asp Phe Ala Gln Met Lys Asp Phe Val Lys165 170 175Ala Leu Met Gly Glu Phe Ala Ser Thr Ser Thr Leu Phe Ser Leu Met180 185 190Gln Tyr Ser Asn Ile Leu Lys Thr His Phe Thr Phe Thr Glu Phe Lys195 200 205Asn Ile Leu Asp Pro Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Gln210 215 220Gly Leu Thr Tyr Thr Ala Thr Gly Ile Arg Thr Val Met Glu Glu Leu225 230 235 240Phe His Ser Lys Asn Gly Ser Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Leu245 250 255Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Arg Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp260 265 270Val Ile Pro Ala Ala Asp Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly275 280 285Val Gly Asp Ala Phe Gln Glu Pro Thr Ala Leu Lys Glu Leu Asn Thr290 295 300Ile Gly Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Gly Asn Phe305 310 315 320Ala Ala Leu Arg Ser Ile Gln Arg Gln Leu Gln Glu Lys Ile Phe Ala325 330 335Ile Glu Gly Thr Gln Ser Arg Ser Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met340 345 350Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Ala Leu Thr Ser Asp Gly Pro Val Leu355 360 365Gly Ala Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro370 375 380Pro Asn Thr Arg Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp385 390 395 400Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Ala Val Ala Phe Trp Lys405 410 415Gly Val His Ser Leu Ile Leu Gly Ala Pro Arg His Gln His Thr Gly420 425 430Lys Val Val Ile Phe Thr Gln Glu Ala Arg His Trp Arg Pro Lys Ser435 440 445Glu Val Arg Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys450 455 460Ser Val Asp Val Asp Arg Asp Gly Ser Xaa Asp Leu Val Leu Ile Gly465 470 475 480Ala Pro His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Phe485 490 495Pro Val Pro Gly Val Arg Gly Arg Trp Gln Cys Glu Ala Thr Leu His500 505 510Gly Glu Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Val Ala Leu Thr Val515 520 525Leu Gly Asp Val Asn Gly Asp Asn Leu Ala Asp Val Ala Ile Gly Ala530 535 540Pro Gly Glu Glu Glu Ser Arg Gly Ala Val Tyr Ile Phe His Gly Ala545 550 555 560Ser Arg Leu Glu Ile Met Pro Ser Pro Ser Gln Arg Val Thr Gly Ser565 570 575Gln Leu Ser Leu Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ser Leu Ser Gly Gly580 585 590Gln Asp Leu Thr Gln Asp Gly Leu Val Asp Leu Ala Val Gly Ala Gln595 600 605Gly His Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Leu Leu Lys Val Glu Leu610 615 620Ser Ile Arg Phe Ala Pro Met Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Gln Cys625 630 635 640Trp Glu Arg Thr Pro Thr Val Leu Glu Ala Gly Glu Ala Thr Val Cys645 650 655Leu Thr Val His Lys Gly Ser Pro Asp Leu Leu Gly Asn Val Gln Gly660 665 670Ser Val Arg Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Ile Ser Arg675 680 685Ala Ile Phe Asp Glu Thr Lys Asn Cys Thr Leu Thr Gly Arg Lys Thr690 695 700Leu Gly Leu Gly Asp His Cys Glu Thr Val Lys Leu Leu Leu Pro Asp705 710 715 720Cys Val Glu Asp Ala Val Ser Pro Ile Ile Leu Arg Leu Asn Phe Ser725 730 735Leu Val Arg Asp Ser Ala Ser Pro Arg Asn Leu His Pro Val Leu Ala740 745 750Val Gly Ser Gln Asp His Ile Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn755 760 765Cys Lys Gln Glu Leu Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Ile Ser Phe Asn770 775 780Phe Ser Gly Leu Gln Val Leu Val Val Gly Gly Ser Pro Glu Leu Thr785 790 795 800Val Thr Val Thr Val Trp Asn Glu Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Leu805 810 815Val Lys Phe Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser Tyr Arg Arg Val Thr Gly820 825 830Thr Gln Gln Pro His Gln Tyr Pro Leu Arg Leu Ala Cys Glu Ala Glu835 840 845Pro Ala Ala Gln Glu Asp Leu Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ile Asn His850 855 860Pro Ile Phe Arg Glu Gly Ala Lys Thr Thr Phe Met Ile Thr Phe Asp865 870 875 880Val Ser Tyr Lys Ala Phe Leu Gly Asp Arg Leu Leu Leu Arg Ala Lys885 890 895Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Asp Thr Asn Lys Thr Ala Phe Gln900 905 910Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Thr Val Tyr Thr Leu Ile Ser Arg Gln915 920 925Glu Asp Ser Thr Asn His Val Asn Phe Ser Ser Ser His Gly Gly Arg930 935 940Arg Gln Glu Ala Ala His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Pro Leu945 950 955 960Lys Leu Ala Val Arg Val Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly965 970 975Val Ala Val Trp Asp Val Thr Leu Ser Ser Pro Ala Gln Gly Val Ser980 985 990Cys Val Ser Gln Met Lys Pro Pro Gln Asn Pro Asp Phe Leu Thr Gln995 10001005Ile Gln Arg Arg Ser Val Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu His0Phe Arg Cys Asp Ile Pro Ser Leu Asp Ile Gln Asp Glu Leu Asp Phe51040Ile Leu Arg Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Ser Gln Thr Leu Gln5Glu Lys Val Leu Leu Val Ser Glu Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser0Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Leu Arg Ala Gln Val5Glu Thr Thr Leu Glu Glu Tyr Val Val Tyr Glu Pro Ile Phe Leu Val0Ala Gly Ser Ser Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Val51120Val Leu Tyr Lys Leu Gly Xaa Xaa Lys Arg Gln Tyr Lys Glu Met Leu5Asp Gly Lys Ala Ala Asp Pro Val Thr Xaa Gly Gln Ala Asp Phe Gly0Cys Glu Thr Pro Pro Tyr Leu Val Ser11551160(2)SEQ ID NO56信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO56序列描述CCTGTCATGG GTCTAACCTG 20(2)SEQ ID NO57信息(i)序列特征(A)長度19個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO57序列描述AGGTTAGACC CATGACAGG19(2)SEQ ID NO58信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO58序列描述GGCCTTGCAG CTGGACAATG 20(2)SEQ ID NO59信息(i)序列特征(A)長度22個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO59序列描述CCAAAGCTGG CTGCATCCTC TC22(2)SEQ ID NO60信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO60序列描述CCGCCTGCCA CTGGCGTGTG C 21(2)SEQ ID NO61信息(i)序列特征(A)長度22個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO61序列描述CCCAGATGAA GGACTTCGTC AA22(2)SEQ ID NO62信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO62序列描述GCTTGGGATCA TTCGCTATGC 20(2)SEQ ID NO63信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO63序列描述CAATGGATGG ACCAGTTCTG G 21(2)SEQ ID NO64信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO64序列描述CAGATCGGCT CCTACTTTGG 20(2)SEQ ID NO65信息(i)序列特征(A)長度19個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO65序列描述CATGGAGCCT CGAGACAGG19(2)SEQ ID NO66信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO66序列描述CCACTGTCCT CGAAGCTGGA G 21(2)SEQ ID NO67信息(i)序列特征(A)長度26個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO67序列描述CTTCGTCCTG TGCTGGCTGT GGGCTC26(2)SEQ ID NO68信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO68序列描述CGCCTGGCAT GTGAGGCTGA G 21(2)SEQ ID NO69信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO69序列描述CCGTGATCAG TAGGCAGGAA G 21(2)SEQ ID NO70信息(i)序列特征(A)長度18個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO70序列描述GTCACAGAGG GAACCTCC 18(2)SEQ ID NO71信息(i)序列特征(A)長度23個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO71序列描述GCTCCTGAGT GAGGCTGAAA TCA 23(2)SEQ ID NO72信息(i)序列特征(A)長度23個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO72序列描述GAGATGCTGG ATCTACCATC TGC 23(2)SEQ ID NO73信息(i)序列特征(A)長度22個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO73序列描述CTGAGCTGGG AGATTTTTAT GG22(2)SEQ ID NO74信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO74序列描述GTGGATCAGC ACTGAAATCT G 21(2)SEQ ID NO75信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO75序列描述CGTTTGAAGA AGCCAAGCTT G 21(2)SEQ ID NO76信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO76序列描述CACAGCGGAG GTGCAGGCAG 20(2)SEQ ID NO77信息(i)序列特征(A)長度18個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO77序列描述CTCACTGCTT GCGCTGGC18(2)SEQ ID NO78信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO78序列描述CGGTAAGATA GCTCTGCTGG 20(2)SEQ ID NO79信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO79序列描述GAGCCCACAG CCAGCACAGG 20(2)SEQ ID NO80信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型 DNA(xi)SEQ ID NO80序列描述GATCCAACGC CAGATCATAC C 21(2)SEQ ID NO81信息(i)序列特征(A)長度20個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO81序列描述CACGGCCAGG TCCACCAGGC 20(2)SEQ ID NO82信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO82序列描述CACGTCCCCT AGCACTGTCA G 21(2)SEQ ID NO83信息(i)序列特征(A)長度22個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO83序列描述TTGACGAAGT CCTTCATCTG GG22(2)SEQ ID NO84信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO84序列描述GAACTGCAAG CTGGAGCCCA G 21(2)SEQ ID NO85信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO85序列描述CTGGATGCTG CGAAGTGCTA C 21(2)SEQ ID NO86信息(i)序列特征(A)長度21個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(xi)SEQ ID NO86序列描述GCCTTGGAGC TGGACGATGG C 21(2)SEQ ID NO87信息(i)序列特征(A)長度33個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈
(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO87序列描述GTAAGATCTC CAGAGTGTCC AAGACAAGAG ATG33(2)SEQ ID NO88信息(i)序列特征(A)長度33個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO88序列描述CTTCTCGAGT GTGAGAGCTG AACTGAAACC TTC33(2)SEQ ID NO89信息(i)序列特征(A)長度32個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO89序列描述CGCTGTGACG TCAGAGTTGA GTCCAAATAT GG 32(2)SEQ ID NO90信息(i)序列特征(A)長度21個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO90序列描述GGTGACACTA TAGAATAGGG C 21(2)SEQ ID NO91信息(i)序列特征(A)長度18個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO91序列描述AAGCAGGAGC TCCTGTGT 18(2)SEQ ID NO92信息(i)序列特征(A)長度852個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置61..852(xi)SEQ ID NO92序列描述TGATCTCCCT CCAGGCCACT GTTCCCTCTC CACTTCCCCT CACCGCTGCA CTGCTCAGAG60ATG GCC CTT GGG GCT GTG GTC CTC CTT GGG GTC CTG GCT TCT TAC CAC 108Met Ala Leu Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser Tyr His1 5 10 15GGA TTC AAC TTG GAC GTG ATG AGC GGT GAT CTT CCA GGA AGA CGC AGC 156Gly Phe Asn Leu Asp Val Met Ser Gly Asp Leu Pro Gly Arg Arg Ser20 25 30GGG CTT CGG GCA GAG CGT GAT GCA GTT TGG GGA TCT CGA CTC GTG GTG 204Gly Leu Arg Ala Glu Arg Asp Ala Val Trp Gly Ser Arg Leu Val Val35 4 45GGA GCC CCC CTG GCG GTG GTG TCG GCC AAC CAC ACA GGA CGG CTG TAC 252Gly Ala Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly Arg Leu Tyr50 55 60GAG TGT GCG CCT GCC TCC GGC ACC TGC ACG CCC ATT TTC CCA TTC ATG 300Glu Cys Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe Pro Phe Met65 70 75 80CCC CCC GAA GCC GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCC CTG GCA GCC TCC 348Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Ser85 90 95CCC AAC CAT TCC CAG CTG CTG GCT TGT GGC CCG ACC GTG CAT AGA GCC 396Pro Asn His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Arg Ala100 105 110TGC GGG GAG GAC GTG TAC GCC CAG GGT TTC TGT GTG CTG CTG GAT GCC 444Cys Gly Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu Leu Asp Ala115 120 125CAC GCA CAG CCC ATC GGG ACT GTG CCA GCT GCC CTG CCC GAG TGC CCA 492His Ala Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro Glu Cys Pro130 135 140GAT CAA GAG ATG GAC ATT GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT GGC AGC ATT 540Asp Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile145 150 155 160AGC TCA AAT GAC TTC CGC AAG ATG AAG GAC TTT GTC AGA GCT GTG ATG 588Ser Ser Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg Ala Val Met165 170 175GAC CAG TTC AAG GAC ACC AAC ACC CAG TTC TCG CTG ATG CAG TAC TCC 636Asp Gln Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser180 185 190AAT GTG CTG GTG ACA CAT TTC ACC TTC AGC AGC TTC CGG AAC AGC TCC 684Asn Val Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg Asn Ser Ser195 200 205AAT CCT CAG GGC CTA GTG GAG CCC ATT GTG CAG CTG ACA GGC CTC ACG 732Asn Pro Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr Gly Leu Thr210 215 220TTC ACG GCC ACA GGG ATC CTG AAA GTG GTG ACA GAG CTG TTT CAA ACC 780Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu Phe Gln Thr225 230 235 240AAG AAC GGG GCC CGC GAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATC GTC ATC ACA 828Lys Asn Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr245 250 255GAT GGG CAG AAG TAC AAA GCG GCA 852Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Ala Ala260(2)SEQ ID NO93信息(i)序列特征(A)長度264個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO93序列描述Met Ala Leu Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser Tyr His1 5 10 15Gly Phe Asn Leu Asp Val Met Ser Gly Asp Leu Pro Gly Arg Arg Ser20 25 30Gly Leu Arg Ala Glu Arg Asp Ala Val Trp Gly Ser Arg Leu Val Val35 40 45Gly Ala Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly Arg Leu Tyr50 55 60Glu Cys Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe Pro Phe Met65 70 75 80Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Ser85 90 95Pro Asn His Sar Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Arg Ala100 105 110Cys Gly Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu Leu Asp Ala115 120 125His Ala Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro Glu Cys Pro130 135 140Asp Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile145 150 155 160Ser Ser Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg Ala Val Met165 170 175Asp Gln Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser180 185 190Asn Val Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg Asn Ser Ser195 200 205Asn Pro Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr Gly Leu Thr210 215 220Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu Phe Gln Thr225 230 235 240Lys Asn Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr245 250 255Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Ala Ala260(2)SEQ ID NO94信息(i)序列特征(A)長度22個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA
(xi)SEQ ID NO94序列描述CTGGTCTGGA GGTGCCTTCC TG22(2)SEQ ID NO95信息(i)序列特征(A)長度21個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(xi)SEQ ID NO95序列描述CCTGAGCAGG AGCACCTGGC C 21(2)SEQ ID NO96信息(i)序列特征(A)長度2499個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO96序列描述ATGACCTTCG GCACTGTGCT TCTTCTGAGT GTCCTGGCTT CTTATCATGG ATTCAACCTG60GATGTGGAGG AGCCTACGAT CTTCCAGGAG GATGCAGGCG GCTTTGGGCA GAGCGTGGTG 120CAGTTCGGTG GATCTCGACT CGTGGTGGGA GCACCCCTGG AGGTGGTGGC GGCCAACCAG 180ACGGGACGGC TGTATGACTG CGCAGCTGCC ACCGGCATGT GCCAGCCCAT CCCGCTGCAC 240ATCCGCCCTG AGGCCGTGAA CATGTCCTTG GGCCTGACCC TGGCAGCCTC CACCAACGGC 300TCCCGGCTCC TGGCCTGTGG CCCGACCCTG CACAGAGTCT GTGGGGAGAA CTCATACTCA 360AAGGGTTCCT GCCTCCTGCT GGGCTCGCGC TGGGAGATCA TCCAGACAGT CCCCGACGCC 420ACGCCAGAGT GTCCACATCA AGAGATGGAC ATCGTCTTCC TGATTGACGG CTCTGGAAGC 480ATTGACCAAA ATGACTTTAA CCAGATGAAG GGCTTTGTCC AAGCTGTCAT GGGCCAGTTT 540GAGGGCACTG ACACCCTGTT TGCACTGATG CAGTACTCAA ACCTCCTGAA GATCCACTTC 600ACCTTCACCC AATTCCGGAC CAGCCCGAGC CAGCAGAGCC TGGTGGATCC CATCGTCCAA 660CTGAAAGGCC TGACGTTCAC GGCCACGGGC ATCCTGACAG TGGTGACACA GCTATTTCAT 720CATAAGAATG GGGCCCGAAA AAGTGCCAAG AAGATCCTCA TTGTCATCAC AGATGGGCAG 780AAGTACAAAG ACCCCCTGGA ATACAGTGAT GTCATCCCCC AGGCAGAGAA GGCTGGCATC 840ATCCGCTACG CTATCGGGGT GGGACACGCT TTCCAGGGAC CCACTGCCAG GCAGGAGCTG 900AATACCATCA GCTCAGCGCC TCCGCAGGAC CACGTGTTCA AGGTGGACAA CTTTGCAGCC 960CTTGGCAGCA TCCAGAAGCA GCTGCAGGAG AAGATCTATG CAGTTGAGGG AACCCAGTCC 1020AGGGCAAGCA GCTCCTTCCA GCACGAGATG TCCCAAGAAG GCTTCAGCAC AGCCCTCACA 1080ATGGATGGCC TCTTCCTGGG GGCTGTGGGG AGCTTTAGCT GGTCTGGAGG TGCCTTCCTG 1140TATCCCCCAA ATATGAGCCC CACCTTCATC AACATGTCTC AGGAGAATGT GGACATGAGG 1200GACTCTTACC TGGGTTACTC CACCGAGCTA GCCCTGTGGA AGGGGGTACA GAACCTGGTC 1260CTGGGGGCCC CCCGCTACCA GCATACCGGG AAGGCTGTCA TCTTCACCCA GGTGTCCAGG 1320CAATGGAGGA AGAAGGCCGA AGTCACAGGG ACGCAGATCG GCTCCTACTT CGGGGCCTCC 1380CTCTGCTCCG TGGATGTGGA CAGCGATGGC AGCACCGACC TGATCCTCAT TGGGGCCCCC 1440CATTACTATG AGCAGACCCG AGGGGGCCAG GTGTCCGTGT GTCCCTTGCC TAGGGGGAGG 1500GTGCAGTGGC AGTGTGACGC TGTTCTCCGT GGTGAGCAGG GCCACCCCTG GGGCCGCTTT 1560GGGGCAGCCC TGACAGTGTT GGGGGATGTG AATGAGGACA AGCTGATAGA CGTGGCCATT 1620GGGGCCCCGG GAGAGCAGGA GAACCGGGGT GCTGTCTACC TGTTTCACGG AGCCTCAGAA 1680TCCGGCATCA GCCCCTCCCA CAGCCAGCGG ATTGCCAGCT CCCAGCTCTC CCCCAGGCTG 1740CAGTATTTTG GGCAGGCGCT GAGTGGGGGT CAGGACCTCA CCCAGGATGG ACTGATGGAC 1800CTGGCCGTGG GGGCCCGGGG CCAGGTGCTC CTGCTCAGGA GTCTGCCGGT GCTGAAAGTG 1860GGGGTGGCCA TGAGATTCAG CCCTGTGGAG GTGGCCAAGG CTGTGTACCG GTGCTGGGAA 1920GAGAAGCCCA GTGCCCTGGA AGCTGGGGAC GCCACCGTCT GTCTCACCAT CCAGAAAAGC 1980TCACTGGACC AGCTAGGTGA CATCCAAAGC TCTGTCAGGT TTGATCTGGC ACTGGACCCA 2040GGTCGTCTGA CTTCTCGTGC CATTTTCAAT GAAACCAAGA ACCCCACTTT GACTCGAAGA 2100AAAACCCTGG GACTGGGGAT TCACTGTGAA ACCCTGAAGC TGCTTTTGCC AGTGAGGACT 2160TTGGGTTCTG GGAAGGGGGA GAGAGGAGGA GCCCAAGGCT GGCCTGGAGC ACCCCCGTTC 2220TCTGCTGAGC GAGGTGGGAA GGGTTAGGAT GTTGGGGCTG GAGAGAGGGA CATTAGGGCA 2280GGAGAACCTG GCTCCACGGC TTGGAGGGAG CACTGTCAGG GCAGTGGGGA GTGGATGCAG 2340TGGAGGAGGA CTTGTGGTGG AGCGTAGAGA GGACAGCAGG TTCTTGAAAG CCTGTTCTCT 2400CTCAGGATTG TGTGGAGGAT GTGGTGAGCC CCATCATTCT GCACCTCAAC TTCTCACTGG 2460TGAGAGAGCC CATCCCCTCC CCCCAGAACC TGCGTCCTG 2499(2)SEQ ID NO97信息(i)序列特征(A)長度3956個堿基(B)類型核酸
(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型DNA(xi)SEQ ID NO97序列描述TTTAACTGCA CCAACTTTAA AATACGCTAT TGGAGCTGGA ATTACCGCGG CTGCTGGCAC 60CAGACTTGCC CTCCAATGGA TCCTCGTTAA AGGATTTAAA GTGGACTCAT TCCAATTACA 120GGGCCTCGAA AGAGTCCTGT ATTGTTATTT TTCGTCACTA CCTCCCCGGG TCGGGAGTGG 180GTAATTTGCG CGCCTGCTGC CTTCCTTGGA TGTGGTAGCC GTTTCTCAGG CTCCCTCTCC 240GGAATCGAAC CCTGATTCCC CGTCACCCGT GGTCACCATG GTAGGCACGT GCAGTTCGGT 300GGATCTCGAC TCGTGGTGGG AGCACCCCTG GAGGTGGTGG CGGCCAACCA GACGGGACGG 360CTGTATGACT GCGCAGCTGC CACCGGCATG TGCCAGCCCA TCCCGCTGCA CATCCGCCCT 420GAGGCCGTGA ACATGTCCTT GGGCCTGACC CTGGCAGCCT CCACCAACGG CTCCCGGCTC 480CTGGCCTGTG GCCCGACCCT GCACAGAGTC TGTGGGGAGA ACTCATACTC AAAGGGTTCC 540TGCCTCCTGC TGGGCTCGCG CTGGGAGATC ATCCAGACAG TCCCCGACGC CACGCCAGAG 600TGTCCACATC AAGAGATGGA CATCGTCTTC CTGATTGACG GCTCTGGAAG CATTGACCAA 660AATGACTTTA ACCAGATGAA GGGCTTTGTC CAAGCTGTCA TGGGCCAGTT TGAGGGCACT 720GACACCCTGT TTGCACTGAT GCAGTACTCA AACCTCCTGA AGATCCACTT CACCTTCACC 780CAATTCCGGA CCAGCCCGAG CCAGCAGAGC CTGGTGGATC CCATCGTCCA ACTGAAAGGC 840CTGACGTTCA CGGCCACGGG CATCCTGACA GTGGTGACAC AGCTATTTCA TCATAAGAAT 900GGGGCCCGAA AAAGTGCCAA GAAGATCCTC ATTGTCATCA CAGATGGGCA GAAGTACAAA 960GACCCCCTGG AATACAGTGA TGTCATCCCC CAGGCAGAGA AGGCTGGCAT CATCCGCTAC 1020GCTATCGGGG TGGGACACGC TTTCCAGGGA CCCACTGCCA GGCAGGAGCT GAATACCATC 1080AGCTCAGCGC CTCCGCAGGA CCACGTGTTC AAGGTGGACA ACTTTGCAGC CCTTGGCAGC 1140ATCCAGAAGC AGCTGCAGGA GAAGATCTAT GCAGTTGAGG GAACCCAGTC CAGGGCAAGC 1200AGCTCCTTCC AGCACGAGAT GTCCCAAGAA GGCTTCAGCA CAGCCCTCAC AATGGATGGC 1260CTCTTCCTGG GGGCTGTGGG GAGCTTTAGC TGGTCTGGAG GTGCCTTCCT GTATCCCCCA 1320AATATGAGCC CCACCTTCAT CAACATGTCT CAGGAGAATG TGGACATGAG GGACTCTTAC 1380CTGGGTTACT CCACCGAGCT AGCCCTGTGG AAGGGGGTAC AGAACCTGGT CCTGGGGGCC 1440CCCCGCTACC AGCATACCGG GAAGGCTGTC ATCTTCACCC AGGTGTCCAG GCAATGGAGG 1500AAGAAGGCCG AAGTCACAGG GACGCAGATC GGCTCCTACT TCGGGGCCTC CCTCTGCTCC 1560GTGGATGTGG ACAGCGATGG CAGCACCGAC CTGATCCTCA TTGGGGCCCC CCATTACTAT 1620GAGCAGACCC GAGGGGGCCA GGTGTCCGTG TGTCCCTTGC CTAGGGGGAG GGTGCAGTGG 1680CAGTGTGACG CTGTTCTCCG TGGTGAGCAG GGCCACCCCT GGGGCCGCTT TGGGGCAGCC 1740CTGACAGTGT TGGGGGATGT GAATGAGGAC AAGCTGATAG ACGTGGCCAT TGGGGCCCCG 1800GGAGAGCAGG AGAACCGGGG TGCTGTCTAC CTGTTTCACG GAGCCTCAGA ATCCGGCATC 1860AGCCCCTCCC ACAGCCAGCG GATTGCCAGC TCCCAGCTCT CCCCCAGGCT GCAGTATTTT 1920GGGCAGGCGC TGAGTGGGGG TCAGGACCTC ACCCAGGATG GACTGATGGA CCTGGCCGTG 1980GGGGCCCGGG GCCAGGTGCT CCTGCTCAGG AGTCTGCCGG TGCTGAAAGT GGGGGTGGCC 2040ATGAGATTCA GCCCTGTGGA GGTGGCCAAG GCTGTGTACC GGTGCTGGGA AGAGAAGCCC 2100AGTGCCCTGG AAGCTGGGGA CGCCACCGTC TGTCTCACCA TCCAGAAAAG CTCACTGGAC 2160CAGCTAGGTG ACATCCAAAG CTCTGTCAGG TTTGATCTGG CACTGGACCC AGGTCGTCTG 2220ACTTCTCGTG CCATTTTCAA TGAAACCAAG AACCCCACTT TGACTCGAAG AAAAACCCTG 2280GGACTGGGGA TTCACTGTGA AACCCTGAAG CTGCTTTTGC CAGATTGTGT GGAGGATGTG 2340GTGAGCCCCA TCATTCTGCA CCTCAACTTC TCACTGGTGA GAGAGCCCAT CCCCTCCCCC 2400CAGAACCTGC GTCCTGTGCT GGCCGTGGGC TCACAAGACC TCTTCACTGC TTCTCTCCCC 2460TTCGAGAAGA ACTGTGGGCA AGATGGCCTC TGTGAAGGGG ACCTGGGTGT CACCCTCAGC 2520TTCTCAGGCC TGCAGACCCT GACCGTGGGG AGCTCCCTGG AGCTCAACGT GATTGTGACT 2580GTGTGGAACG CAGGTGAGGA TTCCTACGGA ACCGTGGTCA GCCTCTACTA TCCAGCAGGG 2640CTGTCGCACC GACGGGTGTC AGGAGCCCAG AAGCAGCCCC ATCAGAGTGC CCTGCGCCTG 2700GCATGTGAGA CAGTGCCCAC TGAGGATGAG GGCCTAAGAA GCAGCCGCTG CAGTGTCAAC 2760CACCCCATCT TCCATGAGGG CTCTAACGGC ACCTTCATAG TCACATTCGA TGTCTCCTAC 2820AAGGCCACCC TGGGAGACAG GATGCTTATG AGGGCCAGTG CAAGCAGTGA GAACAATAAG 2880GCTTCAAGCA GCAAGGCCAC CTTCCAGCTG GAGCTCCCGG TGAAGTATGC AGTCTACACC 2940ATGATCAGCA GGCAGGAAGA ATCCACCAAG TACTTCAACT TTGCAACCTC CGATGAGAAG 3000AAAATGAAAG AGGCTGAGCA TCGATACCGT GTGAATAACC TCAGCCAGCG AGATCTGGCC 3060ATCAGCATTA ACTTCTGGGT TCCTGTCCTG CTGAACGGGG TGGCTGTGTG GGATGTGGTC 3120ATGGAGGCCC CATCTCAGAG TCTCCCCTGT GTTTCAGAGA GAAAACCTCC CCAGCATTCT 3180GACTTCCTGA CCCAGATTTC AAGAAGTCCC ATGCTGGACT GCTCCATTGC TGACTGCCTG 3240CAGTTCCGCT GTGACGTCCC CTCCTTCAGC GTCCAGGAGG AGCTGGATTT CACCCTGAAG 3300GGCAATCTCA GTTTCGGCTG GGTCCGCGAG ACATTGCAGA AGAAGGTGTT GGTCGTGAGT 3360GTGGCTGAAA TTACGTTCGA CACATCCGTG TACTCCCAGC TTCCAGGACA GGAGGCATTT 3420ATGAGAGCTC AGATGGAGAT GGTGCTAGAA GAAGACGAGG TCTACAATGC CATTCCCATC 3480ATCATGGGCA GCTCTGTGGG GGCTCTGCTA CTGCTGGCGC TCATCACAGC CACACTGTAC 3540AAGCTTGGCT TCTTCAAACG CCACTACAAG GAAATGCTGG AGGACAAGCC TGAAGACACT 3600GCCACATTCA GTGGGGACGA TTTCAGCTGT GTGGCCCCAA ATGTGCCTTT GTCCTAATAA 3660TCCACTTTCC TGTTTATCTC TACCACTGTG GGCTGGACTT GCTTGCAACC ATAAATCAAC 3720TTACATGGAA ACAACTTCTG CATAGATCTG CACTGGCCTA AGCAACCTAC CAGGTGCTAA 3780GCACCTTCTC GGAGAGATAG AGATTGTCAA TGTTTTTACA TATCTGTCCA TCTTTTTCAG 3840CAATGACCCA CTTTTTACAG AAGCAGGCAT GGTGCCAGCA TAAATTTTCA TATGCTTAAG 3900AATTGTCACA TGAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA CTTTAG 3956(2)SEQ ID NO98信息(i)序列特征(A)長度3785個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置1..3486(xi)SEQ ID NO98序列描述ATG ACC TTC GGC ACT GTG CTT CTT CTG AGT GTC CTG GCT TCT TAT CAT 48Met Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His1 5 10 15GGA TTC AAC CTG GAT GTG GAG GAG CCT ACG ATC TTC CAG GAG GAT GCA 96Gly Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala20 25 30GGC GGC TTT GGG CAG AGC GTG GTG CAG TTC GGT GGA TCT CGA CTC GTG144Gly Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe G1y Gly Ser Arg Leu Val35 40 45GTG GGA GCA CCC CTG GAG GTG GTG GCG GCC AAC CAG ACG GGA CGG CTG192Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu50 55 60TAT GAC TGC GCA GCT GCC ACC GGC ATG TGC CAG CCC ATC CCG CTG CAC240Tyr Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His65 70 75 80ATC CGC CCT GAG GCC GTG AAC ATG TCC TTG GGC CTG ACC CTG GCA GCC288Ile Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala85 90 95TCC ACC AAC GGC TCC CGG CTC CTG GCC TGT GGC CCG ACC CTG CAC AGA336Ser Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg100 105 110GTC TGT GGG GAG AAC TCA TAC TCA AAG GGT TCC TGC CTC CTG CTG GGC384Val Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly115 120 125TCG CGC TGG GAG ATC ATC CAG ACA GTC CCC GAC GCC ACG CCA GAG TGT432Ser Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys130 135 140CCA CAT CAA GAG ATG GAC ATC GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT GGA AGC480Pro His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser145 150 155 160ATT GAC CAA AAT GAC TTT AAC CAG ATG AAG GGC TTT GTC CAA GCT GTC528Ile Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val165 170 175ATG GGC CAG TTT GAG GGC ACT GAC ACC CTG TTT GCA CTG ATG CAG TAC576Met Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr180 185 190TCA AAC CTC CTG AAG ATC CAC TTC ACC TTC ACC CAA TTC CGG ACC AGC624Ser Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser195 200 205CCG AGC CAG CAG AGC CTG GTG GAT CCC ATC GTC CAA CTG AAA GGC CTG672Pro Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu210 215 220ACG TTC ACG GCC ACG GGC ATC CTG ACA GTG GTG ACA CAG CTA TTT CAT720Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His225 230 235 240CAT AAG AAT GGG GCC CGA AAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATT GTC ATC768His Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile245 250 255ACA GAT GGG CAG AAG TAC AAA GAC CCC CTG GAA TAC AGT GAT GTC ATC816Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile260 265 270CCC CAG GCA GAG AAG GCT GGC ATC ATC CGC TAC GCT ATC GGG GTG GGA864Pro Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly275 280 285CAC GCT TTC CAG GGA CCC ACT GCC AGG CAG GAG CTG AAT ACC ATC AGC912His Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser290 295 300TCA GCG CCT CCG CAG GAC CAC GTG TTC AAG GTG GAC AAC TTT GCA GCC960Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala305 310 315 320CTT GGC AGC ATC CAG AAG CAG CTG CAG GAG AAG ATC TAT GCA GTT GAG 1008Leu Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu325 330 335GGA ACC CAG TCC AGG GCA AGC AGC TCC TTC CAG CAC GAG ATG TCC CAA 1056Gly Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln340 345 350GAA GGC TTC AGC ACA GCC CTC ACA ATG GAT GGC CTC TTC CTG GGG GCT 1104Glu Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala355 360365GTG GGG AGC TTT AGC TGG TCT GGA GGT GCC TTC CTG TAT CCC CCA AAT 1152Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn370 375 380ATG AGC CCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG GAG AAT GTG GAC ATG AGG 1200Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg385 390 395 400GAC TCT TAC CTG GGT TAC TCC ACC GAG CTA GCC CTG TGG AAG GGG GTA 1248Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val405 410 415CAG AAC CTG GTC CTG GGG GCC CCC CGC TAC CAG CAT ACC GGG AAG GCT 1296Gln Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala420 425 430GTC ATC TTC ACC CAG GTG TCC AGG CAA TGG AGG AAG AAG GCC GAA GTC1344Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val435 440 445ACA GGG ACG CAG ATC GGC TCC TAC TTC GGG GCC TCC CTC TGC TCC GTG1392Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val450 455 460GAT GTG GAC AGC GAT GGC AGC ACC GAC CTG ATC CTC ATT GGG GCC CCC1440Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro465 470 475 480CAT TAC TAT GAG CAG ACC CGA GGG GGC CAG GTG TCC GTG TGT CCC TTG 1488His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu485 490 495CCT AGG GGG AGG GTG CAG TGG CAG TGT GAC GCT GTT CTC CGT GGT GAG1536Pro Arg Gly Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly Glu500 505 510CAG GGC CAC CCC TGG GGC CGC TTT GGG GCA GCC CTG ACA GTG TTG GGG1584Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly515 520 525GAT GTG AAT GAG GAC AAG CTG ATA GAC GTG GCC ATT GGG GCC CCG GGA1632Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly530 535 540GAG CAG GAG AAC CGG GGT GCT GTC TAC CTG TTT CAC GGA GCC TCA GAA1680Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser Glu545 550 555 560TCC GGC ATC AGC CCC TCC CAC AGC CAG CGG ATT GCC AGC TCC CAG CTC1728Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln Leu565 570 575TCC CCC AGG CTG CAG TAT TTT GGG CAG GCG CTG AGT GGG GGT CAG GAC1776Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln Asp580 585 590CTC ACC CAG GAT GGA CTG ATG GAC CTG GCC GTG GGG GCC CGG GGC CAG1824Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly Gln595 600 605GTG CTC CTG CTC AGG AGT CTG CCG GTG CTG AAA GTG GGG GTG GCC ATG1872Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala Met610 615 620AGA TTC AGC CCT GTG GAG GTG GCC AAG GCT GTG TAC CGG TGC TGG GAA1920Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp Glu625 630 635 640GAG AAG CCC AGT GCC CTG GAA GCT GGG GAC GCC ACC GTC TGT CTC ACC1968Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu Thr645 650 655ATC CAG AAA AGC TCA CTG GAC CAG CTA GGT GAC ATC CAA AGC TCT GTC2016Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser Val660 665 670AGG TTT GAT CTG GCA CTG GAC CCA GGT CGT CTG ACT TCT CGT GCC ATT2064Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala Ile675 680 685TTC AAT GAA ACC AAG AAC CCC ACT TTG ACT CGA AGA AAA ACC CTG GGA2112Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly690 695 700CTG GGG ATT CAC TGT GAA ACC CTG AAG CTG CTT TTG CCA CAT TGT GTG2160Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val705 710 715 720GAG GAT GTG GTG AGC CCC ATC ATT CTG CAC CTC AAC TTC TCA CTG GTG2208Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu Val725 730 735AGA GAG CCC ATC CCC TCC CCC CAG AAC CTG CGT CCT GTG CTG GCC GTG2256Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val740 745 750GGC TCA CAA GAC CTC TTC ACT GCT TCT CTC CCC TTC GAG AAG AAC TGT2304Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys755 760 765GGG CAA GAT GGC CTC TGT GAA GGG GAC CTG GGT GTC ACC CTC AGC TTC2352Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser Phe770 775 780TCA GGC CTG CAG ACC CTG ACC GTG GGG AGC TCC CTG GAG CTC AAC GTG2400Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn Val785 790 795 800ATT GTG ACT GTG TGG AAC GCA GGT GAG GAT TCC TAC GGA ACC GTG GTC2448Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val Val805 810 815AGC CTC TAC TAT CCA GCA GGG CTG TCG CAC CGA CGG GTG TCA GGA GCC2496Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly Ala820 825 830CAG AAG CAG CCC CAT CAG AGT GCC CTG CGC CTG GCA TGT GAG ACA GTG2544Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr Val835 840 845CCC ACT GAG GAT GAG GGC CTA AGA AGC AGC CGC TGC AGT GTC AAC CAC2592Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn His850 855 860CCC ATC TTC CAT GAG GGC TCT AAC GGC ACC TTC ATA GTC ACA TTC GAT2640Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe Asp865 870 875 880GTC TCC TAC AAG GCC ACC CTG GGA GAC AGG ATG CTT ATG AGG GCC AGT2688Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala Ser885 890 895GCA AGC AGT GAG AAC AAT AAG GCT TCA AGC AGC AAG GCC ACC TTC CAG2736Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe Gln900 905 910CTG GAG CTC CCG GTG AAG TAT GCA GTC TAC ACC ATG ATC AGC AGG CAG2784Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg Gln915 920 925GAA GAA TCC ACC AAG TAC TTC AAC TTT GCA ACC TCC GAT GAG AAG AAA2832Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys Lys930 935 940ATG AAA GAG GCT GAG CAT CGA TAC CGT GTG AAT AAC CTC AGC CAG CGA2880Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Gln Arg945 950 955 960GAT CTG GCC ATC AGC ATT AAC TTC TGG GTT CCT GTC CTG CTG AAC GGG2928Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly965 970 975GTG GCT GTG TGG GAT GTG GTC ATG GAG GCC CCA TCT CAG AGT CTC CCC2976Val Ala Val Trp Asp Val Val Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu Pro980 985 990TGT GTT TCA GAG AGA AAA CCT CCC CAG CAT TCT GAC TTC CTG ACC CAG3024Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr Gln995 10001005ATT TCA AGA AGT CCC ATG CTG GAC TGC TCC ATT GCT GAC TGC CTG CAG3072Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser Ile Ala Asp Cys Leu Gln0TTC CGC TGT GAC GTC CCC TCC TTC AGC GTC CAG GAG GAG CTG GAT TTC3120Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp Phe51040ACC CTG AAG GGC AAT CTC AGT TTC GGC TGG GTC CGC GAG ACA TTG CAG3168Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu Gln5AAG AAG GTG TTG GTC GTG AGT GTG GCT GAA ATT ACG TTC GAC ACA TCC3216Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser0GTG TAC TCC CAG CTT CCA GGA CAG GAG GCA TTT ATG AGA GCT CAG ATG3264Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln Met5GAG ATG GTG CTA GAA GAA GAC GAG GTC TAC AAT GCC ATT CCC ATC ATC3312Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile Ile0ATG GGC AGC TCT GTG GGG GCT CTG CTA CTG CTG GCG CTC ATC ACA GCC3360Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Ala51120ACA CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAA CGC CAC TAC AAG GAA ATG CTG3408Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met Leu5GAG GAC AAG CCT GAA GAC ACT GCC ACA TTC AGT GGG GAC GAT TTC AGC3456Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe Ser0TGT GTG GCC CCA AAT GTG CCT TTG TCC TAATAATCCA CTTTCCTGTT 3503Cys Val Ala Pro Asn Val Pro Leu Ser11551160TATCTCTACC ACTGTGGGCT GGACTTGCTT GCAACCATAA ATCAACTTAC ATGGAAACAA 3563CTTCTGCATA GATCTGCACT GGCCTAAGCA ACCTACCAGG TGCTAAGCAC CTTCTCGGAG 3623AGATAGAGAT TGTCAATGTT TTTACATATC TGTCCATCTT TTTCAGCAAT GACCCACTTT 3683TTACAGAAGC AGGCATGGTG CCAGCATAAA TTTTCATATG CTTAAGAATT GTCACATGAA 3743AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAACTTT AG3785(2)SEQ ID NO99信息(i)序列特征(A)長度1161個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO99序列描述Met Thr Phe Gly Thr Val Leu Leu Leu Ser Val Leu Ala Ser Tyr His1 5 10 15Gly Phe Asn Leu Asp Val Glu Glu Pro Thr Ile Phe Gln Glu Asp Ala20 25 30Gly Gly Phe Gly Gln Ser Val Val Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val35 40 45Val Gly Ala Pro Leu Glu Val Val Ala Ala Asn Gln Thr Gly Arg Leu50 55 60Tyr Asp Cys Ala Ala Ala Thr Gly Met Cys Gln Pro Ile Pro Leu His65 70 75 80Ile Arg Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Thr Leu Ala Ala85 90 95Ser Thr Asn Gly Ser Arg Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Leu His Arg100 105 110Val Cys Gly Glu Asn Ser Tyr Ser Lys Gly Ser Cys Leu Leu Leu Gly115 120 125Ser Arg Trp Glu Ile Ile Gln Thr Val Pro Asp Ala Thr Pro Glu Cys130 135 140Pro His Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser145 150 155 160Ile Asp Gln Asn Asp Phe Asn Gln Met Lys Gly Phe Val Gln Ala Val165 170 175Met Gly Gln Phe Glu Gly Thr Asp Thr Leu Phe Ala Leu Met Gln Tyr180 185 190Ser Asn Leu Leu Lys Ile His Phe Thr Phe Thr Gln Phe Arg Thr Ser195 200 205Pro Ser Gln Gln Ser Leu Val Asp Pro Ile Val Gln Leu Lys Gly Leu210 215 220Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Thr Val Val Thr Gln Leu Phe His225 230 235 240His Lys Asn Gly Ala Arg Lys Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile245 250 255Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu Glu Tyr Ser Asp Val Ile260 265 270Pro Gln Ala Glu Lys Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly275 280 285His Ala Phe Gln Gly Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asn Thr Ile Ser290 295 300Ser Ala Pro Pro Gln Asp His Val Phe Lys Val Asp Asn Phe Ala Ala305 310 315 320Leu Gly Ser Ile Gln Lys Gln Leu Gln Glu Lys Ile Tyr Ala Val Glu325 330 335Gly Thr Gln Ser Arg Ala Ser Ser Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln340 345 350Glu Gly Phe Ser Thr Ala Leu Thr Met Asp Gly Leu Phe Leu Gly Ala355 360 365Val Gly Ser Phe Ser Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Asn370 375 380Met Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Glu Asn Val Asp Met Arg385 390 395 400Asp Ser Tyr Leu Gly Tyr Ser Thr Glu Leu Ala Leu Trp Lys Gly Val405 410 415Gln Asn Leu Val Leu Gly Ala Pro Arg Tyr Gln His Thr Gly Lys Ala420 425 430Val Ile Phe Thr Gln Val Ser Arg Gln Trp Arg Lys Lys Ala Glu Val435 440 445Thr Gly Thr Gln Ile Gly Ser Tyr Phe Gly Ala Ser Leu Cys Ser Val450 455 460Asp Val Asp Ser Asp Gly Ser Thr Asp Leu Ile Leu Ile Gly Ala Pro465 470 475 480His Tyr Tyr Glu Gln Thr Arg Gly Gly Gln Val Ser Val Cys Pro Leu485 490 495Pro Arg Gly Arg Val Gln Trp Gln Cys Asp Ala Val Leu Arg Gly Glu500 505 510Gln Gly His Pro Trp Gly Arg Phe Gly Ala Ala Leu Thr Val Leu Gly515 520 525Asp Val Asn Glu Asp Lys Leu Ile Asp Val Ala Ile Gly Ala Pro Gly530 535 540Glu Gln Glu Asn Arg Gly Ala Val Tyr Leu Phe His Gly Ala Ser Glu545 550 555 560Ser Gly Ile Ser Pro Ser His Ser Gln Arg Ile Ala Ser Ser Gln Leu565 570 575Ser Pro Arg Leu Gln Tyr Phe Gly Gln Ala Leu Ser Gly Gly Gln Asp580 585 590Leu Thr Gln Asp Gly Leu Met Asp Leu Ala Val Gly Ala Arg Gly Gln595 600 605Val Leu Leu Leu Arg Ser Leu Pro Val Leu Lys Val Gly Val Ala Met610 615 620Arg Phe Ser Pro Val Glu Val Ala Lys Ala Val Tyr Arg Cys Trp Glu625 630 635 640Glu Lys Pro Ser Ala Leu Glu Ala Gly Asp Ala Thr Val Cys Leu Thr645 650 655Ile Gln Lys Ser Ser Leu Asp Gln Leu Gly Asp Ile Gln Ser Ser Val660 665 670Arg Phe Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg Leu Thr Ser Arg Ala Ile675 680 685Phe Asn Glu Thr Lys Asn Pro Thr Leu Thr Arg Arg Lys Thr Leu Gly690 695 700Leu Gly Ile His Cys Glu Thr Leu Lys Leu Leu Leu Pro Asp Cys Val705 710 715 720Glu Asp Val Val Ser Pro Ile Ile Leu His Leu Asn Phe Ser Leu Val725 730 735Arg Glu Pro Ile Pro Ser Pro Gln Asn Leu Arg Pro Val Leu Ala Val740 745 750Gly Ser Gln Asp Leu Phe Thr Ala Ser Leu Pro Phe Glu Lys Asn Cys755 760 765Gly Gln Asp Gly Leu Cys Glu Gly Asp Leu Gly Val Thr Leu Ser Phe770 775 780Ser Gly Leu Gln Thr Leu Thr Val Gly Ser Ser Leu Glu Leu Asn Val785 790 795 800Ile Val Thr Val Trp Asn Ala Gly Glu Asp Ser Tyr Gly Thr Val Val805 810 815Ser Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser His Arg Arg Val Ser Gly Ala820 825 830Gln Lys Gln Pro His Gln Ser Ala Leu Arg Leu Ala Cys Glu Thr Val835 840 845Pro Thr Glu Asp Glu Gly Leu Arg Ser Ser Arg Cys Ser Val Asn His850 855 860Pro Ile Phe His Glu Gly Ser Asn Gly Thr Phe Ile Val Thr Phe Asp865 870 875 880Val Ser Tyr Lys Ala Thr Leu Gly Asp Arg Met Leu Met Arg Ala Ser885 890 895Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Ala Ser Ser Ser Lys Ala Thr Phe Gln900 905 910Leu Glu Leu Pro Val Lys tYr Ala Val Tyr Thr Met Ile Ser Arg Gln915 920 925Glu Glu Ser Thr Lys Tyr Phe Asn Phe Ala Thr Ser Asp Glu Lys Lys930 935 940Met Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn Asn Leu Ser Gln Arg945 950 955 960Asp Leu Ala Ile Ser Ile Asn Phe Trp Val Pro Val Leu Leu Asn Gly965 970 975Val Ala Val Trp Asp Val Val Met Glu Ala Pro Ser Gln Ser Leu Pro980 985 990Cys Val Ser Glu Arg Lys Pro Pro Gln His Ser Asp Phe Leu Thr Gln995 10001005Ile Ser Arg Ser Pro Met Leu Asp Cys Ser lle Ala Asp Cys Leu Gln0Phe Arg Cys Asp Val Pro Ser Phe Ser Val Gln Glu Glu Leu Asp Phe51040Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Gly Trp Val Arg Glu Thr Leu Gln5Lys Lys Val Leu Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr Phe Asp Thr Ser0Val Tyr Ser Gln Leu Pro Gly Gln Glu Ala Phe Met Arg Ala Gln Met5Glu Met Val Leu Glu Glu Asp Glu Val Tyr Asn Ala Ile Pro Ile Ile0Met Gly Ser Ser Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ala Leu Ile Thr Ala51120Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg His Tyr Lys Glu Met Leu5Glu Asp Lys Pro Glu Asp Thr Ala Thr Phe Ser Gly Asp Asp Phe Ser1140l1451150Cys Val Ala Pro Asn Val pro Leu Ser1155 1160(2)SEQ ID NO100信息(i)序列特征(A)長度1318個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置17..1255(xi)SEQ ID NO100序列描述AATTCGGCAC GAGCTT GGG GCT GTG GTC CTC CTT GGG GTC CTG GCT TCT49Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser1 5 10TAC CAC GGA TTC AAC TTG GAC GTG GAT GAG CCG GTG ATC TTC CAG GAA 97Tyr His Gly Phe Asn Leu Asp Val Asp Glu Pro Val Ile Phe Gln Glu15 20 25GAC GCA GCG GGC TTC GGG CAG AGC GTG ATG CAG TTT GGA GGA TCT CGA 145Asp Ala Ala Gly Phe Gly Gln Ser Val Met Gln Phe Gly Gly Ser Arg30 35 40CTC GTG GTG GGA GCC CCC CTG GCG GTG GTG TCG GCC AAC CAC ACA GGA 193Leu Val Val Gly Ala Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly45 50 55CGG CTG TAC GAG TGT GCG CCT GCC TCC GGC ACC TGC ACG CCC ATT TTC 241Arg Leu Tyr Glu Cys Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe60 65 70 75CCA TTC ATG CCC CCC GAA GCC GTG AAC ATG TCC CTG GGC CTG TCC CTG 289Pro Phe Met Pro Pro Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu80 85 90GCA GCC TCC CCC AAC CAT TCC CAG CTG CTG GCT TGT GGC CCG ACC GTG 337Ala Ala Ser Pro Asn His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val95 100 105CAT AGA GCC TGC GGG GAG GAC GTG TAC GCC CAG GGT TTC TGT GTG CTG 385His Arg Ala Cys Gly Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu110 115 120CTG GAT GCC CAC GCA CAG CCC ATC GGG ACT GTG CCA GCT GCC CTG CCC 433Leu Asp Ala His Ala Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro125 130 135GAG TGC CCA GAT CAA GAG ATG GAC ATT GTC TTC CTG ATT GAC GGC TCT 481Glu Cys Pro Asp Gln Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser140 145 150 155GGC AGC ATT AGC TCA AAT GAC TTC CGC AAG ATG AAG GAC TTT GTC AGA 529Gly Ser Ile Ser Ser Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg160 165 170GCT GTG ATG GAC CAG TTC AAG GAC ACC AAC ACC CAG TTC TCG CTG ATG 577Ala Val Met Asp Gln Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met175 180 185CAG TAC TCC AAT GTG CTG GTG ACA CAT TTC ACC TTC AGC AGC TTC CGG 625Gln Tyr Ser Asn Val Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg190 195 200AAC AGC TCC AAT CCT CAG GGC CTA GTG GAG CCC ATT GTG CAG CTG ACA 673Asn Ser Ser Asn Pro Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr205 210 215GGC CTC ACG TTC ACG GCC ACA GGG ATC CTG AAA GTG GTG ACA GAG CTG 721Gly Leu Thr Phe Thr Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu220 225 230 235TTT CAA ACC AAG AAC GGG GCC CGC GAA AGT GCC AAG AAG ATC CTC ATC 769Phe Gln Thr Lys Asn Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile240 245 250GTC ATC ACA GAT GGG CAG AAG TAC AAA GAC CCC CTG CAC TAC AGT GCT 817Val Ile Thr Asp Gly Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu His Tyr Ser Ala255 260 265GTC ATC CCA CAG GCA GAG CAG GCG GGC ATC ATC CGC TAC GCC ATC GGG 865Val Ile Pro Gln Ala Glu Gln Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly270 275 280GTG GGG GAC GCG TTC CAG AAA CCC ACA GCC AGG CAG GAG CTG GAC ACC 913Val Gly Asp Ala Phe Gln Lys Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asp Thr285 290 295ATC GCC TCC GAG CCG CCC GAC GCC CAC GTG TTC CAG GTG GAC AAT TTC 961Ile Ala Ser Glu Pro Pro Asp Ala His Val Phe Gln Val Asp Asn Phe300 305 310 315TCA GCA CTC AGC AGC ATC CAA AAG CAG CTG TAT GAC AGG ATC TTT GCC1009Ser Ala Leu Ser Ser Ile Gln Lys Gln Leu Tyr Asp Arg Ile Phe Ala320 325 330GTC GAG GGA ACC CTG TCA TCG GCA AGC ACC TCC TTC CAG CAT GAG ATG1057Val Glu Gly Thr Leu Ser Ser Ala Ser Thr Ser Phe Gln His Glu Met335 340 345TCC CAA GAG GGC TTC AGC TCA CTT CTC ACC ACG GAA GGA CCG GTG CTG1105Ser Gln Glu Gly Phe Ser Ser Leu Leu Thr Thr Glu Gly Pro Val Leu350 355 360GGG GCT GTG GGC AGC TTC GAT TGG TCC GGG GGT GCT TTC CTG TAC CCC1153Gly Ala Val Gly Ser Phe Asp Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro365 370 375CCC GGC GGG AGC CCC ACC TTC ATC AAC ATG TCT CAG CAG AAC GTG GAC1201Pro Gly Gly Ser Pro Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Gln Asn Val Asp380 385 390 395ATG AGG GAC TCC TAC CTG GGT GAG GAA GGG GTG GGG GTG GGG ACA GGT1249Met Arg Asp Ser Tyr Leu Gly Glu Glu Gly Val Gly Val Gly Thr Gly400 405 410GGG AGC TGAGGCTTGG GGTGGGGTGG GGCTGGGCTG GGAGGGGAGG GAAGAGGAGG 1305Gly SerGGAGAGGCAA AGA 1318(2)SEQ ID NO101信息(i)序列特征(A)長度413個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO101序列描述Gly Ala Val Val Leu Leu Gly Val Leu Ala Ser Tyr His Gly Phe Asn1 5 10 15Leu Asp Val Asp Glu Pro Val Ile Phe Gln Glu Asp Ala Ala Gly Phe20 25 30Gly Gln Ser Val Met Gln Phe Gly Gly Ser Arg Leu Val Val Gly Ala35 40 45Pro Leu Ala Val Val Ser Ala Asn His Thr Gly Arg Leu Tyr Glu Cys50 55 60Ala Pro Ala Ser Gly Thr Cys Thr Pro Ile Phe Pro Phe Met Pro Pro65 70 75 80Glu Ala Val Asn Met Ser Leu Gly Leu Ser Leu Ala Ala Ser Pro Asn85 90 95His Ser Gln Leu Leu Ala Cys Gly Pro Thr Val His Arg Ala Cys Gly100 105 110Glu Asp Val Tyr Ala Gln Gly Phe Cys Val Leu Leu Asp Ala His Ala115 120 125Gln Pro Ile Gly Thr Val Pro Ala Ala Leu Pro Glu Cys Pro Asp Gln130 135 140Glu Met Asp Ile Val Phe Leu Ile Asp Gly Ser Gly Ser Ile Ser Ser145 150 155 160Asn Asp Phe Arg Lys Met Lys Asp Phe Val Arg Ala Val Met Asp Gln165 170 175Phe Lys Asp Thr Asn Thr Gln Phe Ser Leu Met Gln Tyr Ser Asn Val180 185 190Leu Val Thr His Phe Thr Phe Ser Ser Phe Arg Asn Ser Ser Asn Pro195 200 205Gln Gly Leu Val Glu Pro Ile Val Gln Leu Thr Gly Leu Thr Phe Thr210 215 220Ala Thr Gly Ile Leu Lys Val Val Thr Glu Leu Phe Gln Thr Lys Asn225 230 235 240Gly Ala Arg Glu Ser Ala Lys Lys Ile Leu Ile Val Ile Thr Asp Gly245 250 255Gln Lys Tyr Lys Asp Pro Leu His Tyr Ser Ala Val Ile Pro Gln Ala260 265 270Glu Gln Ala Gly Ile Ile Arg Tyr Ala Ile Gly Val Gly Asp Ala Phe275 280 285Gln Lys Pro Thr Ala Arg Gln Glu Leu Asp Thr Ile Ala Ser Glu Pro290 295 300Pro Asp Ala His Val Phe Gln Val Asp Asn Phe Ser Ala Leu Ser Ser305 310 315 320Ile Gln Lys Gln Leu Tyr Asp Arg Ile Phe Ala Val Glu Gly Thr Leu325 330 335Ser Ser Ala Ser Thr Ser Phe Gln His Glu Met Ser Gln Glu Gly Phe340 345 350Ser Ser Leu Leu Thr Thr Glu Gly Pro Val Leu Gly Ala Val Gly Ser355 360 365Phe Asp Trp Ser Gly Gly Ala Phe Leu Tyr Pro Pro Gly Gly Ser Pro370 375 380Thr Phe Ile Asn Met Ser Gln Gln Asn Val Asp Met Arg Asp Ser Tyr385 390 395 400Leu Gly Glu Glu Gly Val Gly Val Gly Thr Gly Gly Ser405 410(2)SEQ ID NO102信息(i)序列特征(A)長度1484個堿基(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA(ix)特征(A)名稱/鍵CDS(B)位置1..1482(xi)SEQ ID NO102序列描述GAT GTC CAG AGC TCC ATC AGC TAT GAT CTG GCA CTG GAC CCA GGC CGC 48Asp Val Gln Ser Ser Ile Ser Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg1 5 10 15CTG GTC TCT CGG GCC ATT TTT CAA GAG ACC CAG AAC CAG ACT TTA ACT 96Leu Val Ser Arg Ala Ile Phe Gln Glu Thr Gln Asn Gln Thr Leu Thr20 25 30CGA AGG AAG ACC CTG GGG CTG GGG CGT CAC TGT GAA ACC ATG AGG CTA144Arg Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Arg His Cys Glu Thr Met Arg Leu35 40 45CTT TTG CCA GAC TGC GTA GAG GAC GTG GTG AAC CCC ATC GTC CTG CAC192Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Val Val Asn Pro Ile Val Leu His50 55 60CTC AAC TTC TCC CTG GAG GGA CAG CCA ATC CTC TCA TCC CAG AAT CTG240Leu Asn Phe Ser Leu Glu Gly Gln Pro Ile Leu Ser Ser Gln Asn Leu65 70 75 80CGC CCT GTG CTG GCC ACG GGC TCG CAG GAC CAC TTC ATT GCC TCC CTC288Arg Pro Val Leu Ala Thr Gly Ser Gln Asp His Phe Ile Ala Ser Leu85 90 95CCC TTT GAG AAG AAC TGC GGA CAA GAT CGC CTG TGT GAG GGG GAC CTG336Pro Phe Glu Lys Asn Cys Gly Gln Asp Arg Leu Cys Glu Gly Asp Leu100 105 110AGC ATC AGC TTC AAC TTC TCG GGC TTG AAT ACC CTG CTG GTG GGG CTC384Ser Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Asn Thr Leu Leu Val Gly Leu115 120 125TCC CTG GAG CTC ACA GTG ACA GTG ACC GTG CGG AAT GAG GGC GAG GAC432Ser Leu Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Arg Asn Glu Gly Glu Asp130 135 140TCC TAT GGG ACC GCC ATC ACC CTC TAC TAC CCA GCA GGG CTA TCC TAC480Ser Tyr Gly Thr Ala Ile Thr Leu Tyr TyT Pro Ala Gly Leu Ser Tyr145 150 155 160AGG CGG GTG TCG GGC CAG ACA CAA CCC TGG CAG CGC CCC CTG CAC CTC528Arg Arg Val Ser Gly Gln Thr Gln Pro Trp Gln Arg Pro Leu His Leu165 170 175GCA TGT GAG GCT GTA CCT ACC GAG AGC GAG GGC TTG AGG AGT ACC AGC576Ala Cys Glu Ala Val Pro Thr Glu Ser Glu Gly Leu Arg Ser Thr Ser180 185 190TGC AGC GTC AAC CAC CCC ATC TTC CAA GGG GGT GCT CAG GGC ACT TTC624Cys Ser Val Asn His Pro Ile Phe Gln Gly Gly Ala Gln Gly Thr Phe195 200 205GTA GTC AAG TTC GAT GTC TCC TCC AAG GCC AGC CTG GGT GAC AGG TTG672Val Val Lys Phe Asp Val Ser Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asp Arg Leu210 215 220CTC ATG GGG GCC AGT GCC AGC AGT GAG AAT AAT AAG CCT GCG AGC AAC720Leu Met Gly Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Ala Ser Asn225 230 235 240AAG ACC TCC TTT GAG CTG GAA CTG CCA GTG AAA TAC GCT GTC TAC ATG768Lys Thr Ser Phe Glu Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met245 250 255ATG ATC ACA AGG CAC GAA GGC TCC ACC AGG TTC TTC AAC TTT TCC ACT 816Met Ile Thr Arg His Glu Gly Ser Thr Arg Phe Phe Asn Phe Ser Thr260 265 270TCC GCT GAG AAG AGC AGC AAA GAG GCC GAG CAC CGC TAT CGG GTG AAC 864Ser Ala Glu Lys Ser Ser Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn275 280 285AAC CTG AGT CTG CGA GAT GTG GCC GTC AGC GTG GAC TTC TGG GCC CCC 912Asn Leu Ser Leu Arg Asp Val Ala Val Ser Val Asp Phe Trp Ala Pro290 295 300GTG CAG CTG AAC GGA GCA GCT GTG TGG GAC GTG GCG GTG GAG GCC CCT 960Val Gln Leu Asn Gly Ala Ala Val Trp Asp Val Ala Val Glu Ala Pro305 310 315 320GCC CAG AGC CTG CCC TGT GCG CGG GAG AGG GAA CCT CCG AGG ACC TCT1008Ala Gln Ser Leu Pro Cys Ala Arg Glu Arg Glu Pro Pro Arg Thr Ser325 330 335GAC CTG AGC CGG GTC CCG GGG AGT CCC GTG CTG GAC TGC AGC GTT GCG1056Asp Leu Ser Arg Val Pro Gly Ser Pro Val Leu Asp Cys Ser Val Ala340 345 350CAC TGC CTG AGG TTC CGC TGC CAC ATC CCC TCC TTC AGC GCC AAG GAG1104His Cys Leu Arg Phe Arg Cys His Ile Pro Ser Phe Ser Ala Lys Glu355 360 365GAG CTC CAC TTC ACC CTG AAG GGC AAC CTC AGC TTC GCC TGG GTC AGC1152Glu Leu His Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Ala Trp Val Ser370 375 380CAG ATG CTG CAA AAG AAG GTG TCG GTG GTG AGT GTG GCC GAG ATC ACC1200Gln Met Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr385 390 395 400TTC AAC AGG GCC GTG TAC TCC CAA GTT CCG GGC GAG GAG CCC TTT ATG1248Phe Asn Arg Ala Val Tyr Ser Gln Val Pro Gly Glu Glu Pro Phe Met405 410 415AGA GCC CAG GTG GAG ACG GTG CTG GAG GAG TAT GAG GAG CAC GAC CCC1296Arg Ala Gln Val Glu Thr Val Leu Glu Glu Tyr Glu Glu His Asp Pro420 425 430GTC CCC CTG GTG GTG GGC AGC TGT GTG GGC GGC CTG CTG CTG CTG GCT1344Val Pro Leu Val Val Gly Ser Cys Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala435 440 445CTC ATC TCA GCC ACC CTG TAC AAG CTT GGC TTC TTC AAG CGC CGG TAC1392Leu Ile Ser Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Arg Tyr450 455 460AAG GAG ATG CTG GGC GAG AAA CCG GGA GAC GCG GCC ACC TTC CCC GGG1440Lys Glu Met Leu Gly Glu Lys Pro Gly Asp Ala Ala Thr Phe Pro Gly465 470 475 480GAG GAC GCC AGC TGC GGG GCT TCA GAT TTG CCT TTG TCC CAG1482Glu Asp Ala Ser Cys Gly Ala Ser Asp Leu Pro Leu Ser Gln485 490TG 1484(2)SEQ ID NO103信息(i)序列特征(A)長度494個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓撲結構線性(ii)分子類型蛋白質(xi)SEQ ID NO103序列描述Asp Val Gln Ser Ser Ile Ser Tyr Asp Leu Ala Leu Asp Pro Gly Arg1 5 10 15Leu Val Ser Arg Ala Ile Phe Gln Glu Thr Gln Asn Gln Thr Leu Thr20 25 30Arg Arg Lys Thr Leu Gly Leu Gly Arg His Cys Glu Thr Met Arg Leu35 40 45Leu Leu Pro Asp Cys Val Glu Asp Val Val Asn Pro Ile Val Leu Mis50 55 60Leu Asn Phe Ser Leu Glu Gly Gln Pro Ile Leu Ser Ser Gln Asn Leu65 70 75 80Arg Pro Val Leu Ala Thr Gly Ser Gln Asp His Phe Ile Ala Ser Leu85 90 95Pro Phe Glu Lys Asn Cys Gly Gln Asp Arg Leu Cys Glu Gly Asp Leu100 105 110Ser Ile Ser Phe Asn Phe Ser Gly Leu Asn Thr Leu Leu Val Gly Leu115 120 125Ser Leu Glu Leu Thr Val Thr Val Thr Val Arg Asn Glu Gly Glu Asp130 135 140Ser Tyr Gly Thr Ala Ile Thr Leu Tyr Tyr Pro Ala Gly Leu Ser Tyr145 150 155 160Arg Arg Val Ser Gly Gln Thr Gln Pro Trp Gln Arg Pro Leu His Leu165 170 175Ala Cys Glu Ala Val Pro Thr Glu Ser Glu Gly Leu Arg Ser Thr Ser180 185 190Cys Ser Val Asn His Pro Ile Phe Gln Gly Gly Ala Gln Gly Thr Phe195 200 205Val Val Lys Phe Asp Val Ser Ser Lys Ala Ser Leu Gly Asp Arg Leu210 215 220Leu Met Gly Ala Ser Ala Ser Ser Glu Asn Asn Lys Pro Ala Ser Asn225 230 235 240Lys Thr Ser Phe Glu Leu Glu Leu Pro Val Lys Tyr Ala Val Tyr Met245 250 255Met Ile Thr Arg His Glu Gly Ser Thr Arg Phe Phe Asn Phe Ser Thr260 265 270Ser Ala Glu Lys Ser Ser Lys Glu Ala Glu His Arg Tyr Arg Val Asn275 280 285Asn Leu Ser Leu Arg Asp Val Ala Val Ser Val Asp Phe Trp Ala Pro290 295 300Val Gln Leu Asn Gly Ala Ala Val Trp Asp Val Ala Val Glu Ala Pro305 310 315 320Ala Gln Ser Leu Pro Cys Ala Arg Glu Arg Glu Pro Pro Arg Thr Ser325 330 335Asp Leu Ser Arg Val Pro Gly Ser Pro Val Leu Asp Cys Ser Val Ala340 345 350His Cys Leu Arg Phe Arg Cys His Ile Pro Ser Phe Ser Ala Lys Glu355 360 365Glu Leu His Phe Thr Leu Lys Gly Asn Leu Ser Phe Ala Trp Val Ser370 375 380Gln Met Leu Gln Lys Lys Val Ser Val Val Ser Val Ala Glu Ile Thr385 390 395 400Phe Asn Arg Ala Val Tyr Ser Gln Val Pro Gly Glu Glu Pro Phe Met405 410 415Arg Ala Gln Val Glu Thr Val Leu Glu Glu Tyr Glu Glu His Asp Pro420 425 430Val Pro Leu Val Val Gly Ser Cys Val Gly Gly Leu Leu Leu Leu Ala435 440 445Leu Ile Ser Ala Thr Leu Tyr Lys Leu Gly Phe Phe Lys Arg Arg Tyr450 455 460Lys Glu Met Leu Gly Glu Lys Pro Gly Asp Ala Ala Thr Phe Pro Gly465 470 475 480Glu Asp Ala Ser Cys Gly Ala Ser Asp Leu Pro Leu Ser Gln485 490
權利要求
1.命名為199M的雜交瘤。
2.由權利要求1的雜交瘤分泌的單克隆抗體。
全文摘要
公開了編碼被稱為α
文檔編號C12Q1/68GK1189851SQ97190406
公開日1998年8月5日 申請日期1997年2月24日 優先權日1996年2月22日
發明者W·M·高爾阿特英, M·范德維耶恩 申請人:艾科斯有限公司